陳姍姍，李婧，李超，吳坤，劉李婷

陜西省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)研究院農(nóng)副食品所（西安 710048）

黃曲霉毒素B1（Aflatoxin B1，AFB1）是二氫呋喃氧雜萘鄰?fù)难苌?，含有一個(gè)雙呋喃環(huán)和一個(gè)氧雜萘鄰?fù)ㄏ愣顾兀FB1是已知的化學(xué)物質(zhì)中致癌性最強(qiáng)的一種。AFB1對(duì)包括人和若干動(dòng)物具有強(qiáng)烈的毒性，其毒性作用主要是對(duì)肝臟的損害。在天然食物中以AFB1在各種黃曲霉毒素中最為多見(jiàn)，危害性也最強(qiáng)，國(guó)家質(zhì)檢總局規(guī)定AFB1是大部分食品的必檢項(xiàng)目之一[7]。其中，堅(jiān)果類食品與植物油類食品檢出率最高，試驗(yàn)通過(guò)植物油在不同周期內(nèi)產(chǎn)生的AFB1含量進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)測(cè)試，從而得到AFB1在一定周期內(nèi)的穩(wěn)定性[1]。

1 材料與方法

采用GB 5009.22—2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中黃曲霉毒素B族和G族的測(cè)定》[8]第三法 高效液相色譜-柱后衍生法。

樣品用乙腈和水超聲提取后，稀釋，稀釋液過(guò)免疫親和柱，收集洗脫液經(jīng)氮吹流動(dòng)相定容，上機(jī)測(cè)定。均勻性試驗(yàn)：分別測(cè)定10組A、B、C（A、B、C為三個(gè)不同濃度的樣品）的平行樣中的AFB1。穩(wěn)定性試驗(yàn)：在均勻性試驗(yàn)后，分3次間隔5～7 d后測(cè)定A、B、C各10個(gè)樣中的AFB1含量。

1.1 材料與試劑

乙腈、水、吐溫20、甲醇。

1.2 儀器與設(shè)備

高效液相色譜儀，日本島津，型號(hào)LC-20AD，配有熒光檢測(cè)器、分析天平、光化學(xué)衍生器、全自動(dòng)固相萃取儀[5]、氮吹儀。

1.3 前處理方法

稱取5 g試樣于50 mL離心管中，加入20 mL乙腈-水溶液（84+16，V/V），渦旋混勻，置于超聲波中20 min，在6 000 r/min下離心10 min，取上清液備用。準(zhǔn)確移取4 mL上清液，加入46 mL的PBS，混勻過(guò)免疫親和柱[6]。免疫親和柱內(nèi)的液體放棄后，將上述樣液過(guò)免疫親和柱，調(diào)節(jié)下滴速度，控制樣液以待樣液滴完后，加入20 mL水每次10 mL，以穩(wěn)定流速淋洗免疫親和柱。待水滴完后，抽干親和柱。在親和柱下部放置10 mL刻度試管，用2 mL甲醇洗脫親和柱，控制1～3 mL/min的速度下滴，再抽干親和柱，收集全部洗脫液至試管中。在50 ℃下用氮?dú)饩従彽貙⑾疵撘捍抵两?，用初始流?dòng)相定容至1.0 mL，渦旋30 s溶解殘留物，經(jīng)0.22 μm濾膜過(guò)濾，收集濾液于進(jìn)樣瓶中以備進(jìn)樣，同時(shí)做空白試驗(yàn)。同時(shí)加質(zhì)控試驗(yàn)。

1.4 數(shù)據(jù)分析統(tǒng)計(jì)

對(duì)A、B、C這3組植物油中AFB1含量進(jìn)行均勻性評(píng)價(jià)、穩(wěn)定性評(píng)價(jià)。對(duì)采用GB 5009.22—2016[4]中的第一法、第二法與第三法的結(jié)果進(jìn)行方法間比對(duì)。

2 樣品均勻性及穩(wěn)定性檢驗(yàn)

2.1 均勻性檢驗(yàn)

按照CNAS-GL003：2018《能力驗(yàn)證樣品均勻性和穩(wěn)定性評(píng)價(jià)指南》[2]的規(guī)定，采用單因子方差分析法進(jìn)行樣品均勻性檢驗(yàn)。從制備好的A、B、C的3個(gè)濃度水平樣品中隨機(jī)抽取10份樣品用于均勻性檢驗(yàn)，每個(gè)樣品重復(fù)測(cè)定2次。在短時(shí)間內(nèi)由同一測(cè)試人員，使用GB 5009.22—2016[9]的測(cè)試方法、相同測(cè)試條件對(duì)樣品進(jìn)行項(xiàng)目的檢測(cè)。樣品均勻性試驗(yàn)采用單因子方差統(tǒng)計(jì)分析進(jìn)行評(píng)定，只有當(dāng)樣品中檢測(cè)含量的F值小于F臨界值（F0.05(9,10)=3.02）時(shí)，表明制備樣品均勻。樣品均勻性檢測(cè)數(shù)據(jù)見(jiàn)表1，方差分析見(jiàn)表2。

2.2 穩(wěn)定性檢驗(yàn)

盲樣考核參加實(shí)驗(yàn)室均在省內(nèi)，在此過(guò)程中，不同地方氣溫差異不大，盲樣考核樣品采用領(lǐng)樣形式，1 d內(nèi)可到達(dá)各參加實(shí)驗(yàn)室，樣品在傳遞過(guò)程中常溫保存。

模擬樣品傳遞過(guò)程中的條件，在試驗(yàn)期間的不同時(shí)間間隔，抽取10個(gè)樣本、每個(gè)樣本重復(fù)測(cè)定2次，檢驗(yàn)方法、檢測(cè)人員、儀器、實(shí)驗(yàn)室條件與均勻性檢驗(yàn)相同。穩(wěn)定性試驗(yàn)持續(xù)時(shí)間為21 d，測(cè)定時(shí)間間隔按先密后疏的原則設(shè)計(jì)，共分為3個(gè)間隔。樣品分別于制樣后天進(jìn)行檢測(cè)。以均勻性試驗(yàn)所得結(jié)果為參比數(shù)據(jù)，采用t檢驗(yàn)方法進(jìn)行穩(wěn)定性檢驗(yàn)。當(dāng)t值小于tα（n1+n2-2）時(shí)，則表明2個(gè)平均值之間無(wú)顯著性差異，即制備樣品穩(wěn)定。樣品穩(wěn)定性性檢測(cè)數(shù)據(jù)見(jiàn)表3。

表3 測(cè)定結(jié)果 單位：μg/kg

3 結(jié)果與分析

通過(guò)測(cè)定分析A、B、C的3組濃度水平的樣品，結(jié)果表明，在室溫25 ℃左右時(shí)，無(wú)顯著性差異體現(xiàn)于樣品內(nèi)和樣品間，樣品均勻性結(jié)果合格，在1月內(nèi)樣品穩(wěn)定性結(jié)果合格。證明這3濃度水平樣品有良好的均勻性和穩(wěn)定性，可作為植物油中AFB1含量測(cè)定的能力驗(yàn)證樣品[3]。

4 結(jié)論

通過(guò)此次試驗(yàn)結(jié)果得到黃曲霉毒素B1在固定的環(huán)境溫度影響下一個(gè)月之內(nèi)黃曲霉毒素B1含量可穩(wěn)定不變的規(guī)律性，從而為各個(gè)實(shí)驗(yàn)室在制作盲樣考核數(shù)據(jù)提供參考，得到數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。