沈金陽,張烜,于媛媛,張世誠,施柳清,董自波,3

(1.江蘇海洋大學(xué) 藥學(xué)院,江蘇 連云港 222000;2.連云港貴科藥業(yè)有限公司,江蘇 連云港 222000;3.江蘇省海洋藥用資源開發(fā)工程研究中心,江蘇 連云港 222001)

地球的大部分面積是海洋,海洋也是生命的起源地.海洋的環(huán)境有其獨特性,如溫度低、光照弱、大氣壓高、鹽度高,而且營養(yǎng)含量低,海洋生物為了適應(yīng)這種特殊的環(huán)境,在其生長和代謝進程中,也產(chǎn)生了許多陸地生物不存在的具有特殊結(jié)構(gòu)和功能活性物質(zhì)[1].目前,科學(xué)家對海洋生物的興趣日趨濃厚,開始尋找海洋生物中具有抗腫瘤活性的物質(zhì),近年來取得了迅猛的發(fā)展.在美國國立癌癥研究所(national cancer institute,NCI)篩選的新型抗癌化合物中,有相當(dāng)一部分來源于海洋生物.但其中對多肽的研究相對較少,特別是對海藻多肽[2].而海藻中富含蛋白質(zhì)等活性物質(zhì),從中提取的多肽表現(xiàn)出一定的抗腫瘤活性,其最大的優(yōu)點為高效、低毒,若對活性肽做適當(dāng)?shù)膬?yōu)化改造,將其發(fā)展為藥品的潛力巨大,市場前景廣闊[3].本文主要綜述海藻多肽的提取純化和鑒定方法及抗腫瘤活性研究進展,以期為海藻多肽在藥品領(lǐng)域的開發(fā)應(yīng)用提供一定的參考.

1 海藻多肽的提取方法

對于生物體內(nèi)存在的天然多肽,可以利用傳統(tǒng)的方法如煎煮法、浸漬法和滲漉法等進行直接提取,但因為提取效率很低,現(xiàn)已少用;除此之外,還有化學(xué)提取法、酶解法和微生物發(fā)酵法等,這些方法能將蛋白的肽鏈分解成分子量和長度不同的小肽段,從而利于進一步的分離純化;而對于一些提取難度大或者無法直接提取的多肽,可以利用合成技術(shù)對氨基酸的結(jié)構(gòu)進行改造,獲取到需要的多肽[4].

1.1 化學(xué)提取法

化學(xué)提取法是指采用某些化學(xué)試劑對肽鍵進行水解,提取得到多肽的方法,多采用強酸或強堿溶液,也有研究用到甲醇或鹵代烴等試劑,因為價格低,易操作,過去廣泛應(yīng)用于多肽的提取.然而,該技術(shù)也存在一些缺陷,如工藝控制困難、很難得到期望的如具有某些特定化學(xué)成分和功能特性的產(chǎn)品,同時化學(xué)試劑往往會改變蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu),影響其有效性和安全性[5].酸水解是一種重要的化學(xué)修飾方法,能顯著改變多肽的結(jié)構(gòu)和功能性質(zhì)[6],最常用的稀酸是硫酸,其次是硝酸、鹽酸、磷酸.而堿水解常在27～54 ℃的低溫環(huán)境下使用堿金屬鹽對蛋白質(zhì)進行水解,多用到氫氧化鈣、氫氧化鈉或氫氧化鉀等,其缺點是往往會破壞絲氨酸和蘇氨酸,從而導(dǎo)致產(chǎn)品功能性差,而且部分產(chǎn)物還有致癌性[7].

林彬彬等[8]采用以氫氧化鈉為主的堿溶液提取龍須菜蛋白質(zhì),優(yōu)化堿提工藝,在最佳條件下,蛋白提取率可達88.48%,后經(jīng)研究有一定的抗氧化性.林紅衛(wèi)等[9]用十二烷基苯磺酸鈉處理鈍頂螺旋藻,濾液用硫酸銨鹽析,能得到具有抑制癌細(xì)胞作用的藻藍蛋白,其蛋白提取率非常高,接近98%. Foster等[10]使用甲醇對念珠藻反復(fù)提取后,多肽提取率得到了明顯提高,表現(xiàn)出強烈抑制腫瘤細(xì)胞存活的作用.

1.2 酶解法

酶解法是利用一種或多種酶復(fù)合方式對蛋白質(zhì)進行酶解并釋放出活性肽的方法.來源于植物的常用酶為木瓜蛋白酶,來源于動物的有胃蛋白酶、胰蛋白酶等,以及商業(yè)性質(zhì)的中性蛋白酶、堿性蛋白酶等.因為酶的專一性,每一種酶的作用位點都不同,則水解后多肽的長度和序列也不同,活性自然也就不同,所以當(dāng)需要制備活性肽時,盡量先對蛋白酶進行篩選再進行酶解[11].

近年來,有研究顯示在消化道發(fā)生酶促作用后,蛋白質(zhì)被酶水解成小分子的肽后更易被人體吸收且速度更快[12].酶解法具有反應(yīng)過程溫和、特異性強、酶解過程易于控制、不破壞氨基酸的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)等特點,但是會產(chǎn)生少量苦味肽,酶解條件要求苛刻,為使得到的活性肽具有更高的活性和產(chǎn)量,需要控制好酶的用量、pH、溫度和酶解時間等因素[13].

謝雪瓊等[14]采用2步酶解法對壇紫菜藻紅蛋白(R-phycoerythrin, R-PE)進行提取純化,得到1種有藥用價值的多肽.第1步為胃蛋白酶與R-PE質(zhì)量比1∶200,酶解30 min,pH 1.2,溫度37 ℃;第2步為胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶等量混合,混合酶與R-PE質(zhì)量比1∶400,酶解時間、溫度與第1步相同,pH為7.5,用凝膠電泳分析,2次酶解之后,R-PE被完全降解,再利用R-PE水解液制備出脯氨酰內(nèi)肽酶(prolyl endopeptidase,PEP)抑制肽,能可逆的非競爭性抑制PEP,而PEP參與人體多種生理功能調(diào)節(jié).談森焱等[15]酶解小球藻蛋白時用到的是復(fù)合酶(纖維素酶和果膠酶質(zhì)量比1∶8),當(dāng)pH 4.0,溫度55 ℃,用時5 h,此時提取條件最佳,提取得到的蛋白質(zhì)含量占小球藻干質(zhì)量的14.57%,而在未使用酶時結(jié)果僅為11.03%,可見使用酶后提取效率得到了提高.Sheih等[16]用包括胃蛋白酶、木瓜蛋白酶和堿性蛋白酶等在內(nèi)的復(fù)合酶對小球藻屬微藻提取后的廢液進行酶解,得到一種具有11個氨基酸的穩(wěn)定多肽,這種多肽不僅具備抗高血壓活性,還有助于血液循環(huán),能保持機體水分及離子濃度的穩(wěn)定.蔡思學(xué)等[17]采用纖維素酶提取紅毛藻藻紅蛋白,優(yōu)化提取條件,當(dāng)加入纖維素酶與底物質(zhì)量比為1∶40,溫度和提取時間最適宜時,提取的R-藻紅蛋白質(zhì)量濃度為43.64 mg/mL. Zheng等[18]用胃蛋白酶和木瓜蛋白酶對馬尾藻進行提取,對酶解液進行葡聚糖凝膠G-15和反相高效液相色譜分離純化,得到序列為RWDISQPY的多肽,其IC50為72.24 μmol/L,具有抗高血壓活性.

1.3 微生物發(fā)酵法

微生物發(fā)酵法比較新穎,是指海藻中的蛋白質(zhì)被微生物發(fā)酵代謝產(chǎn)生的酶分解成活性多肽的過程,目前該方法局限性較為明顯,微生物菌種大規(guī)模純化和發(fā)酵液的純化技術(shù)限制了其工業(yè)化生產(chǎn)[19].發(fā)酵法的優(yōu)勢在于成本較低、產(chǎn)量高、無污染、很少損失營養(yǎng)等,但發(fā)酵條件和水解程度不易控制,產(chǎn)物復(fù)雜而且后續(xù)分離純化困難,限制了這種技術(shù)的應(yīng)用.而微生物發(fā)酵法是在酶解法的基礎(chǔ)上延伸而來,與酶解法相比較,省略了蛋白酶的篩選這一步驟,但需對菌株進行篩選,同時由于發(fā)酵液組分相對較復(fù)雜,發(fā)酵過程用時更久.

目前這種技術(shù)在提取海藻多肽的應(yīng)用較少.張明洞[20]發(fā)明了一種利用細(xì)菌提取螺旋藻活性肽的專利,而且枯草芽孢桿菌(菌種編號1.1086)廉價易得.結(jié)果顯示,當(dāng)小于7%的含水量時制備的活性肽最多,約占螺旋藻干質(zhì)量的15%～40%,這種多肽對高血壓有一定的防治作用,且活性較強.付云[21]同樣采用枯草芽孢桿菌YA215發(fā)酵螺旋藻渣,對產(chǎn)物使用Sephadex LH-20凝膠層析和RP-HPLC分離純化,并用MALDI-TOF-MS鑒定這種多肽,經(jīng)驗證該多肽具有抗菌活性,特別對金葡菌活性很強.

1.4 超聲波法

超聲波法是把聲能轉(zhuǎn)換為機械能的方法,在聲波的作用下海藻的細(xì)胞壁破裂,細(xì)胞里的蛋白質(zhì)流出,由于超聲波頻率超過20 kHz,所以具有頻率大、波長小、穿透力強等特點,故用時短,效率高.余佳[22]以葛仙米為研究對象,對比了化學(xué)提取法、凍融法、溶脹法、超聲波法以及組織搗碎法等方式,最終發(fā)現(xiàn)超聲法藻膽蛋白提取率最高,當(dāng)葛仙米粒徑75～125 μm、超聲功率700 W,液料比58∶1、溫度42 ℃、提取6 h時,提取率達到最大為26.13%,經(jīng)后續(xù)純化,得到高純度的藻紅蛋白和藻藍蛋白.孔祥佳等[23]通過實驗優(yōu)化了超聲波法的條件,在使用酶解法之后聯(lián)合使用超聲波法,提取壇紫菜中的藻紅蛋白,當(dāng)pH、固液比、加酶量、超聲時間、功率在最優(yōu)條件下提取得到的多肽,提取率較僅使用纖維素酶有了大幅提高,同時,在纖維素酶的作用下,超聲波可大幅減少提取時間,可見超聲波明顯提高提取效率.

1.5 凍融法

凍融法是指在達到一定低溫條件下,細(xì)胞會發(fā)生溶脹從而導(dǎo)致胞內(nèi)物質(zhì)流出的一種輔助提取方法,可以反復(fù)使用凍融法提取蛋白質(zhì),這種方法在國內(nèi)外都較常使用[24].雖然這種方式操作簡單,提取率高,但用時過久[25].趙冰冰等[26]研究了巢湖水華新鮮藍藻在不同凍融環(huán)境下對藻藍蛋白提取的影響,選擇最優(yōu)凍融條件,經(jīng)實驗,當(dāng)磷酸鹽緩沖溶液(phosphate buffered saline,PBS)濃度為0.002 5 mol/L,含水量在97%左右時,藻藍蛋白的提取率和純度最高,而且僅需凍融1次即可.徐遠(yuǎn)超等[27]將紫球藻研磨成藻粉,凍融法能最大程度地將藻紅蛋白提取出來,藻紅蛋白質(zhì)量濃度能達到36 mg/L,大大高于其他化學(xué)或物理提取方法.

2 海藻多肽的分離純化方法

2.1 膜分離法

膜分離技術(shù)在多肽的提取中應(yīng)用廣泛,是一種受外界壓力作用下實現(xiàn)分離大小不同分子的技術(shù)[28].膜分離技術(shù)易操作,能隨時控制反應(yīng),而且既能實現(xiàn)分離純化又能實現(xiàn)精制,分離過程不發(fā)生相變,沒有毒性且不污染環(huán)境,基本不影響被分離物的活性.因此,膜分離技術(shù)在對氨基酸、多肽及蛋白質(zhì)等物質(zhì)的初步分離中使用較多[29].膜分離法主要分為微濾(MF)、超濾(UF)、納濾(NF)和反滲透(RO)等,由分子大小決定能否通過該濾膜[30].

王曉琴等[31]用木瓜蛋白酶對小球藻蛋白進行提取,用超濾的方法對酶解液進行分離純化,截留得到分子大小不同的3種組分,并進一步分離純化,得到純度較高的小球藻蛋白.之后均以1 mg/mL的劑量進行活性檢測,結(jié)果顯示3種酶解液對HepG2細(xì)胞增殖均具有抑制作用,但強度不同,其中平均分子質(zhì)量3 000～5 000 u對HepG2細(xì)胞增殖的抑制能力最強.白露等[32]使用木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶的混合物對提取的壇紫菜粗蛋白進行酶解,并超濾,共得到11種大小不同的組分,結(jié)果表明：平均分子質(zhì)量大于10 000 u組分對HepG2和SGC-7901的抑制率接近100%,平均分子質(zhì)量小于3 000 u組分對MCF-7、HepG2和HT-29的抑制率接近100%,其表現(xiàn)出很好的抗腫瘤活性,特別是肝癌和乳腺癌.陳麗莎等[33]利用一定比例的蛋白酶和食品級海藻酸鈉的混合物對海藻進行水解后,對水解液經(jīng)過處理并初濾后得到提取液,然后再通過分子質(zhì)量為1 200 u和500 u的納濾膜進行純化后濃縮,制得純度較高的多肽濃縮液.

2.2 色譜法

色譜法的原理是分配系數(shù)的不同.色譜法不僅分離迅速,而且反應(yīng)過程穩(wěn)定平和,能在同一時間分析多種組分,廣受青睞,在海藻多肽分離純化中應(yīng)用較多的技術(shù)包括離子交換色譜(IEC)、凝膠色譜(SEC)、反相高效液相色譜(RP-HPLC)、毛細(xì)管電色譜(CGC)、毛細(xì)管電泳(CE)等.

Strantmann等[34]用葡聚糖凝膠LH20層析柱及反相高效液相色譜對藍藻中的多肽進行分離純化,得到hapalosin多肽,這種多肽作用于KB和LoVo細(xì)胞,對人體的鼻咽癌和結(jié)直腸癌顯示出細(xì)胞毒性作用.Edwards等[35]用二氯甲烷/甲醇(體積比為2∶1)對鞘絲藻進行提取,用真空液相色譜(VLC)進行分離,得到Jamaicamides A-C,這些多肽對人的肺癌細(xì)胞H-460和神經(jīng)-2A小鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株具有抑制增殖的效果.楊超凡[36]用4-嗎啉乙磺酸(MES)溶液對紅胞藻進行提取,并輔助使用凍融法,反復(fù)凍融4次,采用硫酸銨沉淀法進行沉淀,最后利用葡聚糖凝膠色譜Sephadex G-100進行蛋白純化,藻紅蛋白PE545比文獻已報道的純度進一步得到提升;用機械剪切的方法對條斑紫菜的葉狀體進行破碎,用磷酸鹽緩沖液反復(fù)凍融4次,用硫酸銨沉淀得粗蛋白,接著與苯基瓊脂糖凝膠色譜層析聯(lián)用,并掛柱和洗脫,獲得較高純度R-PE,進一步離心,得高純度條斑紫菜R-PE.

2.3 多種方法聯(lián)用

運用多種純化方法聯(lián)用,往往能提高分離純化的效果. GARCLA等[37]用食品級木瓜蛋白酶對綠藻石莼(Ulva lactuca)蛋白質(zhì)酶解,得到的酶解產(chǎn)物,使用分子量截止過濾色譜與反相高效液相色譜純化富集,該實驗獲得的活性肽對血管緊張素轉(zhuǎn)化酶1(ACE-Ⅰ)有抑制作用.王竹君等[29]以堿性蛋白酶和木瓜蛋白酶對螺旋藻進行雙酶解提取后,超濾得到分子質(zhì)量大于10 000 u、5 000～10 000 u、3 000～5 000 u和小于3 000 u的4種組分,該實驗選取了小于3 000 u的進行凝膠色譜分離,共得到6個組分D1-D6,對肝癌、胃癌、結(jié)腸癌的5種腫瘤細(xì)胞Hep G-2、SGC-7901、A549、MCF-7、HT-29顯示出程度不一的抑制作用. 朱林清等[38]以聚球藻PCC7002 為原料,將藻粉溶于氯化鈉溶液中,并在80 MPa高壓下均質(zhì)7 min,得到較高濃度的藻藍蛋白,再經(jīng)殼聚糖絮凝和硫酸銨鹽析后,得到更高濃度的藻藍蛋白.王天石等[39]在鈍頂螺旋藻泥中加入氯化鈣溶液,反復(fù)凍融2～3次,離心后,進行透析、過羥基磷灰石層析柱,得到較高純度藻藍蛋白.馮學(xué)珍等[40]采取超濾、凝膠過濾柱層析和反相高效液相色譜對已蛋白酶解的裙帶菜產(chǎn)物進行純化,該多肽具備很高的抑制ACE活性,其IC50為(71.88±1.43) μmol/L.還有學(xué)者運用超濾、分子篩色譜、離子交換色譜和質(zhì)譜分析,從胃蛋白酶消化的條斑藻水解物中制備了一種新型的高純度抗菌肽[41].

3 多肽的鑒定

多肽的鑒定有質(zhì)譜分析(MS)、核磁共振(NMR)以及氨基酸序列分析(AASA)等手段,但多采用以MS為基礎(chǔ)的相關(guān)技術(shù).MS是指選擇具有一定質(zhì)量的離子,與分子之間相互碰撞,得到產(chǎn)物離子,再通過二次質(zhì)譜分析后,對其進一步整理得到結(jié)果[42],同時結(jié)合現(xiàn)代計算機技術(shù)即可靈敏快速的分析蛋白質(zhì)組學(xué).

西班牙學(xué)者Raquel Pérez-Míguez等[43]開發(fā)了一種多肽分離和結(jié)構(gòu)鑒定的方法,用于從3種可食用大型藻類Saccharinalatissima(褐藻)、Codiumspp(綠藻)和Mastocarpusstellatus(紅藻)分離和鑒定蛋白質(zhì)水解物中的肽.首先進行水溶性和堿性可溶性蛋白的提取,然后通過RP-HPLC-QTOF/MS和從頭進行分析測序工具來分離和鑒定不同的短鏈肽.在這3種大型藻類的水解蛋白提取物中鑒定出37種肽,再根據(jù)BIOPEP數(shù)據(jù)庫進行檢查后,在較長的肽中發(fā)現(xiàn)了一些具有潛在抗菌活性肽,豐富了海藻肽的研究內(nèi)容.李琦等[44]通過凝膠分離、Nano-LC-MS/MS等分離分析手段對海帶的多肽進行分析鑒定,得到的多肽短肽DPL、PDPL、GSPDPL進行固相合成,研究發(fā)現(xiàn)這些多肽均有潛在降血糖活性.鄧真真等[45]利用LC-MS/MS技術(shù)對用胰蛋白酶酶解的龍須菜多肽進行了鑒定,使用Q-Exactive質(zhì)譜儀和Thermo Scientific EASY-n LC 1000系統(tǒng)對分子質(zhì)量小于等于3 000 u組分中的多肽序列進行鑒定,將MS/MS質(zhì)譜數(shù)據(jù)與龍須菜轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)集進行比對,確定多肽序列.蔡苗苗[24]等為鑒定GLAP 的氨基酸組成和序列,采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)進行分析,并利用Mascot搜庫后比對匯總,對舌狀蜈蚣藻提取純化的抗氧化肽進行結(jié)構(gòu)鑒定. 褚寧寧等[46]用超濾法對鈍頂螺旋藻游離肽進行純化,利用NanoUPLC-MS/MS和數(shù)據(jù)庫進行分析,確定了結(jié)構(gòu),為螺旋藻的開發(fā)提供了參考.

4 海藻多肽抗腫瘤作用機制

生物活性肽(bioactive peptides,BP)由于其氨基酸的組成和排列順序不同而顯示出不同的生物活性[47].大量研究證明海藻來源的多肽具有抗腫瘤活性,其作用機制表現(xiàn)在多個方面[48,49].多肽類藥物很可能會成為治療腫瘤最安全、毒性最小的治療方法,因為與傳統(tǒng)的化療藥相比,多肽具有體積小、對組織具有良好的穿透性、毒性低以及對靶點特異性高的特點,所以其最大優(yōu)勢就是高效、低毒[50].

4.1 直接抑制腫瘤細(xì)胞增殖

針對某些腫瘤細(xì)胞,BP可以阻礙信號轉(zhuǎn)導(dǎo)或使細(xì)胞周期終止,對細(xì)胞的增殖產(chǎn)生影響[51-52].王竹君等[29]利用多種酶采用單一或組合酶解法對螺旋藻進行提取獲得多肽,分離純化得大小不一的多種組分,在體內(nèi)體外實驗中抗腫瘤肽D1對移植瘤細(xì)胞顯示出直接抑制腫瘤細(xì)胞增殖的活性,比分離出的其他組分作用都要強. Foster等[10]從念珠藻(Nostocsp.)中提取得Cryptophycins多肽,當(dāng)緊密結(jié)合微管蛋白后可阻斷多種腫瘤細(xì)胞的有絲分裂,特別是 Cryptophycins1和半合成的Cryptophycins8能抑制腫瘤細(xì)胞組裝成微管,影響增殖,對多種移植瘤抑制作用顯著.白德發(fā)等[53]從海藻乳狀絲節(jié)藻中分離得到新的有抗腫瘤活性的環(huán)五肽化合物Galaxamide 1,對人肝癌、乳腺癌、宮頸癌細(xì)胞均顯示出較好活性,對癌細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞毒性,既能促進細(xì)胞早凋又能抑制細(xì)胞增殖.韓晶晶等[54]研究發(fā)現(xiàn),C-藻藍蛋白(C- phycocyanin,C-PC)對HeLa細(xì)胞的增殖具有抑制作用,且抑制強度與濃度成正比,該作用與抑制TGF-β1有關(guān),為宮頸癌的治療提供新思路.

4.2 誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡

細(xì)胞凋亡是細(xì)胞的正常生命活動,誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡是治療腫瘤的一條重要思路.其中Bcl-2是1種重要的細(xì)胞凋亡調(diào)控蛋白,Bcl-2家族可分為抗凋亡蛋白和促凋亡蛋白2類[55].Mao等[56]發(fā)現(xiàn)1種能下調(diào)XIAP蛋白作用的蛋白Smac,這種蛋白也存在于海藻體內(nèi),可促進腫瘤細(xì)胞凋亡. Simmons等[57]在巨大鞘絲藻中找到了具有抗腫瘤效果的環(huán)狀和線狀的多肽,其能破壞細(xì)胞微絲網(wǎng)絡(luò),破壞腫瘤細(xì)胞骨架促使細(xì)胞凋亡,同時由于其選擇性強,主要針對HCT-116人結(jié)腸癌細(xì)胞系有效. Wrasidlo等[58]從海洋藍藻巨大鞘絲藻中提取的脂肽Somocystinamide A (Sc A),能通過活化caspascs-8及其下游因子抑制血管生成和腫瘤細(xì)胞增殖,觸發(fā)腫瘤細(xì)胞凋亡.

4.3 提高機體免疫功能

腫瘤的發(fā)生跟免疫系統(tǒng)密切相關(guān).在腫瘤患者體內(nèi),腫瘤細(xì)胞與免疫系統(tǒng)兩者相互制約,一方出現(xiàn)問題后兩者會相互作用造成惡性循環(huán)[59].因此,提高免疫力對治療腫瘤有積極意義.郝瑋等[60]用螺旋藻提取出藻藍蛋白,通過小鼠實驗發(fā)現(xiàn),小鼠的抑瘤率與藻藍蛋白的濃度和免疫功能成正比,說明藻藍蛋白能恢復(fù)和提高小鼠的免疫網(wǎng)絡(luò)功能,從而起到殺滅腫瘤細(xì)胞的作用.李冰等[61]將藻藍蛋白液經(jīng)局部皮下注射到荷瘤小鼠HeLa細(xì)胞當(dāng)中,同時給予氦氖激光照射,結(jié)果激光能使自然殺傷細(xì)胞的活性及淋巴T細(xì)胞的增殖活性同時增強,說明激光對腫瘤死亡信號的傳遞有促進作用,并使抗腫瘤免疫力得到提高,較單獨使用藻藍蛋白的效果明顯增強.齊宏濤等[62]用重組藻紅蛋白(R-PE)干預(yù)H22荷瘤小鼠,結(jié)果能增強抗氧化功能,調(diào)節(jié)炎性因子的水平,提高腸道occludin和ZO-1蛋白的表達,增強免疫能力,保護腸道屏障,與抗腫瘤作用密切相關(guān).韓敏敏等[63]用藻藍蛋白聯(lián)合光動力學(xué)療法,增強脾臟的免疫功能,體液免疫功能得到加強,可見這種抗腫瘤的方法與調(diào)節(jié)免疫功能有關(guān).

5 展望

目前,抗癌藥很大一部分來自天然產(chǎn)物.同時海洋占據(jù)了地球表面大部,而海藻又是海洋生物中的重要組成部分,海藻活性肽可被認(rèn)為是抗癌藥物的一個潛在的巨大資源.目前對海藻多肽的研究大多處于起步階段,同時由于海藻多肽的分離純化存在一定的困難,所以海藻多肽仍有很大的發(fā)展空間,需要進一步發(fā)掘海藻資源,尋找更多有應(yīng)用價值的海藻.由于海藻多肽對腫瘤細(xì)胞選擇性強,其提取物或者對提取物適當(dāng)?shù)母脑旌?有很大的可能性會發(fā)展成為腫瘤的預(yù)防和治療藥物.隨著現(xiàn)代技術(shù)和技術(shù)聯(lián)用的發(fā)展,將進一步豐富海藻多肽的提取純化的方法,提高提取純化效率,獲得高純度的海藻多肽.隨著科學(xué)家對海藻多肽抗腫瘤作用機制探索的深入,會為海藻多肽治療腫瘤提供更肯定的證據(jù),希望將來海藻多肽能得到更廣泛的應(yīng)用,為腫瘤的防治做出更大的貢獻.