馮 潔，徐 鑫

1.蘇州市動(dòng)物園，江蘇 蘇州 215000；2.蘇州市畜牧獸醫(yī)站，江蘇 蘇州 215000

大量試驗(yàn)證實(shí)，乙醇是很多急性或慢性疾病，以及精神行為障礙發(fā)病的一大重要危險(xiǎn)因素。進(jìn)入人體的乙醇排泄有80%～90%依靠肝臟代謝，少部分經(jīng)肺與腎排出。鑒于?；撬峋哂械姆秶鷱V、特異性低及不會(huì)對(duì)人體產(chǎn)生危害等優(yōu)點(diǎn)，本文旨在研究?；撬釋?duì)酒精性肝病大鼠肝臟脂質(zhì)代謝的影響。

1 材料

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

健康大鼠66 只，體重（120±10）g，雄性，SPF（無(wú)特定病原體）級(jí)。

1.2 日糧

全過(guò)程大鼠日糧分為高脂飼料和普通飼料兩種，其中高脂飼料由15%玉米油和85%普通飼料混合而成；普通飼料就是全價(jià)配合飼料。

1.3 試驗(yàn)藥品與試劑

?；撬幔兌雀哂?9%）；60%vol 純糧白酒；吡唑；玉米油；禾豐維他生；氯化鈉，甲醛溶液，無(wú)水乙醇，95%乙醇，新潔爾滅，冰乙酸；考馬斯亮藍(lán)蛋白測(cè)定試劑盒，總膽固醇試劑盒，甘油三酯試劑盒，高密度脂蛋白試劑盒。

1.4 主要儀器

12 號(hào)大鼠灌胃針；JJ 系列高精度電子天平；馬頭牌YP-B、YP-C 型系列應(yīng)變式電子天平；WFJ2 系列7200 型分光光度計(jì)；ZDX-35BI 型座式自動(dòng)電熱壓力蒸汽滅菌器；組織勻漿器；HH-6 數(shù)顯恒溫電熱水浴鍋；低速離心機(jī)；電熱鼓風(fēng)干燥箱；常用手術(shù)器械；BS 224S 精密電子天平。

2 方法

2.1 飼養(yǎng)管理

將所有大鼠放置在試驗(yàn)中心統(tǒng)一進(jìn)行飼養(yǎng)，每籠控制在5～7 只，室內(nèi)溫度控制在18 ℃左右，溫差不超過(guò)2 ℃，濕度控制在55%左右，燈光每隔12 h打開(kāi)或關(guān)閉。

2.2 試驗(yàn)方法

預(yù)防試驗(yàn)：取36 只體重為120±10 g 的SPF 級(jí)大鼠，按照統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)7 d，按照5 g/100 g 體重的標(biāo)準(zhǔn)飼以普通全價(jià)飼料，自由飲用去離子超純水，同時(shí)在水中添加維他生。在試驗(yàn)的第2 周對(duì)大鼠進(jìn)行分組，分別為模型組、對(duì)照組、2%?；撬峥瞻讓?duì)照組、2%牛磺酸預(yù)防組、5%牛磺酸空白對(duì)照組與5%?；撬犷A(yù)防組。試驗(yàn)方法見(jiàn)表1。每天早上8 點(diǎn)使用0.9%氯化鈉溶液對(duì)對(duì)照組的大鼠進(jìn)行灌胃，選擇普通全價(jià)飼料進(jìn)行飼喂，自由飲水；?；撬峥瞻捉M的大鼠均選用普通全價(jià)飼料進(jìn)行喂養(yǎng)，同時(shí)在其飲水中分別加入2%與5%的?；撬幔荒Ｐ徒M的大鼠則每日清晨用白酒+吡唑混合液對(duì)其實(shí)施灌胃操作，在第1周按照10 mL/（kg·d）的劑量使用20%的白酒灌胃，第2 周按照15 mL/（kg·d）的劑量使用30%的白酒灌胃，第3 周按照15 mL/（kg·d）的劑量使用40%的白酒灌胃，并在白酒中添加24 mg/（kg·d）的吡唑，正常飲水，飼喂高脂飼料（飼用玉米油+普通飼料）；按照模型組相同的步驟造模?；撬犷A(yù)防組，并在飲水中同時(shí)分別加入2%、5%?；撬帷Ｔ谠囼?yàn)進(jìn)行到第8周、10 周、12 周時(shí)，分別從模型組、對(duì)照組及預(yù)防組中隨機(jī)選取2 只大鼠，斷頭處死，取出其肝臟做石蠟切片以驗(yàn)證造模效果。12 周末成功造模后殺鼠，采集其肝臟與血液。

表1 試驗(yàn)方法

治療試驗(yàn)：取SPF 級(jí)大鼠30 只，統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)7 d 后將其隨機(jī)分成兩組，即正常對(duì)照組6 只，造模組24 只。造模組的全部大鼠都按照預(yù)防試驗(yàn)同樣的方法建立大鼠ALD 模型，在完成造模后的第4周、8 周、12 周分別從上述兩組大鼠中抽取2 只作為試驗(yàn)對(duì)象，提取其肝臟制成病理切片，對(duì)造模效果進(jìn)行分析。待造模成功12 周后，再將剩余大鼠分成4個(gè)小組，詳見(jiàn)表2，每一組均包括6 只大鼠，其中自然恢復(fù)組飼以正常飲水和普通全價(jià)飼料；正常對(duì)照組飼喂普通全價(jià)飼料，正常飲水；而2%、5%牛磺酸組大鼠均飼喂葡萄全價(jià)飼料，飲水中分別添加濃度為2%、3%、5%的?；撬?。分別在第4 周、8 周后從各組中選出3 只大鼠，采用斷頭法處死大鼠，然后采集其肝臟與血液。

表2 試驗(yàn)方法

2.3 采集，制備樣本

2.3.1 制備血清

對(duì)大鼠嚴(yán)格禁食12 h，在最后一次給藥24 h后，稱重，斷頭取血，將其置于離心機(jī)上處理，設(shè)置轉(zhuǎn)速為3 500 r/min，連續(xù)處理15 min，將處理后的上清液分別裝入1.5 mL 離心管內(nèi)，放置在冰箱中-18℃冷凍保存。

2.3.2 處理臟器

采用斷頭法處死大鼠，快速解剖取出其肝臟，使用PBS 多次沖洗，使用濾紙吸凈肝臟水分后將肝臟放置在天平上稱重。然后將肝臟放置在10%中性甲醛溶液中進(jìn)行固定處理，經(jīng)過(guò)常規(guī)石蠟包塊處理，用HE 染色后使用光學(xué)顯微鏡觀察肝臟病理變化。

2.4 觀察與檢測(cè)

2.4.1 試驗(yàn)觀察

在試驗(yàn)前對(duì)大鼠稱重一次，觀察大鼠試驗(yàn)期間的毛發(fā)、行為、飲食、精神、死亡等狀態(tài)；結(jié)束試驗(yàn)后，稱重然后處死大鼠。

2.4.2 生化指標(biāo)的檢測(cè)

測(cè)定肝組織勻漿內(nèi)抗氧化能力，需要按照試劑盒上的說(shuō)明進(jìn)行操作，運(yùn)用722 光柵分光度計(jì)對(duì)肝組織勻漿內(nèi)抗氧化能力進(jìn)行測(cè)定，然后根據(jù)相關(guān)的公式計(jì)算血清中的TC、TG、HDL 水平。

2.5 數(shù)據(jù)分析

計(jì)量資料用“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，使用SPSS 13.0 統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)單因素方差進(jìn)行分析，使用Duncan’s 法進(jìn)行多重比較。

3 分析結(jié)果

3.1 情況觀察

預(yù)防試驗(yàn)期間，觀察到牛磺酸空白組、對(duì)照組大鼠行動(dòng)敏捷，毛皮柔順有光澤，飲食正常，精神狀態(tài)良好；剩余組的大鼠在灌酒后便表現(xiàn)為嗜睡、步履蹣跚、四肢癱軟；模型組的大鼠伴有活動(dòng)量減少、反應(yīng)遲鈍、食欲下降、毛色晦暗、發(fā)育遲緩等表現(xiàn)；牛磺酸預(yù)防組的大鼠的外觀優(yōu)于模型組，其醉酒的時(shí)間更短，飲水與采食均正常，背毛也正常，與模型組相比體重增長(zhǎng)更顯著。

治療試驗(yàn)期間，觀察發(fā)現(xiàn)自然恢復(fù)組、?；撬嶂委熃M與模型組相比，飲食、運(yùn)動(dòng)、體重都有所增加，皮毛光澤逐漸恢復(fù)。治療一個(gè)月后，?；撬嶂委熃M與自然恢復(fù)組相比，體重明顯增加，其中3%牛磺酸組與5%?；撬峤M無(wú)顯著差異。治療兩個(gè)月時(shí)，全部大鼠都接近正常。

3.2 ?；撬釋?duì)大鼠血清中TC、TG、HDL 含量的影響

如表3 所示，治療一個(gè)月后，自然恢復(fù)組與對(duì)照組大鼠血清中的TC 含量相比，增加了56.13%，差異非常顯著（P<0.01）；2%牛磺酸治療組、3%?；撬嶂委熃M和5%?；撬嶂委熃MTC 含量與對(duì)照組相比分別增加了23.23%、14.84%、9.03%，差異都不明顯（P>0.05），其中，5%?；撬嶂委熃M與自然恢復(fù)組的差異非常顯著（P<0.01），而與2%?；撬嶂委熃M和3%?；撬嶂委熃M無(wú)顯著性差異（P>0.05）。治療兩個(gè)月后，自然恢復(fù)組、2%?；撬嶂委熃M、3%?；撬嶂委熃M和5%?；撬嶂委熃M與對(duì)照組相比，TC 含量分別增加了12.99%、2.60%、2.60%、1.29%，無(wú)顯著性差異（P>0.05）。

表3 大鼠血清中TC 含量的變化

如表4 所示，治療一個(gè)月后，自然恢復(fù)組與對(duì)照組大鼠血清中的TG 含量水平相比，增加了32.08%，差異顯著（P<0.05）；5%?；撬嶂委熃M、3%?；撬嶂委熃M和2%?；撬嶂委熃M分別增加了1.87%、1.87%、5.66%，差異都不顯著（P>0.05）。治療兩個(gè)月后，自然恢復(fù)組、2%牛磺酸治療組、3 牛磺酸治療組%和5%?；撬嶂委熃M與對(duì)照組相比，TG 含量水平分別增加了3.77%、1.87%、1.87%、0，無(wú)顯著性差異（P>0.05）。

表4 大鼠血清中TG 含量的變化

如表5 所示，治療一個(gè)月后，其他各組與對(duì)照組大鼠血清中的HDL 含量相比，水平均有降低，自然恢復(fù)組減少了41.23%，具有顯著差異（P<0.05）；2%?；撬嶂委熃M、3%?；撬嶂委熃M和5%?；撬嶂委熃M分別減少了32.23%、23.22%、8.06%，差異均不顯著（P>0.05）。治療兩個(gè)月后，自然恢復(fù)組、2%?；撬嶂委熃M、3%?；撬嶂委熃M和5%牛磺酸治療組與對(duì)照組相比，HDL 含量分別減少了28.50%、14.00%、9.50%、2.00%，均無(wú)顯著性差異（P>0.05）。

表5 大鼠血清中HDL 含量的變化

4 結(jié)論

試驗(yàn)結(jié)果表明，在大鼠的飲水中添加?；撬嵊兄诿黠@降低大鼠血清內(nèi)TG 的含量，其中添加5%的?；撬嵝Ч罴?，證實(shí)了應(yīng)用?；撬嵊兄诮档蚑G 的含量，抑制脂肪在肝臟內(nèi)的合成。預(yù)防性和治療性添加?；撬?，都能顯著改善乙醇對(duì)肝臟造成的損傷，有效促進(jìn)肝臟的脂質(zhì)代謝。