鄧姣 陳寬冰

(中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院外科第二胸外科,遼寧 沈陽(yáng) 110020)

乳腺癌作為一類發(fā)病率較高的外科常見(jiàn)病，也是對(duì)女性患者而言較為常見(jiàn)的惡性腫瘤性疾病，盡管在近年來(lái)的研究中發(fā)現(xiàn)，隨著診斷及治療技術(shù)的不斷提升，乳腺癌早期救治率有所提升，生存期有所延長(zhǎng)，但其總體病死率仍然未觀察到明顯降低，嚴(yán)重危害著女性患者的生理健康。有研究報(bào)道指出，乳腺癌本身的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多因素共同作用，且多階段的過(guò)程，在疾病發(fā)生發(fā)展中多伴隨著不同的病理特征，但其具體發(fā)生發(fā)展機(jī)制仍無(wú)定論，仍然需要進(jìn)一步的分析及探討〔1〕。細(xì)胞增殖核抗原(Ki-67)作為一個(gè)用于判斷細(xì)胞增殖及凋亡的有效指標(biāo)，在乳腺癌治療及預(yù)后評(píng)估方面具有重要的意義〔2〕。人表皮生長(zhǎng)因子受體(Her)-2表達(dá)被認(rèn)為是一種能夠在細(xì)胞內(nèi)外執(zhí)行不同生理功能的指標(biāo)，在既往的研究報(bào)道中被證實(shí)與細(xì)胞的增殖、遷移及分化具有密切的關(guān)系，同時(shí)還可對(duì)細(xì)胞的凋亡進(jìn)行抑制，促進(jìn)增加腫瘤細(xì)胞的侵襲性〔3〕。而細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)誘導(dǎo)因子(CD147)作為一種糖基化程度較高的跨膜蛋白，在原發(fā)性乳腺癌及卵巢癌等組織中具有較高的表達(dá)水平，且在其病理表現(xiàn)中發(fā)揮了重要的作用。本研究則就癌組織中Ki-67、Her-2及CD147在老年女性乳腺癌患者中的表達(dá)水平及意義進(jìn)行分析，旨在為疾病的診斷及治療提供可參考價(jià)值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取自2019年7月至2021年4月在中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院接受乳腺癌手術(shù)切除術(shù)的105例患者的病理組織標(biāo)本作為乳腺癌組，將距離腫瘤邊緣>5 cm的乳腺組織作為癌旁正常組。該組患者年齡60～75歲，平均(68.47±4.14)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：患者均在醫(yī)院行臨床癥狀及體征、影像學(xué)及病理學(xué)檢查后確診；屬于乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌診斷標(biāo)準(zhǔn)；無(wú)患側(cè)乳腺手術(shù)史；尚未進(jìn)行放療、化療或者激素類藥物治療；具有完整的臨床資料。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并心腦肝腎等重要臟器功能障礙或者損傷；合并存在結(jié)締組織疾??；存在惡性腫瘤疾病史；因各種原因?qū)е碌闹型境鲈悍艞壷委熕鶎?dǎo)致的臨床資料缺失。

1.2試劑與儀器 Ki-67單克隆抗體、Her-2單克隆抗體及CD147單克隆抗體，上述抗體均購(gòu)買自北京中杉生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司。華速 HS-2205輪轉(zhuǎn)手動(dòng)切片機(jī)(山東博宇醫(yī)療器械有限公司)。徠卡DM750正置顯微鏡(上海躍河生物科技有限公司)。I-Solution形態(tài)學(xué)分析系統(tǒng)(加拿大IMT公司)等。

1.3實(shí)驗(yàn)方法 樣本均給予常規(guī)脫蠟至水、透明、包埋、切片，切片的厚度為4 μm，在石蠟切片之后給予常規(guī)二甲苯脫蠟處理，酒精梯度水化，抗原修復(fù)，冷卻等，隨后在3%H2O2，37℃的環(huán)境中孵育，5%的正常山羊血清37℃封閉處理，向其中加入50 μl一抗，放入至-4℃環(huán)境中保存過(guò)夜；第二日復(fù)溫，向其中加入二抗，即鏈霉素親和素-生物素復(fù)合物液，二氨基苯基碘顯色5 min；采用蘇木精對(duì)其實(shí)施染色處理后，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封片，再烤干〔4〕。標(biāo)本均在同一個(gè)條件下采用免疫組織化學(xué)(SABC)方法對(duì)其進(jìn)行染色處理，之后再設(shè)置陰性和陽(yáng)性對(duì)照。分別在乳腺癌組及癌旁正常組中隨機(jī)選取10個(gè)視野(×400倍)，陽(yáng)性表達(dá)的評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)：在經(jīng)過(guò)染色之后的胞質(zhì)及薄膜可以觀察到棕黃色或者黃褐色的沉淀物。

1.4判定指標(biāo) 按照美國(guó)臨床腫瘤學(xué)會(huì)/美國(guó)病理學(xué)家協(xié)會(huì)(ASCO/CAP)相關(guān)病理指南公式〔5〕，結(jié)合DAKO Hercept Test評(píng)分系統(tǒng)判斷如下：(-)無(wú)細(xì)胞染色或者<10%細(xì)胞膜呈現(xiàn)出了較弱染色；(+)表示10%細(xì)胞膜部分呈現(xiàn)出了較弱染色；()表示10%細(xì)胞膜呈現(xiàn)出完全較弱或者中等染色；()為10%的細(xì)胞膜呈現(xiàn)出了完全強(qiáng)染色。按照陽(yáng)性細(xì)胞占全部觀察細(xì)胞的半定量情況進(jìn)行分級(jí)，分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：以(-)、(+)、()作為陰性表達(dá)，()作為陽(yáng)性表達(dá)〔6〕。

1.5觀察指標(biāo) 采用免疫組織化學(xué)法測(cè)量并對(duì)比乳腺癌組與癌旁正常組標(biāo)本中Ki-67、Her-2及CD147的表達(dá)水平，并將上述指標(biāo)表達(dá)水平與臨床病理關(guān)系進(jìn)行分析；對(duì)Ki-67、Her-2及CD147的表達(dá)水平采用Spearman相關(guān)性分析，對(duì)全部患者實(shí)施為其1年的乳腺癌手術(shù)后隨訪，對(duì)隨訪后乳腺癌患者的生存情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，生存的患者為生存組，死亡的患者為死亡組，對(duì)比Ki-67、Her-2及CD147的表達(dá)水平在不同生存情況下表達(dá)的差異性。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS23.0軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)、t檢驗(yàn)、Spearman相關(guān)性分析。

2 結(jié) 果

2.1兩組組織標(biāo)本中Ki-67、Her-2及CD147蛋白光度值對(duì)比 乳腺癌組組織標(biāo)本中Ki-67、Her-2及CD147蛋白光度值顯著高于癌旁正常組(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 兩組組織標(biāo)本中Ki-67、Her-2及CD147蛋白光度值對(duì)比

2.2Ki-67、Her-2及CD147蛋白表達(dá)與臨床病理指標(biāo)的關(guān)系 Ki-67、Her-2及CD147蛋白表達(dá)分別在腫瘤>5 cm、病理類型為浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌、組織分型為中低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、有脈管侵襲的患者中具有更高的陽(yáng)性表達(dá)率，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 Ki-67、Her-2及CD147陽(yáng)性表達(dá)在不同腫瘤患側(cè)中未呈現(xiàn)出明顯的差異性(P>0.05)。見(jiàn)表2。

2.3生存組與死亡組組織標(biāo)本中Ki-67、Her-2及CD147的蛋白陽(yáng)性表達(dá)對(duì)比 死亡組組織標(biāo)本中Ki-67、Her-2及CD147蛋白陽(yáng)性表達(dá)水平顯著高于生存組(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表2 Ki-67、Her-2及CD147蛋白表達(dá)與臨床病理指標(biāo)的關(guān)系(n=105，n)

表3 生存組與死亡組組織標(biāo)本中Ki-67、Her-2及CD147陽(yáng)性表達(dá)對(duì)比〔n(%)〕

2.4Ki-67、Her-2及CD147的相關(guān)性 Ki-67與Her-2、CD147呈正相關(guān)(r=0.614，0.711；均P<0.05)；Her-2與CD147呈正相關(guān)(r=0.641，P<0.05)。

3 討 論

盡管對(duì)乳腺癌患者實(shí)施積極有效的手術(shù)、放化療及靶向給藥等方法治療可在一定程度上抑制乳腺癌的進(jìn)展，但絕大多數(shù)患者的整體預(yù)后仍然較差，治療后仍然存在著一定的復(fù)發(fā)率及轉(zhuǎn)移率，同時(shí)也是導(dǎo)致患者死亡率增高的重要原因〔7〕。

Ki-67作為一種由10號(hào)染色體長(zhǎng)臂所屬基因轉(zhuǎn)錄翻譯而成，在一般正常情況下可表現(xiàn)在除去G0期及G1早期以外的各個(gè)細(xì)胞分裂階段，多用于反映細(xì)胞當(dāng)前的增殖狀態(tài)〔8〕。有研究資料顯示，Ki-67多與腫瘤細(xì)胞的增殖及轉(zhuǎn)移具有密切的相關(guān)性，同時(shí)也與患者的預(yù)后相關(guān)，由此認(rèn)為，通過(guò)對(duì)Ki-67進(jìn)行檢測(cè)可用于檢測(cè)當(dāng)前腫瘤進(jìn)展?fàn)顟B(tài)。Her-2作為一種位于17號(hào)染色體q21區(qū)上的人類表皮生長(zhǎng)因子受體家族成員，在一般情況下，Her-2的表達(dá)水平較低，且處于一個(gè)非激活的狀態(tài)下，而一旦需要Her-2蛋白中的酪氨酸在發(fā)生磷酸化后，則會(huì)通過(guò)介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)的磷酸化、DNA合成代謝等一系列功能，而由此表現(xiàn)出較高的表達(dá)水平，此時(shí)也會(huì)導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞快速增殖，導(dǎo)致癌癥的發(fā)生及發(fā)展〔9，10〕。CD147被認(rèn)為是一種屬于IgSE類的細(xì)胞黏附分子(CAM)，在細(xì)胞內(nèi)可對(duì)基質(zhì)細(xì)胞的MMPs生產(chǎn)產(chǎn)生一定的刺激作用，并對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的降解與重建可產(chǎn)生刺激效果，加快癌細(xì)胞的進(jìn)一步侵襲與轉(zhuǎn)移〔11〕。另外，有研究報(bào)道指出，CD147也屬于一種與炎癥反應(yīng)、腫瘤進(jìn)展等諸多病理過(guò)程相關(guān)的多功能分析，可從多個(gè)方面影響乳腺癌的發(fā)生〔12，13〕。

本研究就癌組織中Ki-67、Her-2及CD147在老年女性乳腺癌患者的表達(dá)水平及意義進(jìn)行分析，結(jié)果與既往研究〔14，15〕報(bào)道基本一致。在觀察預(yù)后表現(xiàn)上證實(shí)了Ki-67、Her-2及CD147蛋白陽(yáng)性可對(duì)乳腺癌患者的預(yù)后帶來(lái)諸多不利影響，在臨床工作中可將三者作為分析并判斷老年乳腺癌患者腫瘤浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移及預(yù)后的重要指標(biāo)〔16，17〕。 而Ki-67、Her-2及CD147之間是否會(huì)互相促進(jìn)機(jī)制尚無(wú)定論，在接下來(lái)的研究中仍然需要深入分析〔18〕。

綜上，Ki-67、Her-2及CD147在乳腺癌組織中多呈現(xiàn)出表達(dá)異常的情況，三者之間互相呈現(xiàn)出了明顯的正相關(guān)性，且上述指標(biāo)與乳腺癌病理特征、生存預(yù)后具有一定的關(guān)系。在接下來(lái)的研究中可深入對(duì)Ki-67、Her-2及CD147與乳腺癌發(fā)生發(fā)展之間的關(guān)系進(jìn)行分析，為后續(xù)乳腺癌的治療及預(yù)后判斷提供可靠可參考依據(jù)。