薛 魁

蚌埠醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院口腔科，安徽 蚌埠 233000

慢性牙周炎（chronic periodontitis）是一種常見的口腔疾病，嚴(yán)重時可能會導(dǎo)致牙齒脫落和牙周組織被破壞，該疾病的發(fā)生和發(fā)展與口腔微生物群落密切相關(guān)。近年來，通過對慢性牙周炎患者與牙周健康人唾液微生物的多樣性進(jìn)行研究，人們逐漸認(rèn)識到了微生物對牙周炎的重要作用。比較慢性牙周炎患者與牙周健康人唾液微生物的組成，可以發(fā)現(xiàn)它們之間的差異，并能進(jìn)一步探索微生物與疾病發(fā)生和發(fā)展之間的關(guān)系[1]。牙周病是造成全球慢性疾病最重要的口腔疾病之一，是一個非常重大的公共衛(wèi)生問題[2]。慢性牙周炎患者和牙周健康人唾液微生物多樣性研究在臨床上具有重要意義。因此，本文針對慢性牙周炎患者與牙周健康人唾液的微生物多樣性及其臨床意義展開研究。

1 相關(guān)介紹

1.1 慢性牙周炎的定義

慢性牙周炎是一種常見口腔疾病，主要是由牙齦周圍的細(xì)菌感染導(dǎo)致的牙周組織的長期炎癥反應(yīng)。該疾病通常是由牙齒菌斑（牙菌斑）積累和不良口腔衛(wèi)生習(xí)慣引發(fā)的[3]。牙周炎的早期癥狀包括牙齦紅腫、易出血、口腔異味和牙齦疼痛。如果不加治療，炎癥就會持續(xù)存在，導(dǎo)致牙齦脫離牙齒，形成牙周袋（牙齦下袋），最終導(dǎo)致牙齒松動、牙齒移位甚至牙齒脫落。

1.2 唾液微生物多樣性的重要性

唾液微生物多樣性指口腔微生物種類的豐富程度。首先，健康的口腔微生物群落是保持口腔健康的關(guān)鍵。多樣化的微生物群落可以保持平衡狀態(tài)，抑制有害菌的生長，預(yù)防口腔疾病。其次，一些特定的唾液微生物有助于預(yù)防齲齒[4]。最后，多樣化的唾液微生物群落可以與有害菌爭奪營養(yǎng)資源和生存空間，從而抑制它們的生長。某些微生物還可以產(chǎn)生抗菌物質(zhì)，能對抗有害菌生長。

2 慢性牙周炎患者和牙周健康人唾液微生物多樣性研究

2.1 實驗材料

研究慢性牙周炎患者和牙周健康人唾液微生物多樣性，需準(zhǔn)備如下實驗材料。

慢性牙周炎患者樣本：收集已被診斷為慢性牙周炎患者的唾液樣本。

牙周健康人樣本：收集沒有患牙周炎及其他口腔疾病的健康人的唾液樣本作為對照組。

唾液收集工具：包括唾液采集器和試管等。唾液采集器可以用專業(yè)的唾液采集器或無刺激性的唾液刺激劑，如檸檬、橙皮等。

實驗室用品：離心機、微量吸頭、冰箱、離心管和離心管架等。

實驗室設(shè)備：高通量測序設(shè)備、PCR 儀、電泳儀等。這些設(shè)備可用于對唾液微生物DNA（脫氧核糖核酸，DeoxyriboNucleic Acid）的提取、擴增、測序和分析。

數(shù)據(jù)分析工具：包括生物信息學(xué)分析軟件和統(tǒng)計學(xué)分析軟件。用于分析測序數(shù)據(jù)，確定微生物的存在及其豐度，并對其進(jìn)行差異分析和統(tǒng)計學(xué)處理。

在開展唾液微生物多樣性研究時，需充分保護樣本的質(zhì)量和隱私，合理使用實驗材料，并遵循相關(guān)倫理原則，確保實驗操作的嚴(yán)謹(jǐn)性和準(zhǔn)確性，從而獲取可靠的研究結(jié)果。

2.2 實驗步驟

第一步：受試者選擇。從慢性牙周炎患者和牙周健康人中篩選合適的受試者，確保其符合研究的診斷標(biāo)準(zhǔn)與排除標(biāo)準(zhǔn)，并獲取受試者的知情同意書。本次研究選取同一地區(qū)的3 名牙周炎患者（A 組）與三名健康人員（B 組），共6 人。

第二步：唾液采集。實驗開始前，要求在受試者未進(jìn)食、漱口或刷牙的情況下采集其唾液樣本。使用唾液采集器或無刺激性唾液刺激劑，讓受試者自行采集約2～5 mm 的唾液樣本，并將樣本置于收集器具中。

第三步：樣本處理。將采集的唾液樣本轉(zhuǎn)移到離心管中，并進(jìn)行離心操作，以分離唾液液相和沉淀物。將唾液液相轉(zhuǎn)移到新的離心管中，進(jìn)行下一步處理。

第四步：DNA 提取，使用商用DNA 提取試劑盒，從唾液液相中提取微生物DNA。按照試劑盒的說明書或提取方法的操作步驟進(jìn)行操作，并確保所提取DNA 的質(zhì)量和濃度能滿足后續(xù)分析的需要。

第五步：PCR 擴增。根據(jù)研究目的，選用適當(dāng)?shù)囊飳ξ⑸锏?6S rRNA 基因或其他感興趣的基因片段進(jìn)行PCR 擴增。設(shè)置合適的對照組，進(jìn)行擴增反應(yīng)，并使用負(fù)對照檢驗擴增試劑的污染情況。

第六步：高通量測序。使用Illumina MiSeq 或其他高通量測序平臺對擴增后的PCR 產(chǎn)物進(jìn)行高通量測序。根據(jù)測序平臺的操作流程，將樣品序列化，并對其進(jìn)行質(zhì)量控制和過濾，以獲得可靠的測序數(shù)據(jù)。

第七步：數(shù)據(jù)分析。采用適當(dāng)?shù)纳镄畔W(xué)工具和統(tǒng)計學(xué)方法，對測序數(shù)據(jù)進(jìn)行分析與解讀，包括微生物豐度計算、物種組成分析、多樣性指數(shù)計算、差異分析及生物學(xué)功能預(yù)測等。根據(jù)分析結(jié)果，對慢性牙周炎患者與牙周健康人的唾液微生物多樣性進(jìn)行對比和研究。

第八步：結(jié)果解釋和討論。根據(jù)實驗結(jié)果，解釋慢性牙周炎患者與牙周健康人的唾液微生物組成的差異，以及可能對疾病發(fā)生和發(fā)展起作用的微生物群落。討論與現(xiàn)有研究結(jié)果的一致性，并提出臨床意義。

2.3 結(jié)果與分析

本次實驗結(jié)果采用多樣性指數(shù)計算，多樣性指數(shù)可以衡量唾液微生物群落的物種豐富度和均勻度。常用的指數(shù)有Shannon 指數(shù)、Simpson 指數(shù)、Chao1 指數(shù)等。對慢性牙周炎患者和牙周健康人的唾液微生物群落進(jìn)行多樣性指數(shù)計算，可以評估不同人群微生物多樣性的差異性，并與疾病的發(fā)生和發(fā)展進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析。本次實驗結(jié)果如表1 所示。

從以上結(jié)果可知，B 組Shannon 指數(shù)和Simpson指數(shù)相對偏高，證明B 組唾液微生物群落的物種多樣性和均勻度較高；B 組的Chao1 指數(shù)和ACE 指數(shù)也相對較高，證明B 組唾液微生物群落的物種豐富度也較好。不斷重復(fù)實驗進(jìn)行確定，可以為慢性牙周炎的診斷、治療和預(yù)防提供更準(zhǔn)確的指導(dǎo)，有助于促進(jìn)個體化的口腔健康管理和疾病干預(yù)。

3 慢性牙周炎患者和牙周健康人唾液微生物多樣性研究的臨床意義

3.1 早起篩查和診斷

首先，對慢性牙周炎患者與牙周健康人唾液微生物的多樣性進(jìn)行比較，可以鑒別并篩查潛在的牙周炎風(fēng)險。早期發(fā)現(xiàn)炎癥傾向的人群，有助于對其及時采取干預(yù)措施，以阻止牙周炎的發(fā)展。其次，唾液微生物多樣性的研究能為慢性牙周炎的診斷提供支持。個體間唾液微生物的差異可以作為牙周炎的生物學(xué)標(biāo)志物，幫助醫(yī)生鑒別牙周炎的發(fā)生和程度。通過分析唾液微生物組成的變化，可以判斷牙周炎的類型及病情的嚴(yán)重程度。

3.2 慢性牙周炎的臨床管理

首先，通過分析慢性牙周炎患者和牙周健康人唾液微生物多樣性的差異，可以指導(dǎo)制定個體化的治療方案。了解患者口腔微生物的組成狀況，有助于選擇合適的治療方式，如為口腔提供衛(wèi)生指導(dǎo)、局部抗菌治療、機械潔治等，以恢復(fù)口腔健康和控制炎癥。其次，治療慢性牙周炎后，比較治療前后患者唾液微生物多樣性的變化，可以評估治療效果。醫(yī)生可以將微生物多樣性的改善和菌群組成的變化作為衡量治療效果的指標(biāo)，判斷是否達(dá)到了預(yù)期的治療目標(biāo)。

3.3 預(yù)后評估與干預(yù)效果監(jiān)測

首先，通過分析慢性牙周炎患者和牙周健康人唾液微生物的多樣性，可以評估患者的預(yù)后情況。唾液微生物多樣性在治療后能得到恢復(fù)和穩(wěn)定，預(yù)示其著對口腔健康的維持和對牙周炎的長期控制。其次，定期監(jiān)測患者唾液微生物的多樣性可以評估治療干預(yù)的效果。治療后，如果微生物多樣性得到了改善且能維持穩(wěn)定，就表明治療措施對患者的口腔健康產(chǎn)生了積極影響。

3.4 預(yù)防和健康促進(jìn)

第一，了解牙周健康人唾液微生物多樣性的特征，可以幫助制定良好的口腔健康標(biāo)準(zhǔn)。通過與患者進(jìn)行比較和分析，可以篩選出患牙周炎潛在的高風(fēng)險個體，并采取相應(yīng)預(yù)防措施，如口腔衛(wèi)生教育、定期洗牙和口腔檢查，早期干預(yù)和預(yù)防牙周炎。第二，研究牙周健康人唾液微生物的多樣性，能為促進(jìn)健康提供指導(dǎo)。了解健康人群的微生物多樣性特征，有助于建立健康的口腔微生態(tài)模型，并提供相應(yīng)的口腔保健建議。

4 結(jié)論

慢性牙周炎是一種常見的慢性炎癥性疾病，廣泛存在于全球各個年齡段的人群中。該疾病的主要特征是牙齒周圍的牙齦組織發(fā)生持續(xù)性的炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致牙周組織被破壞和牙槽骨被吸收。慢性牙周炎給患者的口腔健康和全身健康都帶來了一系列負(fù)面影響。近年來，研究人員開始關(guān)注牙周炎患者與牙周健康人唾液微生物多樣性的差異，并認(rèn)為唾液微生物的組成與牙周炎的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。因此，本文對慢性牙周炎患者和牙周健康人唾液微生物多樣性及其臨床意義進(jìn)行研究，希望可以進(jìn)一步加深人們的相關(guān)認(rèn)知。