葛君璽，秦格，謝逸軒，苗明三，白明（河南中醫(yī)藥大學，河南 鄭州 450046）

慢性萎縮性胃炎（chronic atrophic gastritis，CAG）是臨床常見的消化系統(tǒng)疾病，系指胃黏膜上皮遭受反復損害導致固有腺體減少，伴或不伴腸腺化生和（或）假幽門腺化生的一種慢性胃部疾病[1-2]。主要臨床表現為上腹部不適、飽脹、疼痛等非特異性消化不良癥狀，可伴有食欲不振、嘈雜、噯氣、反酸、惡心、口苦等消化道癥狀[3]，被認為是胃的癌前病變。目前，西醫(yī)以根除幽門螺桿菌（Helicobacter pylori，Hp）、應用胃黏膜保護藥、胃腸動力藥等治療為主[4-5]。中醫(yī)藥治療CAG 有獨特的優(yōu)勢，通過辨證論治結合臨床癥狀進行治療，效果顯著[6]。本研究通過查閱相關文獻，對現有的CAG 動物模型復制要素進行整理分析，以期為提高模型成功率及中醫(yī)藥治療CAG 的研究提供方法學參考。

1 資料與方法

1.1 數據來源 以“慢性萎縮性胃炎”和“動物”為主題，在中國知網（CNKI）、萬方數據庫進行搜索，時間范圍是2011 年1 月至2022 年10 月，共檢索到期刊文獻6 126 篇。

1.2 納入及排除標準 納入研究慢性萎縮性胃炎的全部動物實驗文獻；會議、碩博論文等不作為納入的范疇；排除資料缺失、綜述類和數據庫交叉重復的文獻。最終有242 篇實驗文獻符合納入標準。

1.3 數據處理 實驗動物名稱、種類等均參照《實驗動物和動物實驗技術》[7]進行規(guī)范總結。

1.4 統(tǒng)計學處理方法 將納入文獻的實驗動物種類、模型復制方法、周期、證型、陽性藥、給藥時間（干預時間）、檢測指標等錄入Excel 2013 進行歸納處理，以此建立慢性萎縮性胃炎動物模型的數據庫。

2 結果分析

2.1 CAG 模型動物應用情況 將錄入的242 篇實驗文獻中的全部實驗動物種類進行分類排序，統(tǒng)計得出共有5 種實驗動物[8-12]（其中實驗動物未標種系者，在此不做統(tǒng)計），累積頻數224 次。從分析結果可以看出CAG 模型所用動物種系中，使用頻數最多的為SD 大鼠（113 次），年齡在6～8 周之間，體質量多在180～220 g 之間；其次為Wistar 大鼠（106 數），年齡在4～6 周之間，體質量多在180～200 g 之間，具體分布情況見表1。

表1 慢性萎縮性胃炎（CAG）模型動物種系使用頻數分布情況表Table 1 Species distribution of animal in chronic atrophic gastritis（CAG）models

將242 篇實驗文獻所涉及的實驗動物性別進行分類規(guī)范，文獻中未對動物性別做出標注者予以排除，獲得累計頻數226 次，其中雄性146 次（64.60 %）、雌雄各半78 次（34.51%）、雌性2 次（0.88%）。

2.2 模型復制方式及周期 將242 篇動物實驗文獻中CAG 的動物模型復制方法進行統(tǒng)計總結，并將現有的模型復制方法分為單化學因素誘導法、多因素綜合誘導法、手術法、Hp 感染法、免疫法[13-14]。其中使用最多的模型復制方式是多因素綜合誘導法，周期以42、56、70、84、90、112、140 d 為主（頻數＞10 次）。單因素化學誘導法中使用最多的是自由飲用N-甲基-N’-硝基-N-亞硝基胍（MNNG）溶液，模型復制周期以56 d 和84 d 為主。具體模型復制方法分布情況見表2。

表2 慢性萎縮性胃炎（CAG）動物模型復制方法分布情況表Table 2 Distribution of replication methods in chronic atrophic gastritis（CAG）animal model

分析發(fā)現，多因素綜合影響是建立CAG 最常用的模型復制方法。多因素綜合誘導法，是指應用自由飲用MNNG、自由飲用0.1%氨水、雷尼替丁灌胃或雷尼替丁飼料喂養(yǎng)、脫氧膽酸鈉灌胃、2%水楊酸鈉溶液灌胃、30%～40%乙醇灌胃、熱生理鹽水灌胃、饑飽失常法喂養(yǎng)、夾尾刺激等兩種或多種辦法進行模型復制的方法。CAG 是一種慢性消化系統(tǒng)疾病，病程較長，病性復雜，應用綜合因素誘導方法進行模型復制，目的是為了近似地模仿人類疾病發(fā)病情況，相較于單一化學因素誘導法有明顯優(yōu)勢。但由于應用方法較多，成模時間難以控制，需要在模型復制期間定期取材來評價模型是否成功，因此CAG 綜合因素誘導法需要新的穩(wěn)定和評價標準。

2.3 陽性對照藥及干預時間 見表3。將所有文獻歸納統(tǒng)計發(fā)現，有172 篇文獻中含有陽性對照藥，陽性對照藥共涉及20 種，其中有10 篇應用兩種陽性對照藥，應用最多的陽性對照藥是維酶素（90 次），其次是胃復春（38 次）和葉酸（17 次）。維酶素給藥時間最多的兩個時間點（段）是28～30 d（28 次）和56 d（31 次），共計頻數59 次；中藥胃復春給藥時間最多的兩個時間點（段）是28～30 d（13 次）和84 d（9 次），共計頻數22 次。

表3 慢性萎縮性胃炎（CAG）動物實驗納入文獻的陽性對照藥及對應干預時間情況Table 3 Positive control drugs and corresponding intervention times included in the reports of chronic atrophic gastritis（CAG）animal experiment

2.4 動物模型證候情況 代蕊等[13]將常見的中醫(yī)證候動物模型分為脾虛型、肝郁型、濕熱型、腎虛性、氣虛血瘀型。納入文獻中應用病證結合模型復制方法并明確證型的僅有12 篇，包括脾虛證（頻數4 次）[23]、肝郁脾虛證（頻數4 次）[24]、氣虛血瘀陰虛證（頻數2 次）[25]、脾虛濕熱證（頻數1 次）[26]、陰虛證（頻數1 次）[27]，其中脾虛證和肝郁脾虛證最多。

2.5 CAG 模型檢測指標 將錄入的242 篇文獻中的全部指標進行分類統(tǒng)計，其中，若同一組織被用于檢測不同指標，如胃黏膜組織既做病理檢測又做免疫組化，則分別統(tǒng)計；若同一組織被檢測多個同類型指標，如血清中同時檢測GAS、GH、IL-6 等，則把這些指標統(tǒng)稱為血清指標[28]。一般狀態(tài)包括體質量、飲水量、進食量、活動情況、大小便等特征。統(tǒng)計結果表明，242 篇實驗文獻涵蓋33 種不同的指標類型，累計頻數750 次，應用較多的是胃組織病理（192 次）、一般狀態(tài)觀察（116 次）、生化指標（112 次）等?，F篩選出頻數≥2 次的檢測方法，總計有18 種，具體檢測指標分布情況見表4。

表4 慢性萎縮性胃炎（CAG）納入文獻的動物模型檢測指標及給藥后評估指標分類統(tǒng)計Table 4 Classification statistics for assay indicators in chronic atrophic gastritis（CAG）animal models and assessment indicators of postadministration

3 討論

慢性萎縮性胃炎（CAG）是消化系統(tǒng)常見疾病，其發(fā)病率高、病因復雜、病程較長，1978 年世界衛(wèi)生組織將其列為胃癌的癌前疾病。根據其臨床表現，中醫(yī)將CAG 歸于“胃痞”“胃痛”等范疇，認為CAG 發(fā)病多與脾胃虛有關[29]，其病因病機是因虛致瘀進而蘊久化毒[30]，由于毒和瘀交阻胃絡，從而導致胃黏膜的萎縮[31]?！堵晕s性胃炎中西醫(yī)結合診療共識意見（2017 年）》將CAG 辨證分為肝胃氣滯證、肝胃郁熱證、脾胃虛弱證、脾胃濕熱證、胃陰不足證、胃絡瘀血證[32]。CAG 動物模型應該與人類CAG臨床病癥特點高度吻合，但目前尚未發(fā)現與CAG 發(fā)病過程完全相同的動物自發(fā)性模型，因此選擇更符合人類病癥特點的動物模型，對CAG 的發(fā)病機制及治療藥物藥效研究有重大意義。

動物模型的復制，首先要考慮動物的選擇，動物種類方面主要是嚙齒類動物老鼠[13]。本研究顯示，近年來最常用的模型動物是雄性SD 大鼠和Wistar 大鼠。與小鼠比較，大鼠體積和胃組織較大，便于操作，就目前實際情況，選擇大鼠進行模型復制最為方便、經濟、穩(wěn)定[33]。既往研究[34]發(fā)現，雄性大鼠較雌性大鼠有更好的耐受性、誘發(fā)率高等特點。

復制與人類CAG 臨床病癥特點相符的動物模型是最終目的。本研究顯示，最常用的模型復制方式是綜合因素誘導法。MNNG 是一種有毒的致癌物[14]，其可模擬人類硝酸鹽在體內轉化為亞硝酸胺等物質過程；水楊酸鈉作為非甾體類抗炎藥能破壞胃黏膜的防御和修復功能；去氧膽酸鈉則模擬膽汁反流對胃黏膜的損害；雷尼替丁抑制胃酸分泌，導致腸化的發(fā)生；饑飽失常飲食、夾尾刺激、乙醇灌胃等則是對CAG 病因及人類不良生活習慣的模擬。研究[35]發(fā)現，使用MNNG 復合多因素法誘導的CAG 大鼠模型存在全胃萎縮，更趨向于萎縮性胃炎癌前病變的病理表現。殷苗苗等[19]通過實驗證明，采用MNNG自由飲用聯合水楊酸鈉、脫氧膽酸鈉灌胃的復合方法建立CAG 模型較單一因素和雙因素誘導，在病理表現和生化指標上表現更好。目前CAG 的動物實驗中，多用綜合因素誘導法研究中藥組方或提取物的藥效機制，多因素綜合誘導法雖然具有優(yōu)勢，但是存在以下問題，如化學藥物的濃度及劑量不同、誘導方法多樣等，導致模型復制周期不固定，以上問題是影響動物模型穩(wěn)定的重要因素之一。結合文獻分析，多因素綜合誘導法的模型復制周期多為42、56、84、112 d 等。

CAG 模型復制的一個重要目的就是開發(fā)新藥及藥效評價。目前，動物給藥時間多為30 d 和84 d。CAG 屬于慢性病，病程較長，給藥時間與給藥劑量有關，不同的藥物治療量和致毒量不同，因此本研究結果的給藥周期需結合具體實驗考慮。通過分析[36-37]發(fā)現，最常用的陽性藥物是維酶素、胃復春。維酶素是臨床治療CAG 的常用西藥。胃復春是中成藥，具有健脾益氣，活血解毒的功效，并且有不良反應發(fā)生率低等優(yōu)點。大多數研究均有應用病癥結合來進行模型復制，但缺乏具體中醫(yī)證候的辨證，在僅有的12 篇文獻中，出現最多的是脾虛證和肝郁脾虛證，如果只是簡單將癥狀復制到動物身上，缺乏“宏觀”和“微觀”指標的結合，病證結合型動物模型復制是否成功以及模型穩(wěn)定性如何，還有待解決。

臨床上胃鏡和組織學檢查是診斷CAG 的關鍵，萎縮性胃炎黏膜的色澤和形狀均會發(fā)生病理性改變[3]。病理形態(tài)學是模型評價應用最多的指標，與目前臨床CAG 的診斷保持一致。其次是一般狀況的觀察，納入文獻的研究中表觀指標多有討論，但大多不作為重要指標進行分析。中醫(yī)注重“望、聞、問、切”，對應動物則是毛發(fā)色澤、稀疏程度、叫聲、大小便氣味、動物脈搏、心率、體質量等指標[38]。對于中醫(yī)“證候”研究的不足，是本模型研究的缺點，因此建議可將表觀指標劃定為重點指標作為參考。

本文提供現有的CAG 動物模型應用現狀及特點分析，期待可為相關研究提供研究基礎。目前常選用雄性SD/Wistar 大鼠，采用多因素綜合誘導法干預12 周進行模型復制，以胃組織病理、一般狀況表現、生化指標等指標衡量模型的穩(wěn)定性。在進行藥效評價時，多選擇維酶素和胃復春作為陽性對照組，給藥時間多在28～30 d。當然，具體研究應用時應結合研究條件及研究目的進行綜合分析。建議在建立更多中西醫(yī)病癥結合型動物模型的基礎上，注重動物表觀指標的討論及分析，結合中醫(yī)辨證來研究中藥及組方的藥效機制。雖然目前尚無統(tǒng)一的模型評定標準，但本文通過錄入數據庫進行分析，可為模型復制判定標準提供參考意見。