榮二花，楊亞杰，李昱櫻，吳玉香

（山西農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院，山西 太谷 030801）

棉花屬于錦葵科（Malvaceae）棉屬（Gossypium）一年生或多年生草本植物，分布于熱帶和亞熱帶地區(qū)。棉屬有53 個種，其中7 個為異源四倍體棉種（2n＝4x＝52），基因組為AD 組，其余的皆為二倍體棉種 （2n＝2x＝26），基因組分別為A、B、C、D、E、F、G 和K[1]。棉花有4 個栽培種，包括亞洲棉（G.arboreum）、草棉（G.herbaceum）、陸地棉 （G.hirsutum）和海島棉 （G.barbadense）。Wendel[2]和Palmer 等[3]認(rèn)為草棉是四倍體棉種A基因組的祖先供體種，但多年來普遍一致的看法是A1組的草棉和A2組的亞洲棉都可能是異源四倍體棉種A 基因組的祖先供體種[4]。草棉和亞洲棉均是二倍體栽培種，與陸地棉和海島棉相比，草棉的種植面積較小，但草棉具有其他棉種所沒有的優(yōu)良性狀，如極早熟性、耐高溫、抗旱、抗鹽堿和抗卷曲葉病毒等[5]。

多倍化是植物進(jìn)化及新物種形成的重要途徑。多倍體植物在自然界中普遍存在。目前關(guān)于植物多倍體的鑒定方法已有大量文獻(xiàn)報(bào)道。例如，陳敏敏等[6]利用流式細(xì)胞術(shù)對61 份百合（Lilium brownii）品種進(jìn)行染色體倍性分析，鑒定出了多個整倍體及非整倍體。Tr?nkner 等[7]對二倍體、三倍體、四倍體觀賞作物繡球（Hydrangea macrophylla）形態(tài)性狀進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)四倍體繡球器官巨型化。Li 等[8]通過誘變獲得了四倍體刺槐（Robinia pseudoacacia），其氣孔的長度和寬度均大于二倍體植株，但氣孔密度較小。四倍體黑果腺肋花楸（Aronia melanocarpaElliot）葉片中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、過氧化氫酶（catalase, CAT）的活性較二倍體顯著升高[9]。

本實(shí)驗(yàn)室在利用草棉進(jìn)行多倍體育種方面取得了創(chuàng)新性的進(jìn)展，首先利用秋水仙堿對二倍體草棉進(jìn)行染色體誘變，成功獲得草棉同源多倍體[10]；并經(jīng)流式細(xì)胞儀鑒定出同源三倍體和同源四倍體植株，然后對不同倍性的草棉進(jìn)行了形態(tài)學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)分析和相關(guān)序列擴(kuò)增多態(tài)性（sequence-related amplified polymorphism,SRAP）分子標(biāo)記鑒定[11]。另外，通過對不同倍性的草棉葉片進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序，獲得了草棉同源多倍體與二倍體間的差異表達(dá)基因信息，為研究同源多倍體的表型變化及其染色體加倍過程中遺傳物質(zhì)的變化提供了依據(jù)，并篩選到了與抗性相關(guān)的候選基因[12]。

本研究在前期實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步對草棉同源四倍體后代S1、S2的性狀進(jìn)行評價(jià)和比較，以期篩選出用于遺傳研究的、育性穩(wěn)定且綜合性狀優(yōu)良的草棉同源四倍體新種質(zhì)，拓寬棉花種質(zhì)資源。

1 材料與方法

1.1 材料

研究所用材料：二倍體紅星草棉、草棉同源四倍體S1和S2代。實(shí)驗(yàn)室前期以二倍體紅星草棉為材料，利用秋水仙堿對其進(jìn)行多倍體誘變，誘變株自交結(jié)鈴所得種子為S1，S1播種后長成健康植株并自交結(jié)鈴，收獲種子為S2。

1.2 材料種植

育苗主要有以下步驟：（1）浸種：將二倍體草棉、S1和S2種子分別置于60 ℃溫水中浸泡24 h。（2）移至培養(yǎng)皿：在培養(yǎng)皿底部墊上干凈濕潤的濾紙，將沖洗干凈的種子置于濾紙上，放恒溫（36 ℃）培養(yǎng)箱萌發(fā)。（3）移至廣口瓶：待種皮完全脫落，子葉展開時(shí)，將其移到營養(yǎng)水溶液（海藻濃縮植物營養(yǎng)液- 通用型和水的體積比為1∶400）中進(jìn)行培養(yǎng)。（4）移至營養(yǎng)缽：待幼苗長出大量側(cè)根且開始長出真葉時(shí)，可轉(zhuǎn)移至營養(yǎng)缽培養(yǎng)（基質(zhì)和營養(yǎng)土體積比為1∶3）。（5）移至花盆：待幼苗長出4～6 片真葉后，選取長勢良好的幼苗，將其移栽到花盆，花盆直徑為40 cm，每盆種植1株，置于溫室大棚內(nèi)生長。

1.3 倍性鑒定

待二倍體草棉、S1和S2長成健康植株且進(jìn)入花蕾期后，將棉花葉片送至金迪智遠(yuǎn)生物科技（北京）有限公司用流式細(xì)胞儀（Sysmex CyFlow Space，德國）進(jìn)行倍性鑒定。步驟如下：（1）取0.5 cm2的嫩葉切碎，放于培養(yǎng)皿中，加入400 μL裂解液靜置10 s，用于提取完整細(xì)胞核。（2）用30 μm 微孔過濾膜將細(xì)胞核提取混合液過濾至樣品管中。（3）向樣品管中加入1 600 μL 染液，染色約10 s。（4）上機(jī)測試。具體步驟參照儀器使用說明書。

1.4 植株形態(tài)鑒定

對經(jīng)過倍性鑒定的草棉同源多倍體植株進(jìn)行長勢和形態(tài)（包括整株、葉片和花等）觀察并拍照，比較分析其差異性，從形態(tài)學(xué)角度鑒定不同世代草棉同源四倍體棉株的差異。

1.4.1葉片形態(tài)與面積觀測。于花蕾期，在每株棉花相同節(jié)位處選擇無病蟲害且生長健康的葉片進(jìn)行拍照，再選擇3～5 片葉使用LI-3000A 便攜式葉面積分析儀（浙江托普云農(nóng)科技股份有限公司）測量葉面積和葉形指數(shù)（葉長與葉寬的比值），并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1.4.2花的形態(tài)性狀觀察。在開花期，對二倍體草棉、不同世代同源四倍體植株各摘取3～5 朵當(dāng)天開放的花，分析比較其苞葉、花冠、花斑、花藥及散粉情況等相關(guān)性狀的差異。

1.4.3種子及纖維性狀觀察。結(jié)鈴期選取二倍體草棉、同源四倍體S1和S2的可育植株，分別進(jìn)行單株結(jié)鈴數(shù)的統(tǒng)計(jì)。吐絮期收獲棉花進(jìn)行鈴室數(shù)、單鈴種子數(shù)的統(tǒng)計(jì)和纖維長度的測量，并對收獲的種子拍照。

1.5 細(xì)胞學(xué)觀察

1.5.1單個視野下的平均氣孔數(shù)量、氣孔長度和保衛(wèi)細(xì)胞內(nèi)葉綠體數(shù)量測定。取花蕾期新鮮棉花葉片，洗凈后切取主葉脈周圍1 cm×1 cm 大小葉片浸泡于卡諾氏固定液（無水乙醇與冰乙酸的體積比為3∶1）中脫色10 h 以上；將脫色后的葉片用蒸餾水清洗幾次，取約2 mm×2 mm 大小切片置于載玻片上，下表皮朝上，滴2 滴1%（體積分?jǐn)?shù)）的I2-KI 溶液染色2～5 min，蓋上蓋玻片；在顯微鏡（目鏡10 倍、物鏡40 倍）下，共取10 個視野統(tǒng)計(jì)單個視野下的平均氣孔數(shù)量；在顯微鏡（目鏡10 倍、物鏡100 倍）下，共選取30 個氣孔測量氣孔長度，并選取20 對保衛(wèi)細(xì)胞，統(tǒng)計(jì)保衛(wèi)細(xì)胞中的葉綠體數(shù)量，計(jì)算其平均值。

1.5.2花粉母細(xì)胞減數(shù)分裂及花粉粒統(tǒng)計(jì)。在草棉同源四倍體S1和S2的開花期，取新鮮的花蕾（或當(dāng)天開放的花朵），用鑷子剝?nèi)グ~、花萼和花瓣，將4～6 ?；ㄋ幹糜诟蓛糨d玻片上，滴加改良的卡寶品紅染液，用解剖針將花藥輕輕壓碎，擠出花粉母細(xì)胞，用鑷子去除肉眼可見的雜質(zhì)，蓋上蓋玻片。在顯微鏡（目鏡10 倍×物鏡40 倍）下選取600 個花粉母細(xì)胞進(jìn)行減數(shù)分裂觀察，并統(tǒng)計(jì)多分體和花粉粒的數(shù)量。

1.6 生理生化指標(biāo)測定

1.6.1抗氧化酶活性和滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)含量的測定。開花期選取草棉二倍體、同源四倍體S1和S2的幼嫩葉片迅速放入—80 ℃冰箱保存，依照王三根[13]的方法測定SOD 活性、過氧化物酶（peroxidase, POD）活性、CAT 活性和脯氨酸含量；參考高俊鳳[14]的方法測定丙二醛（malondialdehyde,MDA）、可溶性蛋白和可溶性糖的含量。所有測定指標(biāo)均設(shè)置3 個生物學(xué)重復(fù)。

1.6.2葉綠素含量測定。在花蕾期，對草棉同源四倍體S1和S2進(jìn)行SPAD（soil and plant analyzer development, SPAD）值測定，以SPAD 值表征葉綠素含量。使用SPAD-502 手持葉綠素儀（日本柯尼卡美能達(dá)），選取每株棉花的底部、中部和頂部的健康葉片進(jìn)行測量。

2 結(jié)果與分析

2.1 倍性鑒定結(jié)果

經(jīng)流式細(xì)胞儀測定，二倍體草棉（材料1，對照）的主峰熒光強(qiáng)度為89.68，草棉同源多倍體S1植株（材料2～6）的主峰熒光強(qiáng)度為139.51～187.80，草棉同源多倍體S2植株（材料7～13）的主峰熒光強(qiáng)度為157.11～191.26（表1）。結(jié)果表明，材料2（S1植株）為三倍體，材料7（S2植株）為非整倍體，其他材料（材料3～6 和材料8～13）均為四倍體。

表1 草棉同源四倍體S1 和S2 的倍性鑒定結(jié)果Table 1 Ploidy identification results of autopolyploid S1 and S2 of G.herbaceum

2.2 形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果

2.2.1植株、葉片及花的形態(tài)比較。草棉同源四倍體S1和S2植株均直立生長。其中S1枝葉較少，葉色為濃綠色或翠綠色；S2植株枝葉茂盛，葉色均為濃綠色（圖1）。S1和S2的葉片均呈闊葉狀，S2較S1葉面積增加、葉片增厚，S2表現(xiàn)出更強(qiáng)的多倍體優(yōu)勢（圖1）。

圖1 草棉同源四倍體植株（A）和葉片形態(tài)（B）比較Fig.1 Comparison of autotetraploid plants (A) and leaf morphology (B) of G.herbaceum

草棉同源四倍體S2的葉面積極顯著高于S1，但S1和S2的葉形指數(shù)（葉長/ 葉寬）無顯著差異（表2），說明與S1相比，S2的葉長和葉寬等比例增大。上述結(jié)果在一定程度上表明同源四倍體植株葉片表型性狀正在逐漸穩(wěn)定。

表2 草棉同源四倍體葉片形態(tài)指標(biāo)分析Table 2 Analysis of the morphologic parameters of leaves of autotetraploid G.herbaceum

對草棉同源四倍體S1和S2花的形態(tài)進(jìn)行比較。S1的花冠呈黃色，紫紅色花斑，花藥淡黃色、數(shù)量較少、部分散粉；S2的花冠也為黃色，但較S1顏色更深，花瓣和苞葉均較S1寬大，有深紫紅色花斑，花藥黃色、數(shù)量較多、大部分散粉（圖2）。

圖2 草棉同源四倍體花的形態(tài)比較Fig.2 Comparison of flower morphology of autotetraploid G.herbaceum

2.2.2S1 與S2 代結(jié)鈴數(shù)統(tǒng)計(jì)及種子性狀比較。與二倍體親本相比，草棉同源四倍體S1和S2的單株結(jié)鈴數(shù)和單鈴種子數(shù)均明顯減少，鈴室數(shù)也有所下降（表3）。材料3～6（S1）共收獲15 個棉鈴，34 粒種子，單株結(jié)鈴數(shù)分別為2、3、4、6，單株種子數(shù)分別為5、9、8、12。材料8～13（S2）共收獲23 個棉鈴，50 粒種子，單株結(jié)鈴數(shù)分別為2、3、3、4、6、5，單株種子數(shù)分別為4、6、5、11、14、10。說明S2育性較S1提高，但同一世代的不同植株之間仍存在明顯差異，育性仍需進(jìn)一步恢復(fù)。

表3 草棉二倍體和同源四倍體的種子性狀比較Table 3 Comparison of seed characters between diploid and autotetraploid of G.herbaceum

草棉同源四倍體S1和S2種子均大于二倍體種子，且隨著世代遞增，種子的大小已無明顯變化（圖3）。草棉二倍體、同源四倍體S1和S2的纖維均細(xì)長、呈白色，四倍體S1和S2的纖維長度均顯著長于二倍體，但S1和S2之間差異不顯著（表3）。結(jié)果表明，草棉同源四倍體S1和S2植株在種子大小和纖維長度方面均體現(xiàn)了多倍體優(yōu)勢；且隨著世代的遞增，種子表型和纖維長度已趨于穩(wěn)定，S1和S2的相關(guān)性狀無顯著差異。此外，在相同種植條件下，四倍體開始吐絮的時(shí)間比二倍體晚30 d 左右。

圖3 草棉二倍體和同源四倍體的種子大小及纖維長度比較Fig.3 Comparison of seed size and fiber length between diploid and autotetraploid of G.herbaceum

2.3 細(xì)胞學(xué)鑒定結(jié)果

2.3.1葉片氣孔性狀和葉綠體數(shù)量。與S1相比，S2保衛(wèi)細(xì)胞對的長度、寬度明顯增加（圖4）。單個視野下，S1和S2的平均氣孔數(shù)量存在顯著差異，S1顯著高于S2；氣孔長度和保衛(wèi)細(xì)胞對中葉綠體數(shù)量的差異均達(dá)到極顯著水平，S2均極顯著高于S1（表4）。結(jié)果表明，草棉同源四倍體S2代的氣孔大小和葉綠體數(shù)量表現(xiàn)出更強(qiáng)的多倍體優(yōu)勢。

圖4 草棉同源四倍體的葉片氣孔比較Fig.4 Comparison of leaf stomata of autotetraploid G.herbaceum

表4 草棉同源四倍體的葉片氣孔性狀的統(tǒng)計(jì)Table 4 Statistics of stomatal character of leaves of autotetraploid G.herbaceum

2.3.2花粉母細(xì)胞減數(shù)分裂及花粉粒形態(tài)。為進(jìn)一步研究草棉同源四倍體不同世代的育性恢復(fù)情況，對S1和S2的減數(shù)分裂進(jìn)行觀察，二者的減數(shù)分裂行為均有正常和異常2 種表現(xiàn)，S2減數(shù)分裂見圖5。在S2的600 個多分體中，分別有2個單分體（0.33%）、4 個二分體（0.67%）、20 個三分體（3.33%）、511 個正常四分體（85.17%）、7 個異常四分體 （1.17%）和56 個其他多分體（9.33%）（表5）。異常的多分體不能形成正常的花粉粒（圖6），在S2的600 個花粉粒中，有524個正?；ǚ哿＃?7.33%）、76 個異常花粉粒（12.67%）。

圖5 草棉同源四倍體S2 代減數(shù)分裂第二次分裂末期Fig.5 Meiosis of telophase Ⅱin autotetraploid S2 generation of G.herbaceum

圖6 草棉同源四倍體S2 代正常和異?；ǚ哿ig.6 Normal and abnormal pollen grains of autotetraploid S2 generation of G.herbaceum

表5 草棉同源四倍體S2 代減數(shù)第二次分裂末期多分體數(shù)量統(tǒng)計(jì)Table 5 Statistics of polyad in telophase II of autotetraploid S2 generation of G.herbaceum

前期研究結(jié)果顯示：草棉同源四倍體S1減數(shù)分裂中正常四分體比例為73.67%，正?；ǚ哿１壤秊?7.67%[11]。與S1相比，S2正常四分體和正?；ǚ哿５谋壤忻黠@上升，表明同源四倍體草棉的育性提高并趨于穩(wěn)定。

2.4 生理生化指標(biāo)測定

從二倍體到同源四倍體S1再到S2，隨著世代的遞增，草棉葉片的SOD 活性、POD 活性、CAT活性、MDA 含量、可溶性蛋白含量、可溶性糖含量、脯氨酸含量和葉綠素含量均呈上升趨勢，且同源四倍體S2與二倍體之間上述各指標(biāo)的差異均達(dá)到顯著水平。與二倍體親本相比，四倍體S2的SOD、POD 和CAT 活性分別增加了40.71%、28.49%和210.96%，MDA、可溶性蛋白、可溶性糖、脯氨酸和葉綠素的含量分別提高了72.55%、48.51%、2.42%、38.93%和44.19%。同源四倍體S1的SOD 活性、CAT 活性、MDA 含量、可溶性糖含量和葉綠素含量均顯著高于二倍體親本。同源四倍體S2的CAT 活性、MDA 含量、可溶性蛋白含量、葉綠素含量均顯著高于S1（圖7）。

圖7 草棉二倍體和同源四倍體S1、S2 代生理生化指標(biāo)的比較Fig.7 Comparison of physiological and biochemical indexes between diploid and autotetraploid of G.herbaceum

2.5 草棉三倍體變異株表型

利用流式細(xì)胞儀對S1植株進(jìn)行倍性鑒定，材料2 被確定為三倍體植株。該植株葉片皺縮、外翻，花蕾合并在一起，成簇生長，苞葉很長，開花時(shí)苞葉未展開、呈筒狀（圖8），從表型觀察也可初步判斷該植株不是同源四倍體。

圖8 草棉同源四倍體S1 與三倍體的表型比較Fig.8 Phenotypes comparison of autotetraploid S1 and triploid of G.herbaceum

3 討論

3.1 草棉同源四倍體的遺傳解析及利用價(jià)值

通過形態(tài)觀察可以初步篩選出染色體數(shù)目變異植株，這樣能大大減少工作量，也是最簡單快速的方法。器官巨大化是多倍體植株重要的特性之一[15-16]，同時(shí)，通過解剖葉片結(jié)構(gòu)，觀測氣孔大小、氣孔密度和保衛(wèi)細(xì)胞對中的葉綠體數(shù)量也可以間接鑒定植株倍性[8]。本研究發(fā)現(xiàn)隨著染色體倍數(shù)的增加，草棉葉片氣孔密度降低、氣孔變大、葉綠體數(shù)目增多。對植株生理生化指標(biāo)進(jìn)行測定，可以幫助我們了解植物如何適應(yīng)環(huán)境變化等。其中SOD、POD、CAT 的活性可以反映植物遭受逆境傷害的程度及自身的抗氧化能力[17]；可溶性糖為植物中多種物質(zhì)的合成提供能量和原料；可溶性蛋白含有多種氨基酸，能為細(xì)胞發(fā)育提供保護(hù)；脯氨酸參與植物體內(nèi)應(yīng)激反應(yīng)[18]。本研究對同源四倍體和二倍體草棉葉片的生理生化指標(biāo)進(jìn)行測定，結(jié)果表明同源四倍體S2葉片的SOD、POD、CAT 活性及MDA、可溶性糖、可溶性蛋白、脯氨酸和葉綠素含量均顯著高于二倍體，且S2的各項(xiàng)測定生理指標(biāo)值均高于S1，進(jìn)一步說明四倍體植株發(fā)育過程中積累了更多的滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)，可能有利于提高其抵御不良環(huán)境脅迫的能力。有趣的是，通過多年在溫室內(nèi)的觀察發(fā)現(xiàn)：草棉同源四倍體植株的抗寒性明顯增強(qiáng)，在北方溫室能夠成功越冬；二倍體草棉不抗寒，在同樣的溫室環(huán)境條件下全部死亡。后期可篩選出育性穩(wěn)定、抗寒、抗旱的草棉同源四倍體用于進(jìn)一步研究或生產(chǎn)應(yīng)用。

同源多倍體是遺傳學(xué)和育種學(xué)研究中的重要材料，既可作為親本以提高遠(yuǎn)緣物種間的雜交成功概率，又可通過與原二倍體雜交、回交，在其后代中篩選出各種非整倍體，從而為該物種的基因定位、連鎖群分析和分子標(biāo)記開發(fā)利用等研究奠定基礎(chǔ)[19-21]。同時(shí)，由于染色體加倍導(dǎo)致基因產(chǎn)生劑量效應(yīng)，多倍體植物在產(chǎn)量、品質(zhì)和抗性等方面的表現(xiàn)均優(yōu)于二倍體。本研究獲得的草棉同源四倍體為棉花種質(zhì)創(chuàng)新提供了新材料，也為遺傳研究提供了有價(jià)值的中間材料。

3.2 多倍體育性探討

前期研究結(jié)果表明草棉同源四倍體植株在形態(tài)學(xué)、細(xì)胞學(xué)和SRAP 分子標(biāo)記鑒定方面都表現(xiàn)出了多倍體優(yōu)勢[11]。在前期研究的基礎(chǔ)上，本研究繼續(xù)對草棉同源四倍體S1和S2進(jìn)行育性分析，結(jié)果表明：與S1相比，S2在株型、葉片大小、花朵形態(tài)、種子大小及纖維長度、葉片氣孔性狀、花粉母細(xì)胞減數(shù)第二次分裂末期正常四分體比例、花粉粒形態(tài)、葉片多個生理生化指標(biāo)等方面都表現(xiàn)出更加明顯的多倍體優(yōu)勢。本研究中草棉同源四倍體與二倍體相比，單株結(jié)鈴數(shù)和單鈴種子數(shù)均有所降低；但在種子大小和纖維長度方面，四倍體明顯優(yōu)于二倍體，并且S1與S2無明顯差異。在同一世代的不同植株之間單株結(jié)鈴數(shù)和單鈴種子數(shù)差異明顯，單株結(jié)鈴最少2 個，最多6 個，且單鈴的種子最少為2 粒、最多為5 粒。表明同源四倍體草棉的育性和產(chǎn)量還有待進(jìn)一步穩(wěn)定和提高。

與草棉同源四倍體S1相比，S2的正常四分體和正?；ǚ哿１壤忻黠@升高，說明同源四倍體減數(shù)分裂行為趨向正常。同源四倍體的產(chǎn)生是二倍體親本基因組直接加倍形成的，所引發(fā)的變異通常是有利性狀和不利性狀結(jié)合在一起，后代表現(xiàn)難以預(yù)料。新形成的多倍體基因組要經(jīng)歷劇烈的沖擊和重構(gòu)過程，這個過程可被稱為新多倍體的二倍化過程[22]，這些沖擊和重構(gòu)發(fā)生在DNA序列水平[23]、基因組甲基化水平[24]、轉(zhuǎn)座子水平[25]、基因表達(dá)水平上[26]的變化，這些變化的過程可能是非隨機(jī)的、快速的[27]，并且這些不同類型的變化之間也能夠相互影響，共同調(diào)控植物新多倍體的二倍化進(jìn)程[28-29]。同時(shí)，新形成的多倍體還必須經(jīng)過一個細(xì)胞學(xué)的二倍化過程，以確保同源染色體嚴(yán)格配對，阻止非同源染色體或部分同源染色體之間的配對[30]，其調(diào)控因素也有很多，包括染色體同源配對基因[31]、著絲粒和端粒[32]、細(xì)胞周期調(diào)控因子[33]、環(huán)境條件[34]等。綜上，各種因素相互作用共同控制著多倍體穩(wěn)定性的恢復(fù)。

4 結(jié)論

利用流式細(xì)胞儀在草棉同源四倍體后代S1中鑒定出1 株三倍體和4 株四倍體，在S2中鑒定出1 株非整倍體和6 株四倍體。形態(tài)學(xué)和細(xì)胞學(xué)分析及生理生化指標(biāo)測定表明，在株型、葉片大小、花朵形態(tài)、種子大小及纖維長度、葉片氣孔性狀、花粉母細(xì)胞減數(shù)第二次分裂末期正常四分體比例、花粉粒形態(tài)、葉片多個生理生化指標(biāo)等方面，S2較S1表現(xiàn)出明顯的多倍體優(yōu)勢，且從S1到S2呈現(xiàn)穩(wěn)定的育性恢復(fù)趨勢。