代杜娟，張曼，范良義，杜海娜，董靜，高云霓，李學(xué)軍

（河南師范大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，河南 新鄉(xiāng) 453007）

《中國(guó)漁業(yè)統(tǒng)計(jì)年鑒2020》數(shù)據(jù)顯示，2019 年我國(guó)淡水養(yǎng)殖中池塘養(yǎng)殖所占比重高達(dá)51.69%，是淡水養(yǎng)殖的主要養(yǎng)殖方式。池塘養(yǎng)殖在帶來(lái)巨大產(chǎn)量及經(jīng)濟(jì)效益的同時(shí)也帶來(lái)了一系列生態(tài)環(huán)境問(wèn)題。水質(zhì)的優(yōu)劣直接關(guān)系著養(yǎng)殖水產(chǎn)品的質(zhì)量與安全。常用來(lái)反映水質(zhì)的指標(biāo)有水體理化指標(biāo)和生物指標(biāo)等。浮游藻類作為水域生態(tài)系統(tǒng)中的初級(jí)生產(chǎn)者，與水環(huán)境、水體水質(zhì)狀況關(guān)聯(lián)，常用來(lái)做水環(huán)境水體評(píng)價(jià)指標(biāo)。

為摸清河南養(yǎng)殖池塘藻類多樣性，提升池塘集約化養(yǎng)殖水質(zhì)管理水平，在2019 年春、夏兩季共采集349 個(gè)養(yǎng)殖池塘水樣，涵蓋全省18 個(gè)市。在鑒定中，硅藻細(xì)胞形態(tài)上復(fù)雜多變，通常通過(guò)觀察其細(xì)胞壁形態(tài)、結(jié)構(gòu)和紋飾等特征對(duì)硅藻門藻類進(jìn)行分類，而色素體存在有時(shí)候會(huì)影響硅藻細(xì)胞壁的觀察，需要在光鏡鑒定的基礎(chǔ)上利用電子顯微鏡進(jìn)行進(jìn)一步確認(rèn)。

通過(guò)觀察硅藻殼面花紋和殼縫發(fā)現(xiàn)了1 種形態(tài)上與其他養(yǎng)殖池塘藻類不同的硅藻，屬于舟形藻科（Naviculaceae）塘生藻屬（Eolimna），被定名為小塘生藻（Eolimna subminuscula）[1]。

1 材料與方法

1.1 樣品采集地與水體理化指標(biāo)的測(cè)定

在采集的349 個(gè)養(yǎng)殖池塘中，在河南省許昌市襄城縣茨溝襄城藝景園林有限公司（33°50'12.56"N，113°35'57.63"E）的浮游植物樣品中發(fā)現(xiàn)了小塘生藻。該養(yǎng)殖池塘泥底質(zhì)，主養(yǎng)草魚（Ctenopharyngodon idella）、混養(yǎng)青魚（Mylopharyngodon piceus），養(yǎng)殖密度0.30 kg/m2，采用地下水養(yǎng)殖。采用水質(zhì)分析儀現(xiàn)場(chǎng)測(cè)定養(yǎng)殖池塘水體的溫度（WT）、電導(dǎo)率（EC）、pH、溶解氧（DO）含量。取1 L 水樣，于48 h 內(nèi)測(cè)定水體的堿度、可溶性總有機(jī)碳、可溶性總無(wú)機(jī)碳、可溶性總碳、氨氮、正磷酸鹽、硝態(tài)氮、亞硝態(tài)氮、葉綠素a 等含量，測(cè)定方法參照《水和廢水監(jiān)測(cè)分析方法》[2]。

1.2 水體營(yíng)養(yǎng)狀況評(píng)價(jià)方法

用透明度、磷和葉綠素a 含量評(píng)價(jià)水體營(yíng)養(yǎng)狀況（表1）。以營(yíng)養(yǎng)狀況指數(shù)（TSI）判斷水體營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)，：當(dāng)TSI＜40，水體屬于貧營(yíng)養(yǎng)；40≤TSI≤50，水體屬于中營(yíng)養(yǎng)；TSI＞50，水體富營(yíng)養(yǎng)[3]。

表1 水體營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)指數(shù)及其相關(guān)參數(shù)Tab.1 Completed trophic state index and its associated parameters

1.3 樣品采集與鑒定

用深水采水器采集水下0.5 m 處的水樣1 L，立即加入1%的甲醛溶液固定浮游植物，靜置沉降48 h，用虹吸管緩慢抽取上清液，留下約30 mL 的沉淀溶液用于浮游藻類鑒定。

取樣鑒定時(shí)，搖勻沉淀藻類，用移液器吸取沉淀物0.1 mL 于浮游植物計(jì)數(shù)框，在光學(xué)顯微鏡（Nikon Eclipse E100）下觀察藻類形態(tài)特征初步鑒定種類[4]并計(jì)算數(shù)量。

硅藻門種類的進(jìn)一步鑒定用掃描電子顯微鏡觀察，具體步驟為：將適量藻液置于燒杯中，加入等量濃硝酸于60℃～70℃加熱30 min 去除有機(jī)物，靜置24 h 以上，去除上清液，再加入蒸餾水靜置5 h以上，反復(fù)清洗直至液體無(wú)色。取適量沉淀藻液制片，經(jīng)真空干燥并噴金，在超高分辨熱場(chǎng)發(fā)射掃描電鏡（日本電子，JSM-7800F）下拍攝硅藻裝片。

2 結(jié)果與分析

2.1 新紀(jì)錄種的形態(tài)特征

小塘生藻（Eolimna subminuscula）屬于硅藻門（Bacillariophyta）硅藻綱（Bacillariophyceae）舟形藻目（Naviculales）舟形藻科（Naviculaceae）塘生藻屬（Eolimna）[1]。

光學(xué)顯微鏡（LM）下（圖1）：殼面呈橢圓披針形，殼面寬3.3～5.0 μm，長(zhǎng)7.3～10.5 μm。片狀色素體位于藻細(xì)胞兩極。通常在高倍鏡下，可見點(diǎn)紋圓形或沿中心伸長(zhǎng)。

掃描電子顯微鏡（SEM）下：殼面彎曲，殼縫呈線形，末端極節(jié)向一側(cè)略彎曲，中軸區(qū)向兩端加厚，呈線形，僅在中心稍微變寬，橫向點(diǎn)紋在中央平行排列，兩端點(diǎn)紋略呈輻射狀分布（圖2）。

圖2 小塘生藻掃描電鏡照片F(xiàn)ig.2 The scanning electric-microscopic photograph of Eolimna subminuscula

2.2 水體理化性質(zhì)特征

2019 年8 月15 日，小塘生藻采集地襄城縣茨溝水體理化性質(zhì)特征見表2?，F(xiàn)行的《中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)-漁業(yè)水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)》[5]要求養(yǎng)殖水體氮含量小于或等于50 μg·L-1，而該養(yǎng)殖水體氨氮含量高達(dá)76.72 μg·L-1，超過(guò)規(guī)定的氮含量。

表2 小塘生藻采樣地水體理化性質(zhì)特征Tab.2 Physical and chemical characteristics of the Eolimna subminuscula sampling sites

該池塘水體透明度為22 cm，磷含量為263.64 μg·L-1，葉綠素a 含量達(dá)3 837.16 μg·L-1，得出該水體TSI=90＞50，屬于富營(yíng)養(yǎng)化水體。

2.3 浮游植物群落組成

本樣品采集地共鑒定浮游藻類20 種（含變種），隸屬于3 門（藍(lán)藻門、硅藻門和綠藻門）4 綱9目11 科17 屬。其中藍(lán)藻門種類占15.00%，硅藻門種類占35.00%，綠藻門種類占50.00%。

圖3 采樣地浮游藻類種類組成Fig.3 Phytoplankton species composition in sampling sites

該養(yǎng)殖池塘發(fā)現(xiàn)的藍(lán)藻門浮游藻類豐度最高，總豐度18.35×105個(gè)·L-1；其中微囊藻（Microcystis sp.）占該水體浮游藻類總豐度的75.57%。水體中藍(lán)藻形成優(yōu)勢(shì)，這與該水體富營(yíng)養(yǎng)化的特征相適應(yīng)。水體浮游藻類總豐度為24.11×105個(gè)·L-1，總生物量為23.13 mg·L-1，其中硅藻門浮游藻類豐度占18.50%，生物量占69.04%，其中小塘生藻豐度和生物量分別占總豐度和總生物量的0.62%和3.32%；占硅藻豐度和生物量的3.36%和4.82%?？傮w來(lái)說(shuō)，小塘生藻在該池塘并未形成優(yōu)勢(shì)類群，為偶見種。

3 討論

3.1 小塘生藻的分類學(xué)地位

1997 年塘生藻屬最早由Lange-Bertalot&Schiller提出，該屬種類較少，目前僅發(fā)現(xiàn)11 種[6-11]，中國(guó)僅報(bào)道1 種。塘生藻屬藻類常以單細(xì)胞存在，藻細(xì)胞較小，殼環(huán)狹窄；簡(jiǎn)單蜂窩狀的肋突結(jié)構(gòu)；被膜覆蓋的孔紋位于大孔內(nèi)部或外部的中部；具有一排或多或少不規(guī)則排列的彼此靠近的孔紋，位于一個(gè)或多個(gè)節(jié)間帶上，典型種類為Eolimna martini[10]。

塘生藻屬在分類地位上曾被歸為舟形藻屬（Navicula）。如Eolimna adnate Hustedt 曾被命名為Navicula adnata Hustedt[12]，1998 在新種分類時(shí)把這種藻類劃分到鞍形藻科塘生藻屬[6]。塘生藻屬和舟形藻屬在形態(tài)上相似，但略有不同，塘生藻屬的殼面呈橢圓披針形或?qū)捙樞?，殼面花紋在光鏡下常以點(diǎn)紋形式出現(xiàn)，呈輻射狀排列[1]；舟形藻屬殼面并不呈橢圓披針形或?qū)捙樞危灾坌纬Ｒ?，殼面在光鏡下常見橫線紋單列，少數(shù)呈雙列排布[13]。2001年Beszteri 等[14]基于18S 基因構(gòu)建了藻類的系統(tǒng)發(fā)育樹，指出小塘生藻以及Eolimna minima 親緣關(guān)系與舟形藻屬植物較遠(yuǎn)，建議單獨(dú)分屬。小塘生藻在我國(guó)也有報(bào)道，但鑒于前期模糊的分類地位，報(bào)道時(shí)均被命名為小舟形藻（Navicula subminuscula）[15-17]。

3.2 小塘生藻生境特點(diǎn)分析

關(guān)于小塘生藻在自然水體中的分布有一些報(bào)道。在澳大利亞維多利亞州西北部，以固著藻類狀態(tài)分布在與墨累河相連的3 個(gè)濕地中，更適應(yīng)中鹽度水體[18]，在中鹽度的濕地中分布較廣；2000—2002年Salomoni 等在調(diào)查巴西格拉瓦塔河時(shí)，小塘生藻作為嚴(yán)重有機(jī)污染和富營(yíng)養(yǎng)化耐受物種有分布[19]。小塘生藻在我國(guó)自然水體也有分布，主要集中在我國(guó)南方地區(qū)，且在多地和多個(gè)地點(diǎn)形成優(yōu)勢(shì)種[15-17]。2014 年，在我國(guó)的一個(gè)亞熱帶河流—漢江，小塘生藻則被認(rèn)為是河流高氮含量的指示生物被報(bào)道[20]。藻類結(jié)構(gòu)能在水化指標(biāo)的基礎(chǔ)上進(jìn)一步反映出水體的理化性質(zhì)，優(yōu)勢(shì)種藻類的形成與所在水體營(yíng)養(yǎng)狀況相關(guān)。小塘生藻的形成優(yōu)勢(shì)反映出當(dāng)?shù)氐乃w氮元素水平較高。水體營(yíng)養(yǎng)指數(shù)顯示，該養(yǎng)殖池塘處于富營(yíng)養(yǎng)狀況：水體中氮、磷等營(yíng)養(yǎng)鹽含量處于較高水平，微囊藻等污染種類占比較高，這與小塘生藻耐污染的特點(diǎn)相適應(yīng)。

表3 采樣地浮游藻類的豐度與生物量Tab.3 The abundance and biomass of phytoplankton in the sampling sites

迄今為止，國(guó)內(nèi)外對(duì)藻類資源的調(diào)查都集中于河流湖泊等自然水域，對(duì)于小塘生藻的報(bào)道都集中在自然水體，但對(duì)漁業(yè)水體中藻類資源的研究相對(duì)較少，也未在漁業(yè)用水的報(bào)道中發(fā)現(xiàn)小塘生藻。本次在高營(yíng)養(yǎng)養(yǎng)殖池塘水體發(fā)現(xiàn)小塘生藻，這與其耐污染的特點(diǎn)相適應(yīng)。作為養(yǎng)殖池塘生產(chǎn)者之一，小塘生藻可能和漁業(yè)水體中的其它藻類一起形成藻類功能團(tuán)，在漁業(yè)養(yǎng)殖水體環(huán)境中發(fā)揮重要的生態(tài)作用，具體作用值得進(jìn)一步研究。養(yǎng)殖池塘新記錄種小塘生藻的發(fā)現(xiàn)豐富了中國(guó)浮游植物的藻類類群，為藻類資源的保護(hù)和利用提供了重要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。