林淑儀 楊愛君 何瑛 梁俊健 林木娣 黃浩杰

摘 要：為了探究實(shí)驗(yàn)室配制的75%酒精在不同貯存溫度下的消毒效果，本文將配制好的75%酒精分別貯存在6 ℃、25 ℃和35 ℃環(huán)境中30 d，觀察對(duì)比3種貯存溫度中酒精濃度的變化及其對(duì)金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的消毒效果。結(jié)果表明，75%酒精在6 ℃、25 ℃和35 ℃環(huán)境中貯存30 d后濃度分別下降至74.5%、73.3%和71.2%，對(duì)金黃色葡萄球菌和大腸桿菌平均殺滅對(duì)數(shù)值均大于5.00，滿足規(guī)定的消毒要求。因此，75%酒精在6 ℃、25 ℃和35 ℃環(huán)境中貯存30 d，其殺菌效果在可接受范圍內(nèi)。

關(guān)鍵詞：75%酒精；貯存溫度；消毒效果

Abstract： In order to investigate the disinfection effect of 75% alcohol at different storage temperatures， the prepared 75% alcohol was stored at 6 ℃， 25 ℃ and 35 ℃ for 30 days respectively， and the changes of alcohol concentration and the disinfection effect on Staphylococcus aureus and Escherichia coli in three storage temperatures were detected. The results showed that the concentration of 75% alcohol decreased from 74.5%， 73.3% and 71.2% respectively， and the average killing logarithms of Staphylococcus aureus and Escherichia coli were more than 5.00. Therefore， when 75% alcohol is stored at 6 ℃， 25 ℃， and 35 ℃ for 30 days， its disinfection effect is acceptable.

Keywords： 75% alcohol; storage temperature; disinfection effect

75%酒精是一種廣泛使用的常規(guī)消毒劑[1]，具有很強(qiáng)的滲透能力，可穿透細(xì)胞膜，進(jìn)入細(xì)菌內(nèi)部，凝固蛋白質(zhì)，從而起到殺菌的作用。酒精濃度過高或過低都會(huì)對(duì)殺菌消毒效果產(chǎn)生影響，酒精濃度越高，脫水能力越強(qiáng)，使蛋白質(zhì)凝固的作用也就越強(qiáng)。當(dāng)過高濃度的酒精與細(xì)菌接觸時(shí)，菌體表面會(huì)迅速凝固，形成一層包膜，阻止酒精繼續(xù)向菌體內(nèi)部滲透，導(dǎo)致細(xì)菌不能被徹底殺死。如果濃度太低，酒精含水量太高，單位體積內(nèi)乙醇分子含量太少，雖然可以滲透進(jìn)入細(xì)菌內(nèi)部，但不能將其體內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固，不足以徹底殺滅細(xì)菌。綜合以上兩點(diǎn)，兼顧殺菌消毒能力和滲透性，70%～75%的酒精可以使菌體蛋白質(zhì)脫水、變性、沉淀，不會(huì)使菌體形成包膜，而且酒精可以不斷地深入菌體內(nèi)部，作用于菌體內(nèi)所有的蛋白質(zhì)，最后殺死細(xì)菌，殺菌比較徹底。

食品加工企業(yè)通常直接購買75%食品級(jí)酒精或用95%的食用酒精稀釋成75%酒精作消毒劑使用，75%的酒精穿透能力、作用速度最佳，但酒精具有揮發(fā)性，在使用一段時(shí)間后，酒精的消毒作用就會(huì)減弱，貯存環(huán)境的溫度直接影響酒精的揮發(fā)速度，對(duì)酒精的“有效期”影響明顯[2-4]。本文將75%酒精分別放在6 ℃、25 ℃和35 ℃的環(huán)境中存放30 d，模擬冬天室內(nèi)工作間、恒溫潔凈車間和夏天室內(nèi)工作間的工作場(chǎng)所溫度，觀察75%酒精濃度的揮發(fā)速度和消毒效果的變化。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

試驗(yàn)微生物以金黃色葡萄球菌（ATCC 25923）作為細(xì)菌繁殖體中化膿性球菌的代表，廣州環(huán)凱微生物科技有限公司；大腸桿菌（ATCC 25922）作為細(xì)菌繁殖體中腸道菌的代表，廣州環(huán)凱微生物科技有限公司；95%的食用酒精，廣西金源生化集團(tuán)；緩沖蛋白胨水培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)瓊脂、結(jié)晶紫中性紅膽鹽培養(yǎng)基，北京陸橋技術(shù)股份有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

溫度測(cè)量?jī)x，德圖儀器國際貿(mào)易（上海）有限公司；電熱恒溫培養(yǎng)箱，上海延翌儀器儀表有限公司；酒精計(jì)（量程在0%～100%）。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 75%酒精的配制與貯存

采用公式法計(jì)算

式中：A為95%酒精的總體積；B為75%酒精的總體積。所需添加純水的量C=B-A。

本試驗(yàn)配制5 L 75%的酒精，根據(jù)上述的計(jì)算公式得出，需量取3 947 mL 95%酒精于5 L的容器中，往容器中加入1 053 mL純水，攪拌均勻，靜置，從中倒出220 mL液體至量筒，用酒精計(jì)和溫度測(cè)量?jī)x測(cè)出酒精濃度和溫度，經(jīng)換算其酒精濃度為75.4%。用1 L的PP錐形瓶盛裝，分別放置在6 ℃、25 ℃和35 ℃環(huán)境下貯存30 d，每日早晚各開啟一次，每次5 min，目的是模擬企業(yè)日常每天開啟容器領(lǐng)取75%酒精的時(shí)間。

1.3.2 酒精濃度的檢測(cè)

每日取220 mL酒精置于潔凈、干燥的250 mL量筒內(nèi)，靜置數(shù)分鐘，待酒精中的氣泡完全消失后，放入潔凈、擦干的酒精計(jì)，不接觸量筒壁，平衡時(shí)間5 min，水平觀測(cè)，讀取與彎月面相切處的刻度數(shù)值，同時(shí)用溫度測(cè)量?jī)x測(cè)定此時(shí)酒精的溫度。根據(jù)測(cè)得的酒精示值和溫度通過《酒精水溶液密度與酒精度（乙醇含量）對(duì)照表（20 ℃）》換算成20 ℃時(shí)的酒精度。同時(shí)，在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值，不應(yīng)超過平均值的0.5%[5]。

1.3.3 消毒效果試驗(yàn)

①菌液制備。使用已傳至3代的金黃色葡萄球菌和大腸桿菌菌株接種于緩沖蛋白胨水培養(yǎng)基中，于36 ℃電熱恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，培養(yǎng)后菌液濃度應(yīng)不少于1×105 CFU·mL-1。②設(shè)置“6 ℃貯存條件”“25 ℃貯存條件”和“35 ℃貯存條件”共3個(gè)組，每組3個(gè)無菌離心管，然后分別往每個(gè)無菌離心管中加入1 mL菌液和9 mL75%酒精溶液（陽性對(duì)照管用緩沖蛋白胨水替代75%酒精），振蕩均勻，分別作用0.5 min、1.0 min和2.0 min后，向混合液中加入10 mL營(yíng)養(yǎng)肉湯，10 min后，取其中1 mL混勻溶液進(jìn)行平板傾注，在36 ℃的電熱恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h。③根據(jù)《消毒技術(shù)規(guī)范》（2002年版），計(jì)算活菌濃度（CFU·mL-1），換算成對(duì)數(shù)值，然后計(jì)算殺滅對(duì)數(shù)值：殺滅對(duì)數(shù)值＝陽性對(duì)照組平均活菌濃度的對(duì)數(shù)值－實(shí)驗(yàn)組活菌濃度的對(duì)數(shù)值。判定標(biāo)準(zhǔn)：對(duì)金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的殺滅對(duì)數(shù)值均≥5.00，判為消毒合格[6]。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同環(huán)境溫度貯存下75%酒精濃度變化檢測(cè)結(jié)果

75%酒精配制后，在PP錐形瓶容器貯存下，其酒精濃度在6 ℃、25 ℃和35 ℃的趨勢(shì)變化見圖1。6 ℃、25 ℃和35 ℃環(huán)境貯存下，酒精濃度分別從75.4%下降至74.5%、73.3%和71.2%?？偟膩碚f，貯存環(huán)境溫度越高，酒精的揮發(fā)性越強(qiáng)，酒精濃度下降速度越快。雖然75%酒精在不同貯存溫度環(huán)境下?lián)]發(fā)速度有所不同，但在一個(gè)月的貯存期內(nèi)，酒精濃度仍在70%以上，可以達(dá)到酒精作為消毒劑的限值標(biāo)準(zhǔn)要求[7]。

2.2 不同貯存溫度下75%酒精的消毒效果對(duì)比

75%酒精配制后分別在6 ℃、25 ℃和35 ℃環(huán)境下貯存30 d，在貯存期間分別選擇貯存時(shí)長(zhǎng)0 d、7 d、9 d、15 d、20 d和30 d的6個(gè)時(shí)間段對(duì)75%酒精的消毒效果進(jìn)行對(duì)比。在30 d貯存期內(nèi)，75%酒精作用0.5 min、1.0 min和2.0 min都可以達(dá)到對(duì)金黃色葡萄球菌的消毒效果。其中貯存時(shí)長(zhǎng)為30 d時(shí)，作用0.5 min后有金黃色葡萄球菌生長(zhǎng)，但作用1.0 min和2.0 min可以100%殺滅金黃色葡萄球菌，平均殺滅對(duì)數(shù)值為8.41（見表1、表2、表3）。

75%酒精對(duì)大腸桿菌的消毒效果隨著貯存時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸降低，其中2.0 min的消毒效果最好，可以達(dá)到100%的殺滅率，作用1.0 min和0.5 min的消毒效果逐漸降低，但其6個(gè)貯存時(shí)長(zhǎng)的平均殺滅對(duì)數(shù)值均≥5.00，達(dá)到規(guī)定的消毒合格要求。

3 結(jié)論與討論

研究75%酒精在不同環(huán)境溫度中貯存30 d的過程中，其酒精濃度和消毒效果的變化。結(jié)果表明，75%酒精分別在6 ℃、25 ℃和35 ℃ 3個(gè)溫度中貯存30 d后酒精濃度仍可以達(dá)到70%以上；在相同的貯存時(shí)間內(nèi)，環(huán)境溫度的高低會(huì)直接影響酒精濃度揮發(fā)性的速度，溫度越高，酒精揮發(fā)速度越快。在30 d貯存期間，選擇6個(gè)不同貯存時(shí)長(zhǎng)的75%酒精對(duì)金黃色葡萄球菌和大腸桿菌分別作用0.5 min、1.0 min和2.0 min，其平均對(duì)數(shù)值均可以達(dá)到5.00以上，對(duì)細(xì)菌的殺滅效果可以達(dá)到規(guī)定的消毒要求。同時(shí)，在3個(gè)不同的貯存溫度環(huán)境中，75%酒精在每日開啟10 min情況下，貯存0 d和30 d對(duì)金黃色葡萄球菌作用1.0 min和2.0 min的滅菌作用沒有差別，但貯存30 d對(duì)金黃色葡萄球菌作用0.5 min后，有金黃色葡萄球菌生長(zhǎng)?？梢姡?5%酒精在6 ℃、和35 ℃環(huán)境中貯存30 d，仍具有較強(qiáng)的消毒作用，企業(yè)可以根據(jù)自身需求選擇不同的貯存時(shí)長(zhǎng)和消毒作用時(shí)間。

通過對(duì)75%酒精的貯存溫度和消毒效果的試驗(yàn)檢測(cè)，建議75%消毒酒精在30 d的保存期中，存儲(chǔ)溫度≤25 ℃，消毒時(shí)間≥1.0 min，既可減少配制的次數(shù)，又可以保證消毒效果。

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