賴平安，李勐偉，翟秀娟，田海燕

（1.北京出入境檢驗(yàn)檢疫局，北京 朝陽(yáng)100026 ；2.西南大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，重慶 北碚400716；3.北京市畜牧總站，北京 朝陽(yáng)100107）

隨著城市寵物犬、貓飼養(yǎng)數(shù)量不斷增加，寵物與人類關(guān)系日益密切，寵物與人類共患病的關(guān)系應(yīng)高度重視。寵物飼養(yǎng)量逐年攀升，促進(jìn)寵物跨地區(qū)、跨國(guó)交易，在這過(guò)程中增加了傳染病傳播風(fēng)險(xiǎn)，其中因?qū)櫸飻y帶的人獸共患傳染病容易感染寵物主人，直接造成寵物源性人獸共患病，有的甚至在人群中感染傳播，嚴(yán)重威脅公共衛(wèi)生安全。同時(shí)寵物主人罹患的某些傳染病可感染寵物，再通過(guò)寵物間的直接或間接傳播進(jìn)一步感染人群。為初步了解北京城區(qū)家養(yǎng)寵物犬、貓弓形體病、利什曼病、新孢子蟲(chóng)病及布魯菌病的流行情況，給進(jìn)一步防控寵物源性人獸共患病奠定基礎(chǔ)，開(kāi)展了此項(xiàng)工作。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物弓形蟲(chóng)抗體酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒（生產(chǎn)批號(hào)：464）；犬新孢子蟲(chóng)抗體酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒（生產(chǎn)批號(hào)：513）；利什曼抗體酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒（生產(chǎn)批號(hào)：434）；均為法國(guó)ID-VET 公司產(chǎn)品，購(gòu)于深圳市青珊瑚科技有限公司。利什曼抗體檢測(cè)試劑盒僅用于犬血清檢測(cè)。其余試劑盒可用于犬、貓血清。

1.2 光滑型、犬型布魯菌虎紅平板凝集抗原及陰、陽(yáng)性血清，購(gòu)自中國(guó)疾病預(yù)防控制中心傳染病預(yù)防控制所。

1.3 被檢血清 于2013 年4-6 月，從北京市區(qū)12家大中型動(dòng)物醫(yī)院收集的186 份家養(yǎng)寵物犬以及48 份家養(yǎng)寵物貓的血清樣品，所有犬、貓不是從交易市場(chǎng)購(gòu)買獲得，且確保其至少上兩代均為家養(yǎng)。常規(guī)采血、分離血清，-20 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 主要儀器 不同規(guī)格移液器及配套吸頭，Thermo Labsystems Multiskan Ascent 全自動(dòng)酶標(biāo)儀、Thermo Labsystems Wellwash AC 洗板機(jī)。

1.5 方法

1.5.1 弓形蟲(chóng)、犬新孢子蟲(chóng)、利什曼ELISA 抗體檢測(cè)方法 分別按照法國(guó)ID-VET 公司產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作并判定結(jié)果。主要試驗(yàn)步驟：血清經(jīng)稀釋后，加入酶標(biāo)板孔內(nèi)，反應(yīng)一定時(shí)間，洗板；加入抗體-酶復(fù)合物，反應(yīng)一定時(shí)間，洗板；加底物，反應(yīng)一定時(shí)間；加終止液，酶標(biāo)儀測(cè)OD 值；判定結(jié)果。

1.5.2 布魯菌病檢測(cè)-虎紅平板凝集試驗(yàn)

每份血清同時(shí)進(jìn)行光滑型和犬型布魯菌抗原檢測(cè)。具體方法為：在潔凈的玻璃板上間隔一定距離分別滴加25 μL 光滑型、犬型布魯菌虎紅平板凝集抗原，分別加入等量血清，混勻，3 min。內(nèi)觀察結(jié)果。同時(shí)設(shè)陰、陽(yáng)性血清對(duì)照。凡出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集顆粒為陽(yáng)性，無(wú)凝集顆粒，呈均勻粉紅色者為陰性。

2 結(jié)果

對(duì)2013 年4-6 月間來(lái)自北京市12 家大中型寵物醫(yī)院的186 份家養(yǎng)犬以及48 份家貓的血清樣品進(jìn)行ELISA 檢測(cè)和虎紅平板凝集試驗(yàn)。結(jié)果見(jiàn)表1、表2。

表1 犬血清檢測(cè)結(jié)果

表2 貓血清檢測(cè)結(jié)果

在186 份犬血清中，弓形體抗體陽(yáng)性6 份，陽(yáng)性率為3.2%（6/186），可疑樣品2 份，其余為陰性；新孢子蟲(chóng)抗體陽(yáng)性1 份，陽(yáng)性率為0.5%；利什曼抗體陽(yáng)性樣品2 份，陽(yáng)性率為1.1%，可疑樣品4份，其余為陰性；布病抗體均為陰性。

在48 份貓血清中，弓形蟲(chóng)抗體陽(yáng)性2 份，陽(yáng)性率為4.2%（2/48）；新孢子蟲(chóng)抗體全部為陰性；布病抗體全部為陰性。

3 討論

弓形體是存在于寵物中的重要人獸共患病病原之一，呈世界性流行，對(duì)人類，尤其是孕婦及兒童危害極大，可造成孕婦早產(chǎn)、流產(chǎn)、胎兒發(fā)育畸形等[1]。犬、貓多為隱性感染。本次調(diào)查針對(duì)北京市12 家大中型寵物醫(yī)院收集的城區(qū)飼養(yǎng)犬、貓血清共234 份，犬、貓血清弓形體抗體陽(yáng)性率分別是3.2%和4.2%。本次樣品全部取自長(zhǎng)期家養(yǎng)寵物，其上兩代均為家養(yǎng)而非從交易市場(chǎng)購(gòu)買，弓形體感染率較低。一些家庭既養(yǎng)犬又養(yǎng)貓，一旦感染，不同動(dòng)物間相互感染傳播，危害人體健康。本次流行病學(xué)調(diào)研過(guò)程中，在犬、貓共同飼養(yǎng)的家庭出現(xiàn)下述幾種情況：犬感染弓形體，而貓未感染；貓感染弓形體而犬未感染；犬、貓同時(shí)感染。這可能與犬、貓寵物混養(yǎng)接觸的時(shí)間長(zhǎng)短有關(guān)，依據(jù)弓形體病流行病學(xué)特征，犬、貓共同飼養(yǎng)的家庭，一旦出現(xiàn)感染個(gè)體將會(huì)互相傳染，進(jìn)而危害人體健康。因此飼養(yǎng)犬、貓或混養(yǎng)的家庭，應(yīng)定期用適當(dāng)、可靠的方法進(jìn)行檢測(cè)，并根據(jù)結(jié)果采取針對(duì)性預(yù)防控制措施。

新孢子蟲(chóng)?。∟eosporasis）是由犬新孢子蟲(chóng)（Neospora canium）寄生于犬、牛、馬、羊等多種宿主動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)而引起的一種原蟲(chóng)病，犬即可作為該蟲(chóng)的終末宿主,也可以作為中間宿主，但犬科動(dòng)物是惟一的終末宿主。該蟲(chóng)主要引起孕畜流產(chǎn)、死胎以及新生胎兒運(yùn)動(dòng)障礙和神經(jīng)系統(tǒng)疾病[2]。新孢子蟲(chóng)病是世界性奶牛流產(chǎn)的主要病因, 奶牛感染犬新孢子蟲(chóng)病與奶牛場(chǎng)飼養(yǎng)看護(hù)犬有密切的關(guān)系。本次試驗(yàn)調(diào)查結(jié)果，186 只犬中只有1 只犬新孢子蟲(chóng)抗體陽(yáng)性，陽(yáng)性率為0.5%，應(yīng)引起足夠重視。由于本次調(diào)查樣品數(shù)量較少，為更好了解北京城區(qū)家養(yǎng)犬的新孢子蟲(chóng)感染狀況，需進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量，開(kāi)展更深入細(xì)致的研究工作。

家犬是利什曼原蟲(chóng)主要的保蟲(chóng)宿主，且犬在人類感染利什曼病的過(guò)程中具有非常重要的作用。本次試驗(yàn)從186 只犬中檢測(cè)出2 只陽(yáng)性，其中1 只犬利什曼抗體和弓形蟲(chóng)抗體均為陽(yáng)性。據(jù)報(bào)道利什曼病原與恰加斯、瘧疾、血吸蟲(chóng)、弓形蟲(chóng)病原具有相似成分，抗體檢測(cè)時(shí)存在假陽(yáng)性，可用其他技術(shù)手段進(jìn)行鑒別。利什曼病是由杜氏利什曼原蟲(chóng)寄生于內(nèi)臟而引起的人畜共患慢性寄生蟲(chóng)病，自然感染是通過(guò)白蛉傳播此病，由病犬間接傳染而使人致病。多數(shù)犬感染后處于無(wú)明顯癥狀的帶蟲(chóng)狀態(tài)，少數(shù)犬出現(xiàn)被毛粗糙無(wú)光澤，甚至脫落，皮膚病變多見(jiàn)于頭部，尤其是耳、鼻及眼周圍。在我國(guó)北部，保蟲(chóng)宿主為犬和犬屬動(dòng)物，20 世紀(jì)40 年代，北京地區(qū)存在散發(fā)病例，但隨后的較長(zhǎng)時(shí)間未見(jiàn)進(jìn)一步研究報(bào)道。隨著寵物犬飼養(yǎng)數(shù)量日益增多，犬與人類關(guān)系日益密切，目前都市人的感染大多來(lái)自病犬，因此在重大國(guó)際活動(dòng)中對(duì)入境犬實(shí)行檢疫措施，有利于保護(hù)人群健康。如2000 年悉尼奧運(yùn)會(huì)和2008 年北京奧運(yùn)會(huì)，對(duì)出入境導(dǎo)盲犬和寵物犬均實(shí)施利什曼病檢疫措施，禁止疫區(qū)犬入境，是防止人類感染的重要舉措。

多年來(lái)，我國(guó)以羊種菌感染人畜為主，由于羊種布魯菌病得到一定控制，牛種菌和豬種菌感染呈相對(duì)上升趨勢(shì)。通過(guò)數(shù)年監(jiān)測(cè)結(jié)果確認(rèn)，除牛、羊、豬為人間布魯菌病傳染源外，犬和鹿也是不可忽視的傳染源。犬布魯菌病大多表現(xiàn)為隱性感染，以不發(fā)熱，體表淋巴結(jié)腫大為特征，一旦病犬出現(xiàn)臨床癥狀，多表現(xiàn)為多發(fā)性關(guān)節(jié)炎、腱鞘炎、并導(dǎo)致跛行，偶爾發(fā)生角膜炎、眼前房出血?；⒓t平板凝集反應(yīng)（RBPT）是檢測(cè)人畜布魯菌病的經(jīng)典方法之一，具有操作簡(jiǎn)單、判定結(jié)果快速簡(jiǎn)便的特點(diǎn)，本試驗(yàn)通過(guò)虎紅平板凝集試驗(yàn)檢測(cè)犬、貓可能感染的其他動(dòng)物布魯菌和犬特有的犬種布魯菌，結(jié)果為陰性。表明此次抽檢的犬、貓未感染布魯菌病。

[1] Jeffrey D，Daniel G.Toxoplasmosis in pregnancy[J].The American Journal of Medicine，2005，118（3），212-216.

[2] Perez E，Eonzalezo，Dolz G，et al.Firsz report of bovine neosporosisindairy cattle in costa Rica[J].Veterinary Reeord，1998，142（19）：520-521.

[3] 項(xiàng)夫，吳清民，王真，等.北京地區(qū)犬布魯氏菌病血清學(xué)調(diào)查及分析[J].檢驗(yàn)檢疫學(xué)刊，2009，19（6）：34-38.