邵云飛 譚家玙 李成軍 劉蘇 李世廣 朱丞宇 江連強(qiáng) 張鑫 李茂業(yè)

摘要

蘋果黃蚜Aphis?citricola是為害我國蘋果、海棠和紅葉石楠等果樹和觀賞植物的重要害蟲，已對多種化學(xué)農(nóng)藥產(chǎn)生抗性。本研究測定了本實(shí)驗(yàn)室研發(fā)的刀孢蠟蚧菌Lecanicillium?psalliotae?YJ007油劑對蘋果黃蚜的室內(nèi)毒力及田間藥效。結(jié)果表明，YJ007油劑500倍稀釋液（4.0×105孢子/mL）處理2、3齡和4齡若蟲，藥后7?d的累計(jì)校正死亡率分別為85.17%、92.94%和97.04%。4齡若蟲在處理后2?d行動遲緩，處理后3?d，足和頭部出現(xiàn)白色菌絲且大量幼蟲死亡，最后菌絲布滿試蟲體表并產(chǎn)出大量孢子。YJ007油劑500倍稀釋液對蘋果黃蚜7?d的田間校正防治效果為86.78%。因此，YJ007油劑在蘋果黃蚜生物防治中具有極大推廣應(yīng)用價(jià)值。

關(guān)鍵詞

蘋果黃蚜;?刀孢蠟蚧菌;?油劑;?生物防治

中圖分類號：

S?482.39

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：?B

DOI：?10.16688/j.zwbh.2022118

Laboratory?toxicity?test?and?field?efficacy?evaluation?of?an?oil?formulation?of?Lecanicillium?psalliotae?against?Aphis?citricola

SHAO?Yunfei1#，?TAN?Jiayu1#，?LI?Chengjun2*，?LIU?Su1，?LI?Shiguang1，?ZHU?Chengyu1，JIANG?Lianqiang3，?ZHANG?Xin4，?LI?Maoye1*

（1.?Key?Laboratory?for?Biology?and?Sustainable?Management?of?Plant?Diseases?and?Pests?of?Anhui?Higher?Education

Institutes，?College?of?Plant?Protection，?Anhui?Agricultural?University，?Hefei?230036，?China;?2.?Key?Laboratory?for

Green?Preservation?and?Control?of?Tobacco?Diseases?and?Pests?in?Huanghuai?Growing?Area，?Tobacco?Research

Institute，?Henan?Academy?of?Agricultural?Sciences，?Xuchang?461000，?China;?3.?Liangshan?Branch?of?Sichuan

Tobacco?Corporation，?Xichang?615000，?China;?4.?Jixi?Bureau?of?Agriculture，?Rural?Affairs?and?Water?Resources，

Anhui?Province，?Xuancheng?245399，?China）

Abstract

In?China，?the?spiraea?aphid?（Aphis?citricola）?is?an?important?insect?pest?of?fruit?trees?and?ornamental?plants，?such?as?apple，?crabapple?and?photinia.?The?insect?pest?has?developed?resistance?to?various?chemical?insecticides.?In?this?paper，?the?laboratory?toxicity?and?field?efficacy?of?YJ007，?an?oil?formulation?of?Lecanicillium?psalliotae?developed?in?our?laboratory，?against?A.citricola?was?investigated.?The?results?showed?that?the?cumulative?corrected?mortality?of?the?2nd，?3rd，?and?4thinstar?nymphs?treated?with?500fold?YJ007?dilution?（4.0×105conidia/mL）?were?85.17%，?92.94%，?and?97.04%?seven?days?after?treatment，?respectively.?The?movement?of?tested?the?4thinstar?nymphs?was?slowed?down?two?days?after?spraying?with?YJ007?oil?formulation，?then?white?hyphae?appeared?in?the?foot?and?head?of?the?nymphs?three?days?after?spraying，?and?a?large?number?of?treated?aphids?died.?Finally，?the?hyphae?covered?the?surface?of?the?insects?and?produced?a?great?number?of?spores.?In?the?field?experiment，?the?corrected?control?efficacy?of?YJ007?oil?formulation?on?aphids?was?86.78%?seven?days?after?treatment.?Taken?together，?YJ007?oil?formulation?has?a?great?application?value?for?the?biological?control?of?A.citricola.

Key?words

Aphis?citricola;?Lecanicillium?psalliotae;?oil?formulation;?biological?control

蘋果黃蚜Aphis?citricola屬半翅目Hemiptera蚜科Aphididae，主要以成蟲、若蟲在蘋果、海棠、紅葉石楠Photinia?serratifolia等薔薇科植物的新梢嫩葉背面聚集，刺吸葉片汁液［12］。被蘋果黃蚜取食為害的葉片向背面卷曲皺縮，植株的生長受到抑制［34］，受害嚴(yán)重時(shí)植株死亡［56］。

蘋果黃蚜具有繁殖力強(qiáng)、世代短等特點(diǎn)?；瘜W(xué)防治是當(dāng)前控制蘋果黃蚜為害的主要方法［7］。由于長時(shí)間高劑量地使用化學(xué)農(nóng)藥，蘋果黃蚜對常用殺蟲劑產(chǎn)生了不同程度的抗性［89］。隨著人們對綠色、健康食品需求的增加，蘋果黃蚜的防治策略需要逐步轉(zhuǎn)變?yōu)橐陨锓乐螢楹诵牡木C合治理。研究者對昆蟲病原真菌防治害蟲進(jìn)行了深入研究，并將昆蟲病原真菌應(yīng)用于多種刺吸式口器害蟲的防治中［1011］。例如利用球孢白僵菌Beauveria?bassiana防治煙粉虱Bemisia?tabaci和桃蚜Myzus?persicae［1214］，利用長孢蠟蚧菌Lecanicillium?longisporum防治豌豆蚜Acyrthosiphon?pisum［15］，利用黃綠綠僵菌Metarhizium?flavoviride防治煙粉虱［16］。雖然昆蟲病原真菌對害蟲具有較高的致病力和較強(qiáng)的專一性，但是真菌在田間使用時(shí)容易受到光照、溫度、濕度等因素限制，使其防治效果無法得到保證［1718］。

將真菌孢子與助劑結(jié)合能夠提高其穩(wěn)定性，并且能夠延長菌劑的持效期［19］。真菌分生孢子在油類物質(zhì)中能夠較長時(shí)間保持活性，因此油劑是能夠較長時(shí)間維持微生物活性的劑型種類［20］。此外，油類介質(zhì)能夠提高真菌孢子的黏著度，增加孢子在昆蟲體表的附著量。研究表明，金龜子綠僵菌M.anisopliae油劑對蕭氏松莖象Hylobitelus?xiaoi和李氏大足蝗Aeropus?licenti具有高毒力［2122］，球孢白僵菌油劑對馬尾松毛蟲Dendrolimus?punctatus具有顯著防效［23］。

本課題組前期篩選獲得了一株導(dǎo)致桃蚜7?d累計(jì)死亡率高達(dá)94.17%的刀孢蠟蚧菌Lecanicillium?psalliotae?HFLP006菌株［24］，對該菌株的培養(yǎng)條件進(jìn)行了優(yōu)化［25］，并基于該菌株初步研制了YJ007油劑（未發(fā)表）。本研究評價(jià)了YJ007油劑對蘋果黃蚜不同齡期若蟲室內(nèi)毒力以及田間防效，分析了真菌孢子濃度與油劑致病力的關(guān)系，并觀察了YJ007油劑對蘋果黃蚜的侵染過程，以期為應(yīng)用YJ007油劑防治蘋果黃蚜提供理論基礎(chǔ)。

1?材料與方法

1.1?材料

供試YJ007油劑由本實(shí)驗(yàn)室研制，主要成分包括HFLP006菌株［24］與抗氧化劑、紫外保護(hù)劑、穩(wěn)定劑、乳化劑等助劑。

蘋果黃蚜采自安徽省合肥市蜀山區(qū)安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)萃園。試蟲在人工氣候培養(yǎng)室內(nèi)的紅葉石楠上培養(yǎng)繁殖10代以上。為獲得相同齡期和體態(tài)大小一致的蘋果黃蚜若蟲，用軟毛刷輕輕挑取大量成蚜移到新鮮紅葉石楠嫩葉背面，6?h后成蚜孤雌生殖產(chǎn)生若蚜，將成蚜移回原先所在植株，將附著若蚜的紅葉石楠放置于25℃恒溫箱中，待蘋果黃蚜發(fā)育至相應(yīng)齡期后，用軟毛刷挑取2、3、4齡若蟲進(jìn)行試驗(yàn)。

1.2?方法

1.2.1?室內(nèi)毒力測定

采用噴霧法［26］進(jìn)行室內(nèi)毒力測定。在預(yù)試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，將YJ007油劑分別用無菌水稀釋500倍（4.0×105孢子/mL）、800倍（2.5×105孢子/mL）和1?000倍（2.0×105孢子/mL）。采集試驗(yàn)田中沒有噴施過化學(xué)藥劑的新鮮紅葉石楠葉片，用75%乙醇消毒，無菌水沖洗后自然風(fēng)干。使用濕潤的滅菌脫脂棉球包住葉柄基部，然后將葉片背面朝上放置于鋪有濕潤濾紙的90?mm培養(yǎng)皿內(nèi)。用毛筆尖輕輕地把2、3、4齡若蟲轉(zhuǎn)移到紅葉石楠葉片背面，每個(gè)培養(yǎng)皿30頭，隨后使用小型噴壺噴霧，每次施藥量控制為1?mL，施藥完成后用透明保鮮膜封好，用昆蟲針在保鮮膜上扎20個(gè)孔。每處理3次重復(fù)，以無菌水為空白對照。處理后將培養(yǎng)皿置于溫度（25±1）℃，相對濕度（85±3）%，光周期?L∥D=16?h∥8?h的人工氣候箱中。每天記錄死亡蟲數(shù)，連續(xù)觀察7?d，用毛筆尖輕觸蟲體，足、觸角均無任何反應(yīng)則計(jì)為死亡，將死蟲取出后保濕培養(yǎng)，使用體視顯微鏡（SZX12型，北京京百卓顯科技有限公司）觀察，若試蟲體表長出菌絲，確定是真菌侵染致死。

1.2.2?田間藥效試驗(yàn)

田間藥效試驗(yàn)在安徽省合肥市安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)萃園紅葉石楠種植區(qū)進(jìn)行。試驗(yàn)田地勢平坦，土壤肥力中等，試驗(yàn)前30?d未噴施過任何藥劑。試驗(yàn)共設(shè)置4個(gè)處理，分別為YJ007?油劑500倍稀釋液（4.0×105孢子/mL）、800倍稀釋液（2.5×105孢子/mL）、1?000倍稀釋液（2.0×105孢子/mL）以及清水對照。每處理設(shè)3次重復(fù)，共12個(gè)小區(qū)。每小區(qū)面積約4?m2，種有32株紅葉石楠。各試驗(yàn)小區(qū)之間相隔約6?m。采用16?L背負(fù)式手動噴霧器進(jìn)行整株噴霧處理，葉片正反面均勻噴霧。施藥之前，每小區(qū)5點(diǎn)取樣，每點(diǎn)固定3株，每株固定3片葉，調(diào)查蘋果黃蚜蟲口基數(shù)。施藥后，連續(xù)7?d調(diào)查各處理活蟲數(shù)，計(jì)算蟲口減退率以及校正防治效果。

1.3?數(shù)據(jù)分析

用WPS?Office?2019軟件整理數(shù)據(jù)并計(jì)算校正死亡率、蟲口減退率和校正防治效果。使用DPS?7.05軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)算毒力回歸方程、致死中時(shí)間（LT50）以及95%置信區(qū)間，并采用Duncan氏新復(fù)極差法進(jìn)行差異顯著性分析。

校正死亡率=（處理組死亡率－對照組死亡率）/（1－對照組死亡率）×100%;

蟲口減退率＝（藥前蟲口基數(shù)－藥后活蟲數(shù)）/藥前蟲口基數(shù)×100%;

校正防治效果＝［（處理蟲口減退率－空白對照蟲口減退率）/（1－空白對照蟲口減退率）］×100%。

2?結(jié)果與分析

2.1?刀孢蠟蚧菌YJ007油劑對蘋果黃蚜的室內(nèi)毒力

YJ007油劑對3個(gè)齡期蘋果黃蚜的毒力均隨著油劑濃度增加以及用藥時(shí)間的延長而提高。不同濃度的YJ007油劑處理后，3個(gè)齡期若蚜7?d累計(jì)校正死亡率存在顯著差異（2齡：F2，6=12.56，?P<0.05;?3齡：F2，6=14.87，?P<0.05;?4齡：F2，6=10.00，?P<0.05）。其中YJ007油劑對4齡若蟲致病力最高，其500、800倍和1?000倍稀釋液處理后7?d，4齡若蟲的累計(jì)校正死亡率分別為97.04%、91.17%和83.98%，LT50分別為3.01、3.30?d和3.62?d（表1）;?3齡若蟲7?d的累計(jì)校正死亡率均在81.64%以上，LT50最小為3.18?d（表1）;對2齡若蟲致病力相對較低，7?d的累計(jì)校正死亡率在69.00%以上，LT50最小為3.68?d（表1）。?YJ007油劑對3個(gè)齡期蘋果黃蚜若蟲的室內(nèi)毒力排序?yàn)椋?齡若蟲＞3齡若蟲＞2齡若蟲。

利用體視顯微鏡觀察YJ007油劑對蘋果黃蚜4齡若蟲的侵染過程，結(jié)果顯示，500倍稀釋液處理后2?d，試蟲行動遲緩，胸部逐漸變?yōu)槌嗪稚共砍霈F(xiàn)褐色斑點(diǎn)，處理后3?d，試蟲足和頭部出現(xiàn)少量白色菌絲，胸部和腹部變?yōu)楹诤稚?，此時(shí)蚜蟲大量死亡，之后白色菌絲布滿蟲體并產(chǎn)生大量孢子（圖1）。

2.2?刀孢蠟蚧菌油劑對蘋果黃蚜的田間防治效果

田間藥效試驗(yàn)結(jié)果（表2）表明，YJ007油劑500、800倍和1?000倍稀釋液對田間蘋果黃蚜均具有一定的防治效果，3?d校正防治效果均可達(dá)到31%以上，5?d均可達(dá)到59%以上。不同濃度的YJ007對田間蘋果黃蚜7?d校正防治效果存在顯著差異（F2，6=41.72，?P<0.05），其中500倍稀釋液（4.0×105孢子/mL）的校正防效（86.78%）顯著高于其他兩個(gè)處理，且致死速率最快;800倍稀釋液（2.5×105孢子/mL）校正防效為80.00%;1?000倍稀釋液（2.0×105孢子/mL）時(shí)田間校正防效最差，僅為64.10%，致死速率最慢。

3?結(jié)論與討論

本研究評價(jià)了刀孢蠟蚧菌YJ007油劑對蘋果黃蚜的防治效果。YJ007是基于本實(shí)驗(yàn)室分離的刀孢蠟蚧菌HFLP006菌株而研制的真菌制劑。HFLP006菌株分離于自然感病的桃蚜僵蟲，對桃蚜具有很強(qiáng)致病力且易于大規(guī)模發(fā)酵生產(chǎn)［25］，適合開發(fā)為真菌殺蟲劑。真菌殺蟲劑能夠提高真菌孢子對害蟲的致病力，當(dāng)前已有多種真菌殺蟲劑被報(bào)道。徐文靜等［27］研究了球孢白僵菌可濕性粉劑防治亞洲玉米螟Ostrinia?furnacalis。武海峰等［28］論述了白僵菌懸乳劑研制及其對玉米螟的防治效果。農(nóng)向群等［29］綜述了綠僵菌屬M(fèi)etarhizium真菌可濕性粉劑、顆粒劑、粉劑等劑型的主要特點(diǎn)。目前，關(guān)于刀孢蠟蚧菌劑型尚未見報(bào)道。另一方面，YJ007對其他種類蚜蟲是否具有防治效果，也需要進(jìn)一步研究。

當(dāng)前真菌殺蟲劑的劑型有水分散粒劑、粉劑、顆粒劑、油劑等。其中，油劑不僅能改善真菌孢子對自然界不利環(huán)境的適應(yīng)性，而且還有利于孢子吸附于昆蟲體表的疏水基質(zhì)，增加對靶標(biāo)害蟲的毒力［21］，因而將真菌制成油劑更具有開發(fā)應(yīng)用價(jià)值。近年來，真菌油劑被廣泛應(yīng)用于防治各類害蟲。雷仲仁等［30］利用綠僵菌油劑防治東亞飛蝗Locusta?migratoria?manilensis的田間試驗(yàn)表明，綠僵菌油劑處理后6～9?d飛蝗數(shù)量顯著減少，第18天蟲口減退率可達(dá)81.1%。谷祖敏等［18］優(yōu)化了蠟蚧輪枝菌Lecanicillium?lecanii?VL17油劑配方，其在室內(nèi)對桃蚜和溫室白粉虱Trialeurodes?vaporariorum的致死率超過85%。羅成等［31］研究了球孢白僵菌油劑對斜紋夜蛾Spodoptera?litura的防效，發(fā)現(xiàn)施用后

7?d斜紋夜蛾2齡幼蟲累計(jì)死亡率達(dá)76.7%。本試驗(yàn)結(jié)果表明，YJ007油劑對蘋果黃蚜具有較高毒力，其500倍稀釋液（4.0×105孢子/mL）對蘋果黃蚜4齡若蟲室內(nèi)7?d累計(jì)校正死亡率達(dá)97.04%，LT50為3.01?d，而2齡和3齡若蟲7?d累計(jì)校正死亡率反而較低，分別為85.17%和92.94%（表1）。這

可能是由于4齡若蟲蛻皮時(shí)間間隔較長，在蛻皮之前真菌分生孢子已經(jīng)侵入試蟲體腔。而2齡若蟲蛻皮時(shí)間間隔較短，真菌分生孢子在侵入前即隨著試蟲蛻皮而脫離蟲體。劉銀泉等［32］也發(fā)現(xiàn)桃蚜若蚜蛻皮可有效擺脫球孢白僵菌分生孢子的侵染。本試驗(yàn)觀察到Y(jié)J007油劑處理蘋果黃蚜后2?d，4齡若蟲行動遲緩，3?d后足、頭部長出少量菌絲并且腹部出現(xiàn)褐色斑點(diǎn)（圖1）。這可能是由于真菌菌絲首先侵入昆蟲足和頭部，菌絲逐漸向外生長的同時(shí)侵入試蟲體表并在體內(nèi)增殖所致。隨著真菌在蟲體內(nèi)的繁殖，蟲體逐漸變褐并皺縮干癟，體表長出大量菌絲并產(chǎn)生孢子（圖1），這可能是真菌大量增殖并快速吸收試蟲體內(nèi)營養(yǎng)物質(zhì)而產(chǎn)生的現(xiàn)象。

綜上所述，基于刀孢蠟蚧菌HFLP006菌株制成的YJ007油劑在室內(nèi)和田間對蘋果黃蚜均有致病力強(qiáng)、作用時(shí)間短等優(yōu)勢，具有極大的田間推廣應(yīng)用潛力。需要指出的是，本研究只探討了YJ007油劑對蘋果黃蚜的防治效果，未研究該油劑對田間

害蟲的持續(xù)控制效果。在后續(xù)試驗(yàn)中，我們將對此開展深入研究，為利用YJ007油劑防治蘋果黃蚜奠定基礎(chǔ)。

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