陳 贇 ，石 慧 ，俸婷婷 ，張麗艷 董 秀 ，張金鶴 黃 蓓 ，周 英 （.貴州中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，貴陽(yáng) 55005；.貴州中醫(yī)藥大學(xué)藥食兩用資源應(yīng)用與開發(fā)研究中心，貴陽(yáng) 55005；.貴州三力制藥股份有限公司，貴州 安順 5600；.貴州省藥品監(jiān)督管理局檢查中心，貴陽(yáng) 55005）

朱砂根為紫金牛科植物朱砂根Ardisia crenataSims的干燥根，味微苦、辛，性平，長(zhǎng)于解毒消腫、活血止痛、祛風(fēng)除濕，用于治療咽喉腫痛、風(fēng)濕痹痛、跌打損傷；朱砂根含有香豆素類等成分，具有抗炎、抗菌、抗病毒等作用[1]。山豆根為豆科植物越南槐Sophora tonkinensisGagnep.的干燥根和根莖，味苦，性寒，長(zhǎng)于清熱解毒、消腫利咽，用于治療火毒蘊(yùn)結(jié)、乳蛾喉痹、咽喉腫痛、齒齦腫痛、口舌生瘡[2]；山豆根含有生物堿、黃酮類等成分，具有抗炎、抗腫瘤、抗病毒等作用[3—6]。兩藥合用，有增強(qiáng)利咽之效，如朱砂根-山豆根藥對(duì)是苗藥開喉劍噴霧劑的主要組成，兩藥用量超所用藥材總量的70%。

2020年《中國(guó)藥典》（一部）規(guī)定，以巖白菜素作為朱砂根的質(zhì)控成分，以苦參堿、氧化苦參堿的總含量作為山豆根的質(zhì)控評(píng)價(jià)指標(biāo)[2]。沒食子酸是一種天然多酚類化合物，具有抗氧化、抗菌、抗炎等多種生物活性；黃酮類成分被認(rèn)為是山豆根發(fā)揮藥效和產(chǎn)生毒性作用的物質(zhì)基礎(chǔ)之一[7]。同時(shí)，筆者通過(guò)文獻(xiàn)查詢發(fā)現(xiàn)，目前尚無(wú)朱砂根-山豆根藥對(duì)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)?？紤]到中藥成分復(fù)雜，單一成分難以全面反映藥材質(zhì)量，因此有必要對(duì)該藥對(duì)進(jìn)行質(zhì)量控制?；诖耍狙芯繑M采用高效液相色譜（HPLC）法建立朱砂根、山豆根及朱砂根-山豆根藥對(duì)的指紋圖譜，并同法測(cè)定沒食子酸、苦參堿、氧化苦參堿、巖白菜素和三葉豆紫檀苷的含量，旨在為朱砂根-山豆根藥對(duì)及其制劑的質(zhì)量控制提供參考。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用主要儀器包括Agilent 1260 型HPLC 儀（美國(guó)Agilent 公司）、AG135 型電子天平（瑞士Mettler Toledo 公司）、KQ-500DE 型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）等。

1.2 主要藥品與試劑

沒食子酸對(duì)照品（批號(hào)PS000688，純度≥98%）、苦參堿對(duì)照品（批號(hào)PS011495，純度≥98%）、氧化苦參堿對(duì)照品（批號(hào)PS011495，純度≥98%）、巖白菜素對(duì)照品（批號(hào)PS000991，純度≥98%）、三葉豆紫檀苷對(duì)照品（批號(hào)PS012410，純度≥98%）均購(gòu)自成都普思生物科技股份有限公司；乙腈為色譜純，磷酸為優(yōu)級(jí)純，其余試劑均為分析純，水為超純水。

10 批朱砂根飲片（編號(hào)Z1～Z10）、山豆根飲片（編號(hào)S1～S10）中，Z1～Z5、S1～S5樣品由貴州三力制藥有限公司提供，Z6～Z10、S6～S10樣品為本課題組野外采集后加工所得。所有飲片經(jīng)貴州中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院魏升華教授鑒定，分別為紫金?？浦参镏焐案鵄. crenataSims 的干燥根、豆科植物越南槐S. tonkinensisGagnep.的干燥根和根莖。取10批朱砂根、山豆根飲片，粉碎，取粗粉（過(guò)二號(hào)篩）各10 g，兩者依次配對(duì)，得到10 批朱砂根-山豆根藥對(duì)（編號(hào)YZS1～YZS10）。朱砂根、山豆根飲片來(lái)源信息見表1。

表1 朱砂根、山豆根飲片來(lái)源信息

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

以Agilent InfinityLab Poroshell HPH C18（250 mm×4.6 mm，4 μm）為色譜柱，以乙腈（A）-0.2%磷酸溶液（B）為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫（0～14 min，5%A；14～35 min，5%A→30%A；35～40 min，30%A→50%A；40～50 min，50%A→60%A）；流速為0.7 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm；柱溫為30 ℃；進(jìn)樣量為10 μL。

2.2 單煎、合煎凍干粉樣品的制備

2.2.1 朱砂根、山豆根的單煎凍干粉樣品

分別取10批朱砂根、山豆根飲片，粉碎，精密稱取粗粉（過(guò)二號(hào)篩）各10 g，分別置于圓底燒瓶?jī)?nèi)，加入8倍量水，浸泡4 h，煎煮2次（第1次煎煮2 h，第2次煎煮1 h）；合并2次煎煮液，用紗布（8層）濾過(guò)，置于70 ℃水浴中濃縮至近干，冷凍干燥，分別得朱砂根單煎凍干粉（編號(hào)為DZ1～DZ10）、山豆根單煎凍干粉（編號(hào)為DS1～DS10），每克凍干粉約相當(dāng)于生藥量5～7 g。

2.2.2 朱砂根-山豆根藥對(duì)的合煎凍干粉樣品

分別精密稱取“1.2”項(xiàng)下10批朱砂根-山豆根藥對(duì)，按“2.2.1”項(xiàng)下方法操作，即得朱砂根-山豆根藥對(duì)的合煎凍干粉（編號(hào)為ZS1～ZS10），每克凍干粉約相當(dāng)于生藥量6～8 g。

先從保時(shí)捷911 GT2 RS說(shuō)起。顯而易見的是，它和“日?！币辉~根本不搭邊，制約它成為日常座駕最重要的一點(diǎn)在于其所配備的桶形座椅。坐進(jìn)這輛保時(shí)捷之前，我告誡自己—休想從桶形座椅中獲得舒適的乘坐感受。在這輛保時(shí)捷911 GT2 RS的陪伴下，我從克羅地亞的里耶卡（Rijeka）啟程，途徑卡爾洛瓦茨（Karlovac），返回到奧地利的維也納。長(zhǎng)時(shí)間置身于這輛超級(jí)跑車中，其傾斜的座椅靠背和多點(diǎn)式安全帶無(wú)疑在考驗(yàn)著我的耐受力?；蛟S，這就是傳說(shuō)中的“增益其所不能”吧。

2.3 溶液的制備

2.3.1 單一對(duì)照品溶液

稱取沒食子酸、苦參堿、氧化苦參堿、巖白菜素、三葉豆紫檀苷對(duì)照品適量，精密稱定，加入10%甲醇，制成上述各成分質(zhì)量濃度分別為2.358、2.056、1.020、1.083、1.010 mg/mL的單一對(duì)照品溶液。

2.3.2 混合對(duì)照品溶液

分別吸取“2.3.1”項(xiàng)下各單一對(duì)照品溶液適量，加入10%甲醇，制成上述各成分質(zhì)量濃度分別為0.047、0.123、0.122、0.303、0.024 mg/mL 的混合對(duì)照品溶液，于4 ℃冰箱中保存，備用。

2.3.3 供試品溶液

稱取上述單煎凍干粉0.05 g、合煎凍干粉0.1 g，精密稱定，分別置于具塞錐形瓶中，精密加入10%甲醇20 mL，密塞，稱重，超聲（功率500 W、頻率40 kHz）處理30 min；放冷，再次稱重，用10%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻；取上清液，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得各供試品溶液。

2.4 HPLC指紋圖譜的建立

2.4.1 方法學(xué)考察

（1）取“2.3.3”項(xiàng)下合煎凍干粉供試品溶液（編號(hào)ZS8），按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6 次，以巖白菜素峰為參照，計(jì)算得各共有峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD 為0.23%～1.02%（n＝6），相對(duì)峰面積的RSD 為0.19%～1.75%（n＝6），表明方法精密度良好。（2）取“2.2.2”項(xiàng)下合煎凍干粉樣品（編號(hào)ZS8），共6份，按“2.3.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，以巖白菜素峰為參照，計(jì)算得各共有峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD 為0.04%～0.33%（n＝6），相對(duì)峰面積的RSD 為0.99%～2.90%（n＝6），表明方法重復(fù)性良好。（3）取“2.3.3”項(xiàng)下合煎凍干粉供試品溶液（編號(hào)ZS8），分別于室溫下放置0、3、6、12、24、48 h 時(shí)按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，以巖白菜素峰為參照，計(jì)算得各共有峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD 為0.12%～0.63%（n＝6），相對(duì)峰面積的RSD 為0.24%～2.77%（n＝6），表明供試品溶液在室溫下放置48 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.2 指紋圖譜建立

（1）分別取10 批朱砂根、山豆根單煎凍干粉供試品溶液和合煎凍干粉供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。將圖譜數(shù)據(jù)導(dǎo)入《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2012版）》，分別以DZ1、DS1、ZS1為參照?qǐng)D譜，采用中位數(shù)法，以多點(diǎn)校正進(jìn)行色譜峰自動(dòng)匹配，生成對(duì)應(yīng)的疊加指紋圖譜和對(duì)照?qǐng)D譜（ZR、SR、ZSR）。結(jié)果顯示，10 批朱砂根單煎凍干粉樣品圖譜中有5個(gè)共有峰，10批山豆根單煎凍干粉樣品圖譜中有10個(gè)共有峰，10批合煎凍干粉樣品圖譜中有14個(gè)共有峰。結(jié)果見圖1。

圖1 單煎凍干粉、合煎凍干粉樣品的HPLC 疊加指紋圖譜及對(duì)照?qǐng)D譜

（2）采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2012版）》對(duì)朱砂根、山豆根單煎凍干粉和合煎凍干粉樣品的指紋圖譜進(jìn)行相似度評(píng)價(jià)。結(jié)果顯示，朱砂根單煎凍干粉、山豆根單煎凍干粉、合煎凍干粉樣品色譜圖與對(duì)照?qǐng)D譜的相似度均大于0.90，表明各樣品質(zhì)量穩(wěn)定。

（3）將朱砂根、山豆根單煎凍干粉供試品溶液和合煎凍干粉供試品溶液（編號(hào)DZ1、DS1、ZS1）的圖譜與混合對(duì)照品溶液（按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定所得）進(jìn)行對(duì)比，結(jié)果顯示，1～3、8、12號(hào)峰來(lái)源于朱砂根，4～7、9～14 號(hào)峰來(lái)源于山豆根；通過(guò)保留時(shí)間結(jié)合紫外光譜特征，指認(rèn)3號(hào)峰為沒食子酸、4號(hào)峰為苦參堿、6號(hào)峰為氧化苦參堿、8 號(hào)峰為巖白菜素、14 號(hào)峰為三葉豆紫檀苷。結(jié)果見圖2。

圖2 單煎凍干粉、合煎凍干粉供試品溶液和混合對(duì)照品溶液的HPLC圖

2.4.3 單煎及合煎凍干粉樣品中各化學(xué)成分峰面積的變化

采用SPSS 26軟件，將朱砂根、山豆根單煎凍干粉和合煎凍干粉樣品指紋圖譜共有峰的峰面積進(jìn)行對(duì)比。數(shù)據(jù)以±s表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α＝0.05。結(jié)果顯示，相較于朱砂根單煎凍干粉樣品，合煎凍干粉樣品中1～2號(hào)峰顯著升高（P＜0.05）；3、8號(hào)峰的峰面積雖有所升高，但組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。相較于山豆根單煎凍干粉樣本，合煎凍干粉樣品中4～7、9、11 號(hào)峰的峰面積均有所降低，其中6 號(hào)峰顯著降低（P＜0.05），10、13～14 號(hào)峰的峰面積雖有所升高，但組間比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；朱砂根、山豆根共有的12號(hào)峰的峰面積均較單煎凍干粉樣品顯著升高（P＜0.05）。結(jié)果見表2。

表2 單煎及合煎凍干粉樣品中各化學(xué)成分峰面積的變化（±s，n＝10）

表2 單煎及合煎凍干粉樣品中各化學(xué)成分峰面積的變化（±s，n＝10）

a：與單煎凍干粉比較，P＜0.05。

峰號(hào)成分山豆根單煎凍干粉樣品1234567891 0沒食子酸苦參堿朱砂根單煎凍干粉樣品128.45±61.22 100.65±11.34 1 740.46±65.45氧化苦參堿2 715.23±28.95 891.48±28.91 1 937.68±71.37 5 659.06±19.31巖白菜素10 497.14±44.37 11 12 13 14 58.78±41.93三葉豆紫檀苷峰歸屬朱砂根朱砂根朱砂根山豆根山豆根山豆根山豆根朱砂根山豆根山豆根山豆根朱砂根、山豆根山豆根山豆根433.88±61.47 499.29±36.71 144.26±51.13 88.59±25.27 58.01±30.96 973.21±40.87合煎凍干粉樣品339.11±23.57a 467.70±38.66a 1 960.16±48.47 2 262.67±34.17 844.04±31.11 1 117.72±102.64a 5 609.31±21.63 12 668.95±36.52 411.34±43.02 587.55±30.26 133.93±45.57 107.50±20.36a 71.43±41.15 974.77±60.01

2.5 目標(biāo)化學(xué)成分的含量測(cè)定

2.5.1 專屬性試驗(yàn)

精密吸取“2.3.2”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液、“2.3.3”項(xiàng)下供試品溶液（編號(hào)ZS1）和10%甲醇（空白溶液），按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果顯示，在供試品溶液色譜圖中，在與混合對(duì)照品色譜圖相對(duì)應(yīng)的位置上均有相同保留時(shí)間的色譜峰，空白溶液無(wú)干擾。結(jié)果見圖3。

圖3 混合對(duì)照品溶液、合煎凍干粉供試品溶液和空白溶液的專屬性HPLC圖

2.5.2 線性關(guān)系考察

分別精密吸取“2.3.1”項(xiàng)下各單一對(duì)照品溶液適量，置于同一容量瓶中，加10%甲醇稀釋，得不同質(zhì)量濃度的系列線性溶液。取上述溶液按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，以各成分質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X）、峰面積為縱坐標(biāo)（Y）進(jìn)行線性回歸，結(jié)果見表3。

表3 沒食子酸等5種成分的回歸方程與線性范圍

2.5.3 精密度試驗(yàn)

取“2.3.3”項(xiàng)下合煎凍干粉供試品溶液（編號(hào)ZS8），按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果顯示，沒食子酸、苦參堿、氧化苦參堿、巖白菜素、三葉豆紫檀苷峰面積的RSD 分別為0.19%、0.37%、1.08%、0.18%、0.75%（n＝6），表明方法精密度較好。

2.5.4 重復(fù)性試驗(yàn)

取合煎凍干粉樣品（編號(hào)ZS8）適量，共6 份，按“2.3.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算含量。結(jié)果顯示，沒食子酸、苦參堿、氧化苦參堿、巖白菜素、三葉豆紫檀苷含量的RSD 分別為2.10%、2.36%、1.93%、2.90%、2.24%（n＝6），表明方法重復(fù)性良好。

2.5.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取“2.3.3”項(xiàng)下合煎凍干粉供試品溶液（編號(hào)ZS8），分別于室溫下放置0、3、6、12、24、48 h 時(shí)按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果顯示，沒食子酸、苦參堿、氧化苦參堿、巖白菜素、三葉豆紫檀苷峰面積的RSD分別為0.13%、1.18%、2.10%、0.18%、2.33%（n＝6），表明供試品溶液在室溫下放置48 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.5.6 加樣回收率試驗(yàn)

取合煎凍干粉樣品（編號(hào)ZS8），共6 份，每份1.0 g，精密稱定，分別精密加入等量的對(duì)照品，按“2.3.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算加樣回收率。結(jié)果顯示，沒食子酸、苦參堿、氧化苦參堿、巖白菜素、三葉豆紫檀苷的平均加樣回收率分別為102.46%、101.75%、99.56%、99.66%、100.68%，RSD 分別為2.21%、2.42%、1.97%、2.46%、2.78%（n＝6），表明方法準(zhǔn)確度良好。

2.5.7 樣品含量測(cè)定及轉(zhuǎn)移率計(jì)算

取朱砂根、山豆根單煎凍干粉和合煎凍干粉樣品，按“2.3.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各成分含量，每樣品平行測(cè)定2 次。按下式計(jì)算轉(zhuǎn)移率：轉(zhuǎn)移率＝每批合煎凍干粉含量/每批單煎凍干粉含量×100%。結(jié)果顯示，10批合煎凍干粉樣品中沒食子酸、苦參堿、氧化苦參堿、巖白菜素和三葉豆紫檀苷的含量分別為0.217 6～0.941 7、0.661 3～3.618 9、0.251 8～3.968 7、3.017 0～8.730 3、0.103 4～0.740 7 mg/g，平均含量分別為0.560 6、2.547 8、1.382 2、5.960 7、0.279 1 mg/g；朱砂根單煎凍干粉樣品中沒食子酸、巖白菜素的含量分別為0.183 5～1.136 1、1.710 4～9.195 3 mg/g，平均含量分別為0.499 3、4.962 6 mg/g；山豆根單煎凍干粉樣品中苦參堿、氧化苦參堿、三葉豆紫檀苷的含量分別為2.401 2～5.334 6、0.201 5～4.890 3、0.098 8～0.480 6 mg/g，平均含量分別為3.046 0、2.336 6、0.278 6 mg/g；沒食子酸、苦參堿、氧化苦參堿、巖白菜素和三葉豆紫檀苷的轉(zhuǎn)移率分別為39.52%～513.19%、25.82%～117.26%、8.87%～198.26%、53.38%～233.83%、47.18%～225.33%。除三葉豆紫檀苷外，合煎后其余成分的平均含量都有不同程度的變化，苦參堿、氧化苦參堿的平均含量均有所降低，其中氧化苦參堿降幅最大。結(jié)果見表4。

表4 沒食子酸等5種成分的含量測(cè)定結(jié)果（n＝2，mg/g）

3 討論

3.1 色譜條件的選擇

本課題組前期考察了乙腈-0.2%磷酸溶液、甲醇-0.2%磷酸溶液、乙腈-甲酸-水、甲醇-甲酸-水等流動(dòng)相體系對(duì)各待測(cè)成分色譜峰的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，以乙腈-0.2%磷酸溶液為流動(dòng)相時(shí)，所得色譜峰信息較為豐富且數(shù)量較多，峰形良好，故選擇乙腈-0.2%磷酸溶液作為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫；同時(shí)，本課題組進(jìn)行了200～800 nm 全波長(zhǎng)掃描，結(jié)果顯示，以210 nm 為檢測(cè)波長(zhǎng)時(shí)，所得色譜信息豐富且基線相對(duì)平穩(wěn)，故選擇檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm。

3.2 樣品的選擇

本研究以主要產(chǎn)區(qū)和企業(yè)所用原料主要產(chǎn)地的朱砂根-山豆根飲片所配伍的藥對(duì)為對(duì)象，建立了指紋圖譜并進(jìn)行了定量分析。從含量測(cè)定結(jié)果來(lái)看，不同批次樣品中各待測(cè)成分的含量波動(dòng)較大，可能與樣品產(chǎn)地批次及飲片的產(chǎn)地來(lái)源、加工方式、干燥方式、貯藏方式等不同有關(guān)，建議可對(duì)后續(xù)生產(chǎn)過(guò)程中的以上因素進(jìn)行控制。

3.3 指標(biāo)成分的選擇

經(jīng)查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，生物堿是山豆根的主要活性成分，以苦參堿和氧化苦參堿為主，具有抗病毒、抗炎、抗菌及抗腫瘤等作用；此外，黃酮類成分也是山豆根的活性成分之一，其主要成分三葉豆紫檀苷具有抗腫瘤、抗炎、抗氧化、抗菌、抗病毒、抗心腦血管疾病等作用[7—8]；朱砂根中巖白菜素、沒食子酸具有抗炎、抗菌、抗病毒等作用[9]。因此，本研究以沒食子酸、苦參堿、氧化苦參堿、巖白菜素、三葉豆紫檀苷為指標(biāo)成分進(jìn)行定量分析。

3.4 指紋圖譜與含量測(cè)定結(jié)果分析

本研究結(jié)果顯示，10 批朱砂根、山豆根單煎凍干粉和合煎凍干粉樣品圖譜中分別有5、10、14 個(gè)共有峰，從合煎凍干粉樣品指紋圖譜中指認(rèn)了沒食子酸、苦參堿、氧化苦參堿、巖白菜素、三葉豆紫檀苷5個(gè)共有峰；從朱砂根單煎凍干粉樣品指紋圖譜中指認(rèn)了沒食子酸、巖白菜素2個(gè)共有峰；從山豆根單煎凍干粉樣品指紋圖譜中指認(rèn)了苦參堿、氧化苦參堿、三葉豆紫檀苷3個(gè)共有峰；三者的相似度均大于0.90，表明不同產(chǎn)地藥材的整體質(zhì)量相對(duì)穩(wěn)定。含量測(cè)定結(jié)果顯示，10批合煎凍干粉樣品中沒食子酸、苦參堿、氧化苦參堿、巖白菜素和三葉豆紫檀苷的含量分別為0.217 6～0.941 7、0.661 3～3.618 9、0.251 8～3.968 7、3.017 0～8.730 3、0.103 4～0.740 7 mg/g；朱砂根單煎凍干粉樣品中沒食子酸、巖白菜素的含量分別為0.183 5～1.136 1、1.710 4～9.195 3 mg/g；山豆根單煎凍干粉樣品中苦參堿、氧化苦參堿、三葉豆紫檀苷的含量分別為2.401 2～5.334 6、0.201 5～4.890 3、0.098 8～0.480 6 mg/g，提示不同批次樣品中各成分含量存在一定差異；合煎凍干粉中苦參堿、氧化苦參堿的總含量較單煎樣品明顯降低，可能受原藥材產(chǎn)地不同和藥材相互作用的影響?？鄥A、氧化苦參堿的轉(zhuǎn)移率分別為25.82%～117.26%、8.87%～198.26%，轉(zhuǎn)移率相對(duì)較低，其原因可能為煎煮時(shí)間較長(zhǎng)，導(dǎo)致成分發(fā)生了氧化還原反應(yīng)；沒食子酸、巖白菜素、三葉豆紫檀苷的轉(zhuǎn)移率分別為39.52%～513.19%、53.38%～233.83%、47.18%～225.33%，轉(zhuǎn)移率相對(duì)較高，其原因可能與合煎過(guò)程中各成分的溶解性發(fā)生了變化有關(guān)[10]。有研究表明，生物堿類成分的功效、毒性之間存在一定的量效、量毒關(guān)系[11]，結(jié)合本文結(jié)果提示以生物堿類成分作為質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)，可為朱砂根-山豆根藥對(duì)及其制劑的質(zhì)量控制及相關(guān)研究奠定基礎(chǔ)，為質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立提供參考依據(jù)。

3.5 配伍前后目標(biāo)化學(xué)成分的變化及其意義

本研究發(fā)現(xiàn)，藥對(duì)配伍后指紋圖譜發(fā)生明顯變化，多數(shù)化學(xué)成分含量增加，個(gè)別成分含量降低，可能是因?yàn)楹飰A類成分的藥材與含有機(jī)酸的藥材共煎時(shí)，提高了合煎樣品的轉(zhuǎn)移率，從而影響了沒食子酸的含量；與此同時(shí)，合煎凍干粉樣品中苦參堿、氧化苦參堿的平均含量下降，可能與配伍合煎時(shí)主要有效成分的溶出相互影響有關(guān)[12]。

綜上所述，所建指紋圖譜及含量測(cè)定方法穩(wěn)定、可行，可用于朱砂根、山豆根及朱砂根-山豆根藥對(duì)的質(zhì)量控制；朱砂根-山豆根藥對(duì)合煎凍干粉樣品中苦參堿、氧化苦參堿的平均含量降低。