馮秀晶，張建濤，姜 勝，李大鵬，高 利，張園園，范宏剛

（東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，黑龍江 哈爾濱150030）

目前動(dòng)物臨床麻醉發(fā)展趨勢(shì)是平衡麻醉，也就是多種藥物聯(lián)合應(yīng)用，不但可以比較好的控制麻醉深度，達(dá)到手術(shù)的需要，還可以減少單種藥物的用量，減少藥物蓄積，減輕藥物濃度過(guò)大導(dǎo)致的副作用，比如靜脈復(fù)合麻醉等。因此，針對(duì)各種靜脈麻醉藥物的作用特點(diǎn)，配制復(fù)合制劑是當(dāng)前麻醉臨床發(fā)展的主要趨勢(shì)[1]。這樣不僅能避免單一藥物，使用劑量過(guò)大，毒副作用大，而且能達(dá)到較好的麻醉效果。試驗(yàn)以平衡麻醉理論為依據(jù)，結(jié)合所選藥物的理化特性、作用機(jī)理、藥理作用及犬自身的生理特點(diǎn)進(jìn)行了犬用乳化異氟醚復(fù)方麻醉劑的組方的初步研究

1 材料

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 健康本地犬8 只，12～16 月齡，雌雄各半，體重5.1±0.2 kg，購(gòu)自哈爾濱青喜養(yǎng)殖場(chǎng)，購(gòu)入時(shí)進(jìn)行常規(guī)的免疫及驅(qū)蟲(chóng)；ICR 小鼠300 只，雌雄各半，體重為22±2 g，購(gòu)自黑龍江省中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，在同一條件下飼養(yǎng)4 周進(jìn)行試驗(yàn)，整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中飼養(yǎng)管理?xiàng)l件保持一致。

1.2 試驗(yàn)藥品和試劑藥物 30%脂肪乳(力邦制藥有限公司，批號(hào)1301101）；異氟醚（河北九派制藥有限公司，批號(hào)130715-2）；芬太尼原粉（東北農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)外科教研室提供）；2%利多卡因（(上海復(fù)星朝暉制藥有限公司，批號(hào)130804-2）；肝素納（青島豐聯(lián)生化制品有限公司，批號(hào)130910）；生理鹽水（北京康普惠威科技有限公司，批號(hào)130615）等。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備 聽(tīng)診器、止血鉗、計(jì)時(shí)器、微量移液器、真空采血管、1 mL 注射器等。

2 試驗(yàn)方法

2.1 初步篩選試驗(yàn) 通過(guò)對(duì)犬麻醉的對(duì)比試驗(yàn)，綜合分析乳化異氟醚與多種藥物組合的麻醉誘導(dǎo)期、麻醉期、蘇醒期，鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、肌松效果以及呼吸、脈搏、體溫等生理指標(biāo)。

2.2 組分確定及比例探索試驗(yàn) 用由乳化異氟醚、芬太尼、利多卡因組成的不同組合對(duì)犬進(jìn)行靜脈輸注，觀察生物反射情況以及鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、肌松等情況。

2.3 正交試驗(yàn) 按照三因素三水平正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)原則，并結(jié)合預(yù)試驗(yàn)中麻醉效果的觀察進(jìn)行設(shè)計(jì)（見(jiàn)表1）。復(fù)合麻醉制劑中的3 個(gè)因素為乳化異氟醚、芬太尼、利多卡因，3 個(gè)水平為高、中、低。根據(jù)正交表L9（33）將小鼠隨機(jī)分為9 個(gè)試驗(yàn)組，根據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)標(biāo)準(zhǔn)和藥理設(shè)計(jì)中的樣本選擇原則，每個(gè)試驗(yàn)組選擇小鼠30 只，腹腔注射0.025 mL/g，根據(jù)正交表分析各藥物成分對(duì)麻醉效果的影響。

表1 因素水平

2.4 正交決定性驗(yàn)證試驗(yàn)

2.4.1 鎮(zhèn)靜效果監(jiān)測(cè)及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 小鼠麻醉后，分別觀察用藥后5 min、10 min、20 min 和30 min 時(shí)的鎮(zhèn)靜效果。觀察眨眼、耳動(dòng)、軀體動(dòng)、頭頸動(dòng)、尾動(dòng)。對(duì)聲音刺激反應(yīng)明顯，如給藥前，記“+”；對(duì)聲音刺激反應(yīng)遲鈍，記“±”；對(duì)聲音刺激無(wú)反應(yīng)，記“-”。評(píng)分方法：“+”計(jì)0 分，“±”計(jì)2 分，“-”計(jì)4 分。

2.4.2 鎮(zhèn)痛效果監(jiān)測(cè)及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 主要通過(guò)針刺鼻唇部、軀干、四肢上部、爪部、尾部進(jìn)行評(píng)價(jià)。針刺各部疼痛反應(yīng)明顯，記“+”；疼痛反應(yīng)遲鈍，記“±”；疼痛反應(yīng)消失，記“-”。評(píng)分方法：“+”計(jì)0 分，“±”計(jì)2 分，“-”計(jì)4 分。

2.4.3 肌松效果監(jiān)測(cè)及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 觀察頭頸部、尾、四肢、咬肌和腹壁肌肉松弛程度。用鑷子夾尾提起時(shí)如出現(xiàn)回頭和轉(zhuǎn)身反應(yīng)、四肢出現(xiàn)明顯滑動(dòng)，刺激四肢尚能爬行，記“+”；夾尾提起時(shí)出現(xiàn)轉(zhuǎn)頭、同時(shí)四肢輕度滑動(dòng)，記“±”；無(wú)回頭和無(wú)轉(zhuǎn)身反應(yīng)，記“-”。夾耳提起時(shí)如尾可彎曲至水平位置或上翹時(shí)，記“+”；如尾出現(xiàn)彎曲反應(yīng)，記“±”；尾自然下垂，記“-”。用鑷子夾住耳朵提起，如四肢出現(xiàn)掙扎，記“+”；四肢輕度滑動(dòng)，記“±”；四肢自然下垂，記“-”。夾耳提起時(shí)如后腹部無(wú)明顯變化，記“+”；后腹部略有膨大松弛，記“±”；后腹部明顯膨大松弛，記“-”。咬肌松弛輕拉上、下頜，口腔可順利打開(kāi)，記“+”；口腔可打開(kāi)，但很快可恢復(fù)者，記“±”；不能夠打開(kāi)或打開(kāi)后立即恢復(fù)者，記“-”。評(píng)分方法：“+”計(jì)0 分，“±”計(jì)2 分，“-”計(jì)4 分。小鼠麻醉后30 min 內(nèi)翻正反射消失達(dá)1 min 以上者判定為陽(yáng)性。

3 結(jié)果

3.1 初步篩選試驗(yàn)結(jié)果 試驗(yàn)表明，由乳化異氟醚、芬太尼、利多卡因組成的復(fù)合制劑明顯優(yōu)于其他各種組合，因此暫定以乳化異氟醚、芬太尼、利多卡因作為復(fù)合麻醉制劑的主要成分。

3.2 組分確定及比例探索試驗(yàn)結(jié)果 對(duì)不同組合的麻醉作用進(jìn)行綜合分析和評(píng)價(jià)，不斷調(diào)整各組分的比例和劑量，初步篩選出以乳化異氟醚、芬太尼、利多卡因作為復(fù)合制劑的組分，并且擬定三者比例為5∶3∶4。

3.3 正交試驗(yàn)結(jié)果 由表2 可知，乳化異氟醚在高劑量時(shí)效果優(yōu)于中、低劑量；芬太尼在低劑量時(shí)效果優(yōu)于高、中劑量；利多卡因在中劑量時(shí)效果優(yōu)于高、低劑量。比較分析試驗(yàn)效果，其中乳化異氟醚所起作用較大。因此選擇翻正反射效果最好的組合7、8 和9，作為組方1、2 和3 進(jìn)入下一步正交決定性驗(yàn)證試驗(yàn)。

小鼠麻醉后30 min 內(nèi)翻正反射消失達(dá)1 min以上者判定為陽(yáng)性。

表2 小鼠正交試驗(yàn)結(jié)果 （n=30）

3.4 正交試驗(yàn)結(jié)果 由試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3，可以看出組方1 優(yōu)于組方2 和組方3，特別是在鎮(zhèn)痛方面。由此確定最佳處方為組方1。

表3 小鼠注藥5、10、20min及30min后麻醉效果的觀察 （n=15）

4 討論

4.1 犬注射麻醉及乳化異氟醚應(yīng)用現(xiàn)狀 目前在國(guó)內(nèi)臨床上犬的麻醉仍以注射麻醉為主，吸入麻醉由于成本較高，應(yīng)用還不普遍。注射麻醉雖操作簡(jiǎn)便，但注射麻醉劑麻醉效果不均衡，毒、副作用大，且麻醉深度難以控制，不能根據(jù)手術(shù)需要做出及時(shí)調(diào)整[2]。吸入麻醉雖能達(dá)到理想的麻醉狀態(tài)，毒、副作用小[3]，但需要價(jià)格昂貴的麻醉機(jī)，由于受經(jīng)濟(jì)條件的制約在臨床應(yīng)用上受到了一定的限制。乳化異氟醚是當(dāng)前新研發(fā)尚未應(yīng)用到臨床的靜脈麻醉藥，對(duì)其研究還局限在毒性試驗(yàn)、器官保護(hù)、區(qū)域麻醉等階段[4]，其在小動(dòng)物臨床麻醉中的應(yīng)用仍處于空白階段，具有一定應(yīng)用開(kāi)發(fā)前景。

4.2 科學(xué)組方研究 由于該復(fù)合麻醉組方是由乳化異氟醚、芬太尼、利多卡因3 種成分組成。3 種藥物組合的目的是為了充分發(fā)揮各單劑的藥理作用，同時(shí)也為了達(dá)到最佳的協(xié)同作用及使毒副作用互減或互抵，從而達(dá)到理想的麻醉效果[5]。此試驗(yàn)屬于多因素試驗(yàn)，在多因素試驗(yàn)中選擇最適條件，不僅要考慮單因素本身作用與影響，還應(yīng)考慮各因素間的相互作用與影響，正交設(shè)計(jì)適用于多因素分析，可算出各因素不同水平對(duì)試驗(yàn)的影響，找出最佳組合。因此，本試驗(yàn)按照三因素三水平正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)原則及結(jié)合預(yù)試驗(yàn)中麻醉效果的觀察進(jìn)行設(shè)計(jì)。選擇翻正反射效果最好的組合，作為新的組方進(jìn)行正交決定性驗(yàn)證試驗(yàn)，最終確定一組優(yōu)化組方進(jìn)入下一步犬麻醉效果觀察試驗(yàn)。

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