梁正維，王曉漫，劉小蘇，張雙艷，馬燕，陳軍文，張廣輝，姜薇薇，趙銀河*，趙明*

1(云南農(nóng)業(yè)大學(xué) 農(nóng)學(xué)與生物技術(shù)學(xué)院 龍潤(rùn)普洱茶學(xué)院，云南 昆明，650201)2(西南中藥材種質(zhì)創(chuàng)新與利用國(guó)家地方聯(lián)合 工程研究中心 云南省藥用植物生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南 昆明，650201)

三七[Panaxnotoginseng(Burk.) F.H.Chen]是有超過400年藥用歷史的五加科人參植物，享有“南國(guó)神草”、“金不換”等美譽(yù)。三七的干燥塊根的藥用成分以四環(huán)三萜類皂苷為主，總皂苷含量為11.24%，具有抗炎、抗動(dòng)脈粥樣硬化、止血、抗腫瘤、提高免疫力及改善心腦血管等藥理作用[1-2]，此外，習(xí)峰敏等[3]研究表明三七地上莖葉部分總皂苷含量為12.98%，比塊根高出1.74個(gè)百分點(diǎn)，同樣具有較大產(chǎn)量和利用價(jià)值。CAI等[4]報(bào)道，截止2017年，三七莖葉的年產(chǎn)量超過2 000 kg，但有效利用率不足5%，大部分依舊被拋棄在田間地頭，造成資源的極大浪費(fèi)。百合科黃精屬植物滇黃精(PolygonatumkingianumColl.et Hemsl)的干燥塊根是中國(guó)傳統(tǒng)中藥材，也是重要的藥食同源物品之一，以滇黃精為原料開發(fā)出的食品主要有滇黃精飲片、滇黃精面條、滇黃精糕點(diǎn)、滇黃精日用品[5]等，但精深加工及綜合開發(fā)利用的工藝技術(shù)還需要進(jìn)一步挖掘。

韓凌[6]研究表明，人參皂苷Rb1、Rb3等原二醇型人參皂苷[20(S)-protopanaxadiol type, PPD]是三七莖葉中主要活性成分，還含有類黃酮、三七素、揮發(fā)油及γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid, GABA)等成分，具有活血化瘀，舒緩神經(jīng)等多種功效。目前已開發(fā)出“七葉神安滴丸”等藥品，隨著云南食品安全地方標(biāo)準(zhǔn)DBS 53024—2017 干制三七莖葉的發(fā)布，已開發(fā)了“三七莖葉茶”、“三七莖葉顆粒飲片”相關(guān)食品。滇黃精主要成分為甾體皂苷、三萜皂苷、異黃酮、多糖、苯丙素類、生物堿及揮發(fā)油等多種活性成分，具有降血糖、抗炎等功能[7-8]。研究表明，經(jīng)九蒸九曬炮制后的滇黃精多糖含量下降分解為單糖、二糖或寡糖，皂苷含量增加，揮發(fā)性成分的組成和含量降低，藥性變得平和，麻味消失，提升了其抗氧化、抗疲勞、抗菌、提高免疫的能力[9]。

三七莖葉提取液可通過噴霧干燥順利制取速溶粉，但由于其中的皂苷等成分具有一定的苦味，在農(nóng)產(chǎn)品及食品開發(fā)領(lǐng)域還存在一定的局限性，而經(jīng)九蒸九曬炮制后的滇黃精甜味得以提升，口感柔和，性味溫和，但由于糖類的存在，以噴霧干燥法制取滇黃精速溶粉較為困難。

為提升三七莖葉的食用口感，同時(shí)改善滇黃精的噴霧干燥性能，開發(fā)出質(zhì)地均勻、溶解性好、組成成分豐富的復(fù)合提取物速溶粉，本實(shí)驗(yàn)以三七莖葉-九蒸九曬滇黃精片為原料，以單因素-響應(yīng)面模型優(yōu)化其浸提工藝，將所得提取液噴霧干燥制取三七莖葉-滇黃精速溶粉，HPLC進(jìn)一步檢測(cè)速溶粉中皂苷、可溶性總糖、多酚的組成及含量，同時(shí)以對(duì)ABTS陽(yáng)離子自由基、DPPH自由基、超氧陰離子自由基、羥自由基的清除能力考察該速溶粉的抗氧化活性，為三七莖葉及滇黃精的開發(fā)利用提供基礎(chǔ)方案。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

三七莖葉，西南中藥材種質(zhì)創(chuàng)新與利用國(guó)家地方聯(lián)合工程研究中心提供，并鑒定為五加科植物三七[Panaxnotoginseng(Burk.) F.H.Chen]的干燥莖葉部分；九蒸九制滇黃精片，西南中藥材種質(zhì)創(chuàng)新與利用國(guó)家地方聯(lián)合工程研究中心提供，并鑒定為百合科植物滇黃精[PolygonatumkingianumColl.et Hemsl]經(jīng)過九蒸九曬后的干燥塊根切片。

色譜甲醇、乙腈、甲酸，MREDA公司；98%濃硫酸(分析純)、蒽酮(分析純)、甲醇(分析純)、99.7%(體積分?jǐn)?shù))食用乙醇、超純水(電阻率18.25 MΩ·cm)、正丁醇(分析純)、石油醚(分析純)、氯仿(分析純)，西隴化工股份有限公司；人參皂苷Rb3、Rb1、Ra3、三七皂苷Fa、Fc、Fe、Fd、沒食子酸(gallic acid, GA)、咖啡酸(caffeic acid, CA)、表沒食子兒茶素沒食子酸酯(epigallocahechin-3-gallate, EGCG)、表兒茶素沒食子酸酯(epicatechin-3-gallate, ECG)、茶堿(theophylline)等標(biāo)準(zhǔn)品，成都曼斯特生物技術(shù)有限公司；D101(0.3～1.25 mm)大孔樹脂，北京索萊寶科技有限公司；MCI GEL CHP 20P(75～150 μm)小孔樹脂，日本三菱公司；ABTS陽(yáng)離子自由基清除能力試劑盒、DPPH自由基清除能力試劑盒、超氧陰離子自由基清除能力試劑盒、羥自由基清除能力試劑盒，蘇州格瑞思生物科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

DHG-9070 A型臺(tái)式鼓風(fēng)干燥箱，上海東麓儀器設(shè)備有限公司；JMF-320 G多級(jí)閃蒸器，河南智晶生物科技股份有限公司；YM-3000 Y型噴霧干燥機(jī)，上海豫明儀器有限公司；K6600-A全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀，北京凱奧科技發(fā)展有限公司；Agilent LC-1290 indentify Ⅱ 超高效液相色譜系統(tǒng)、Agilent LC-1200 高效液相色譜系統(tǒng)、色譜柱Agilent poroshell EC-C18(4.6 mm×150 mm, 4 μm)、色譜柱Agilent Poroshell 120(4.6 mm×100 mm, 2.7 μm)，美國(guó)安捷倫公司；島津M0C63U快速水分測(cè)定儀，日本島津公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 噴霧干燥優(yōu)化實(shí)驗(yàn)

三七莖葉-滇黃精配比：先前實(shí)驗(yàn)表明，滇黃精提取液富含多糖，噴霧干燥熱融化現(xiàn)象導(dǎo)致無(wú)法順利獲取速溶粉，本實(shí)驗(yàn)以三七莖葉代替糊精以改善噴霧干燥效率，分別設(shè)置三七莖葉-滇黃精的質(zhì)量比為8∶2、7∶3、6∶4、5∶5、4∶6、3∶7、2∶8共6個(gè)梯度，每個(gè)梯度物料質(zhì)量合計(jì)100 g，重復(fù)3次，以50%(體積分?jǐn)?shù))乙醇為浸提溶劑，料液比(g∶mL)為1∶20，浸提2次，合并過濾液，減壓濃縮至原體積1/3，于YM-3000 Y型噴霧干燥機(jī)制取速溶粉，以得粉率考察三七莖葉-滇黃精的最佳配比。

1.3.2 浸提工藝優(yōu)化實(shí)驗(yàn)

單因素實(shí)驗(yàn)：根據(jù)上述優(yōu)化的配比結(jié)果制備三七莖葉-滇黃精混合物2 000 g，粉碎后過200目標(biāo)準(zhǔn)篩，備用。準(zhǔn)確稱取三七莖葉-滇黃精混合粉末1.00 g，分別以乙醇體積分?jǐn)?shù)、料液比(g∶mL)和浸提時(shí)間為考察因素，確定不同單因素條件下的最佳浸提率。

乙醇體積分?jǐn)?shù)：分別設(shè)置5個(gè)梯度的乙醇體積分?jǐn)?shù)20%、30%、40%、50%、60%，以料液比(g∶mL)1∶10，浸提48 h，重復(fù)2次，以浸出率考察最佳乙醇體積分?jǐn)?shù)。

料液比：依據(jù)上述結(jié)果，分別設(shè)置料液比(g∶mL)1∶5、1∶10、1∶15、1∶20、1∶25，以50%體積分?jǐn)?shù)的乙醇，浸提48 h，重復(fù)浸提2次，以浸出率考察最佳料液比。

浸提時(shí)間：分別設(shè)置浸提時(shí)間24、36、48、60、72 h，以料液比1∶20，50%(體積分?jǐn)?shù))乙醇浸提2次，以浸出率考察最佳浸提時(shí)間。

響應(yīng)面優(yōu)化實(shí)驗(yàn)：根據(jù)上述單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果，以浸出率為指標(biāo)：以乙醇體積分?jǐn)?shù)(A)、料液比(B)、浸提時(shí)間(C)為變量，根據(jù)WANG等[10]報(bào)道的響應(yīng)面原理設(shè)計(jì)Box-Behnken中心組合試驗(yàn)數(shù)學(xué)模型優(yōu)化三七莖葉-滇黃精的最佳浸提工藝浸出率的計(jì)算如公式(1)所示：

(1)

式中：M0，三七莖葉-滇黃精的質(zhì)量，g；M1，發(fā)皿的質(zhì)量，g；M2，干燥后蒸發(fā)皿及三七莖葉-滇黃精浸膏的總質(zhì)量，g；C，三七莖葉-滇黃精的含水率，%。

1.3.3 感官審評(píng)

參照WEN等[11]報(bào)道的有關(guān)速溶茶的審評(píng)方法，設(shè)置感官審評(píng)表，邀請(qǐng)10位具有評(píng)茶員資質(zhì)的專家對(duì)三七莖葉-滇黃精速溶粉進(jìn)行感官審評(píng)，以百分制計(jì)總分。

1.3.4 成分分析及抗氧化活性分析

皂苷標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：以70%(體積分?jǐn)?shù))甲醇為溶劑，分別配制成1 mg/mL的人參皂苷Rb3、Rb1、Ra3、三七皂苷Fa、Fc、Fe、Fd單體標(biāo)準(zhǔn)品及0.1 mg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

速溶粉樣品制備：參照GUO等[12]報(bào)道的三七莖葉皂苷的純化方法，準(zhǔn)確稱取三七莖葉-滇黃精速溶粉1.00 g，加入70%甲醇溶液50 mL，振蕩10 min，轉(zhuǎn)入D101大孔樹脂及MCI小孔樹脂反復(fù)層析至淡黃色溶液，離心取上清液，定容至50 mL，0.45 μm微孔濾膜過濾，4 ℃保存待測(cè)。

色譜條件：Agilent LC-1290 indentify Ⅱ 超高效液相色譜系統(tǒng)，色譜柱：Agilent poroshell EC-C18(4.6 mm×150 mm, 4 μm)。分析條件：流動(dòng)相由H2O(A)和乙腈(B)組成，洗脫梯度為0～20 min，24%～25%B；20～45 min，25%～45%B；45～55 min，45%～50%B；55～60 min，50%～55%B；60～65 min，55%～60%B；65～75 min，60%B；75～75.5 min，60%～80%B；75.5～78 min，80%B。流速0.5 mL/min；進(jìn)樣體積10 μL；柱溫30 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)203 nm。由保留時(shí)間確定化合物，使用外標(biāo)法根據(jù)峰面積定量。

可溶性總糖待測(cè)液：配制0.1 mg/mL的三七莖葉-滇黃精速溶粉溶液，參照KANG等[13]報(bào)道的0.2%蒽酮-硫酸法測(cè)定人參中可溶性總糖，于全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀624 nm下檢測(cè)吸光度值，并通過回歸方程曲線計(jì)算可溶性總糖的含量。

多酚檢測(cè)：參照NIAN等[14]報(bào)道的兒茶素高效液相色譜分析法，制備2 mg/mL的三七莖葉-滇黃精速溶粉待測(cè)液，于Agilent LC-1200 高效液相色譜系統(tǒng)280 nm下檢測(cè)分析多酚組成及含量。

抗氧化活性分析：根據(jù)XIA等[15]報(bào)道的黃精抗氧化活性測(cè)定方法，測(cè)定三七莖葉-滇黃精速溶粉的抗氧化活性，且以IC50值考察其抗氧化能力。

1.3.5 數(shù)據(jù)分析

2 結(jié)果與分析

2.1 三七莖葉-滇黃精配比優(yōu)化

根據(jù)三七莖葉-滇黃精質(zhì)量比為8∶2、7∶3、6∶4、5∶5、4∶6、3∶7、2∶8 六個(gè)不同條件下的噴霧干燥實(shí)驗(yàn)，所得速溶粉百分比可知(圖1)，當(dāng)三七莖葉與滇黃精的質(zhì)量比為6∶4、含水率為10.42%時(shí)顯著高于質(zhì)量比5∶5、4∶6、3∶7、2∶8條件下的得粉率(P<0.05)，與質(zhì)量比為8∶2、7∶3的得粉率無(wú)顯著性差異(P>0.05)，通過初步的感官審評(píng)，質(zhì)量比為6∶4所得速溶粉在口感、甜味及香味優(yōu)于其他組分，因此，本實(shí)驗(yàn)擬以三七莖葉-滇黃精質(zhì)量比為6∶4展開浸提工藝優(yōu)化實(shí)驗(yàn)。

圖1 不同質(zhì)量比條件下三七莖葉-滇黃精浸提液噴霧 干燥得粉率Fig.1 Rate of stems and leaves of Panax notoginseng- Polygonatum kingianum extract by spray drying at different mass ratios 注：不同小寫字母表示存在統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著性差異(下同)

2.2 單因素優(yōu)化實(shí)驗(yàn)

設(shè)置乙醇體積分?jǐn)?shù)為20%、30%、40%、50%、60%，料液比(g∶mL)為1∶10，浸提48 h，浸提2次。如圖2所示，在乙醇體積分?jǐn)?shù)為30%積分?jǐn)?shù)時(shí)，浸提率達(dá)到(49.83±0.02)%，顯著高于體積分?jǐn)?shù)20%時(shí)47.56%的浸出率(P<0.05)，隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)增加至40%、50%、60%，浸出率呈下降趨勢(shì)且與體積分?jǐn)?shù)為30%時(shí)的浸出率存在顯著性差異(P<0.05)，表明在此濃度下，三七莖葉-滇黃精的浸提率達(dá)到較理想的浸出率。

根據(jù)乙醇單因素試驗(yàn)結(jié)果，以30%(體積分?jǐn)?shù))乙醇為溶劑，設(shè)置料液比(g∶mL)為1∶5、1∶10、1∶15、1∶20、1∶25共5個(gè)梯度，浸提三七莖葉-滇黃精48 h，浸提2次。如圖3所示，浸出率隨著料液比增加而呈上升趨勢(shì)，當(dāng)料液比為1∶20時(shí)，均與料液比1∶15、1∶10、1∶5的浸出率存在顯著性差異(P<0.05)，但與1∶25時(shí)的浸出率差異不顯著 (P>0.05)，說(shuō)明在料液比為1∶20時(shí)，可溶性成分已被大部分浸出，因此，最佳料液比將確定為1∶20。

圖2 不同體積分?jǐn)?shù)的乙醇中三七莖葉-滇黃精浸出率Fig.2 Leaching rate of stems and leaves of Panax notoginseng- Polygonatum kingianum with different ethanol volume fraction

圖3 不同料液比三七莖葉-滇黃精浸出率Fig.3 Leaching rate of stem and leaves of Panax notoginseng- Polygonatum kingianum with different solid-liquid ratio

根據(jù)上述單因素結(jié)果，以30%(體積分?jǐn)?shù))乙醇、料液比(g∶mL) 1∶20，分別設(shè)置24、36、48、60、72 h浸提三七莖葉-滇黃精，浸提2次。如圖4 所示，浸提36 h時(shí)浸出率達(dá)到(49.5±0.01)%，顯著高于其他時(shí)間條件下的浸出率，因此，以浸提36 h為最佳結(jié)果。

圖4 不同浸提時(shí)間三七莖葉 - 滇黃精浸出率Fig.4 Leaching rate of stems and leaves of Panax notoginseng-Polygonatum kingianum in different times

2.3 響應(yīng)面優(yōu)化實(shí)驗(yàn)

為進(jìn)一步確定三七莖葉-滇黃精的最佳浸提工藝，參照WANG等[10]報(bào)道的Box-Behnken中心組合設(shè)計(jì)模型，以乙醇體積分?jǐn)?shù)(A，20%、30%、40%)，料液比(B，1∶15、1∶20、1∶25)和浸提時(shí)間(C，24、36、48 h)的交互作用對(duì)三七莖葉-滇黃精浸出率進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)，結(jié)果如表1所示。

表1 三七莖葉-滇黃精響應(yīng)面優(yōu)化結(jié)果Table 1 Response surface optimization results of stems and leaves of Panax notoginseng-Polygonatum kingianum

分析對(duì)各因素對(duì)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，經(jīng)回歸擬合得到相應(yīng)的二次回歸方程模型：浸出率(%)=52.2-0.383 8A+0.418 7B+0.245C-0.025AB+0.007 5AC+0.267 5BC-2.28A2-1.27B2-1.76C2，為進(jìn)一步確證三七莖葉-滇黃精提取工藝最佳響應(yīng)值，對(duì)回歸方程取一階偏導(dǎo)為0，求解方程得A=29.16%，B=20.87，C=37.00，理論浸出率52.27%，即理論優(yōu)化條件為29.16%(體積分?jǐn)?shù))乙醇，料液比(g∶mL)為1∶20.87，浸提37.00 h，重復(fù)浸提2次。

表2 回歸模型方差分析表Table 2 Variance analysis of regression model

根據(jù)響應(yīng)3D 曲面分析各因素交互作用對(duì)三七莖葉-滇黃精浸出率的影響，圖5-C的坡度最為陡峭，斜率最大，因而料液比(B)和浸提時(shí)間(C)對(duì)三七莖葉-滇黃精的浸出率有極顯著影響，這與方差分析結(jié)果相吻合(P<0.01)；由圖5-A可知，乙醇體積分?jǐn)?shù)(A)和料液比(B)對(duì)三七莖葉-滇黃精浸出率也具有顯著性影響(P<0.05)，因此，料液比也決定著浸出率的高低?？傊?，在常溫條件下，適宜的乙醇體積分?jǐn)?shù)、料液比及浸提時(shí)間均影響三七莖葉-滇黃精的浸出率，本響應(yīng)面模型能較大限度地提取其中的內(nèi)含物成分。

為了驗(yàn)證本模型的可靠性和準(zhǔn)確性，稱取1.00 g三七莖葉-滇黃精樣品，根據(jù)實(shí)際操作的可行性，將上述條件優(yōu)化為29%(體積分?jǐn)?shù))乙醇，料液比(g∶mL)1∶21，浸提37 h，重復(fù)浸提2次，測(cè)得實(shí)際浸出率為(46.34±0.01)%，與理論浸出率52.27%存在微小波動(dòng)，但是差異不大，具有一定的可用性。

為進(jìn)一步將該工藝技術(shù)推廣應(yīng)用，在本實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上放大1 000倍進(jìn)行，即準(zhǔn)確稱取制備好的三七莖葉-滇黃精1 kg(質(zhì)量比為6∶4)作為物料(圖6-A)，以上述方法得到三七莖葉-滇黃精提取液，經(jīng)90 ℃減壓濃縮至原體積的1/3，在溫度120 ℃、風(fēng)速75%、進(jìn)料速度8 mL/min條件下噴霧干燥，得到黃色至棕黃色的三七莖葉-滇黃精速溶粉(圖6-B)。每1 kg物料可得到(374.23±6.81) g速溶粉，得粉率37.42%，較上述優(yōu)化結(jié)果偏低，根據(jù)SOBULSKA等[16]報(bào)道的有關(guān)富糖原料噴霧干燥原理，一方面可能是噴霧干燥過程中一部分粉末隨著氣流排出，另一方面可能是速溶粉掛在干燥缸壁、管道壁等部位，造成了一定的損失。

圖5 三七莖葉-滇黃精響應(yīng)面優(yōu)化等高線及3D曲面Fig.5 Response surface optimization contour and 3D surface of stems and leaves of Panax notoginseng- Polygonatum kingianum

2.4 感官審評(píng)

根據(jù)WEN等[11]報(bào)道的方法對(duì)三七莖葉-滇黃精速溶粉進(jìn)行感官審評(píng)，棕黃色酥松粉末，質(zhì)地均勻，冷熱水溶解性好，滋味微苦帶甜，入口滋味微苦回甘，香味濃郁飽滿，具有三七的特殊微苦味和九曬滇黃精的焦糖甜味，感官評(píng)分80.24分(圖6-C)。由于滇黃精富含可溶性糖、多糖等成分，該提取物久置有吸潮現(xiàn)象，因此需要注意干燥保存。

A-三七莖葉-滇黃精；B-三七莖葉-滇黃精速溶粉； C-三七莖葉-滇黃精速溶飲料圖6 三七莖葉-滇黃精及其速溶粉Fig.6 Stems and leaves of Panax notoginseng- Polygonatum kingianum and its instant powder

2.5 成分檢測(cè)及抗氧化活性分析

由圖7-A可知，從三七莖葉-滇黃精速溶粉中定量分析出7種皂苷化合物，含量較高的分別是三七皂苷Fa、Fd、Fc等四環(huán)三萜類皂苷，累計(jì)含量為(13.73±0.04) mg/g。

通過全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀檢測(cè)經(jīng)0.2%硫酸-蒽酮法處理后的三七莖葉-滇黃精速溶粉待測(cè)液，回歸方程為Y=3.009 5X+0.231 6,R2=0.980 6，通過吸光度計(jì)算出可溶性總糖含量為(55.44±3.21) mg/g。HPLC檢測(cè)分析到5種酚類化合物，含量最高的是CA[(3.6±0.44) mg/g]，ECG[(2.94±0.59) mg/g]及EGCG[(1.67±0.15) mg/g](圖7-B)。

通過抗氧化能力實(shí)驗(yàn)及其IC50值計(jì)算結(jié)果，發(fā)現(xiàn)三七莖葉-滇黃精速溶粉對(duì)自由基的清除能力隨著濃度上升而增加，對(duì)ABTS陽(yáng)離子自由基、超氧陰離子自由基及DPPH自由基均具有較強(qiáng)的清除能力，其中對(duì)ABTS陽(yáng)離子自由基的清除能力最佳，其IC50值為0.41 mg/mL，與陽(yáng)性對(duì)照Trolox的0.23 mg/mL較為接近(圖7-C)。

A-速溶粉中6種單體皂苷的含量；B-速溶粉中5種多酚單體含量；C-速溶粉抗氧化活性檢測(cè)，Trolox為陽(yáng)性對(duì)照?qǐng)D7 三七莖葉-滇黃精速溶粉成分及抗氧化活性分析Fig.7 Analysis of component and antioxidant activity in stems and leaves of Panax notoginseng-Polygonatum kingianum instant powder

3 討論

3.1 工藝優(yōu)化

三七莖葉作為云南地方特色食品，深受廣大消費(fèi)者的追捧，但其多功能的精深加工產(chǎn)品開發(fā)還不足。滇黃精作為藥食同源產(chǎn)品，富含多糖、薯蕷皂苷、甾體皂苷等活性成分，具有降血糖、改善身體機(jī)能等多重功效[17-18]，目前已有一些的開發(fā)利用案例，如滇黃精茶、滇黃精超微粉等。本實(shí)驗(yàn)以三七莖葉-滇黃精 (質(zhì)量比6∶4)為原料，通過單因素-響應(yīng)面模型優(yōu)化出乙醇體積分?jǐn)?shù)(%)、料液比(g∶mL)及浸提時(shí)間(h)對(duì)物料浸出率的工藝，進(jìn)一步在80～90 ℃條件下經(jīng)減壓所得濃縮提取液，可較好地實(shí)現(xiàn)噴霧干燥，得到質(zhì)地均勻、口味獨(dú)特、易于存儲(chǔ)的提取物，即三七莖葉-滇黃精速溶粉，但得粉率較理論值偏低，今后需要對(duì)噴霧干燥工藝進(jìn)一步優(yōu)化調(diào)整。

3.2 成分分析

三七莖葉-滇黃精速溶粉中定量分析出三七皂苷Fa等7種皂苷，TOHDA等[19]報(bào)道，F(xiàn)a對(duì)退化后的腦功能可能具有一定的激活和恢復(fù)潛能，但對(duì)其功能的研究報(bào)道還較少，在今后的研究中需要進(jìn)一步探索其功能和作用機(jī)制。據(jù)WANG等[20]研究表明，三七皂苷Fd通過抑制Akt/p38MAPK/NF-κB信號(hào)通路，改善反應(yīng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞增生導(dǎo)致的神經(jīng)炎癥性疾病。LIU等[21]揭示了三七皂苷Fc通過PPAR-γ途經(jīng)對(duì)糖尿病引起的心血管損傷具有一定改善作用；LAI等[22]報(bào)道，人參皂苷Rb1通過抑制脂肪變性等途經(jīng)減輕酒精性肝損傷。LI等[8]研究表明，滇黃精多糖通過增加小鼠胰島素受體底物-1 (insulin receptor substrate, IRS-1)、磷脂酰肌醇3激酶 (phosphatidylin-ositol-3-kinase, PI3K)和蛋白激酶B(Akt)的表達(dá)，改善糖尿病癥狀和脂質(zhì)代謝，具有降血壓、提高機(jī)體免疫力、恢復(fù)身體機(jī)能的功效。本實(shí)驗(yàn)未對(duì)這些標(biāo)志成分進(jìn)行相應(yīng)分析，這在今后的實(shí)驗(yàn)中需要進(jìn)一步完善。

3.3 抗氧化活性分析

利用自由基試劑盒測(cè)定三七莖葉-滇黃精速溶粉的抗氧化能力，對(duì)ABTS陽(yáng)離子自由基和超氧陰離子自由基的清除能力優(yōu)于對(duì)羥自由基自由基的清除能力。朱玉昌等[23]報(bào)道，ABTS陽(yáng)離子自由基與抗氧化劑的生物活性相關(guān)性強(qiáng)，表明三七莖葉-滇黃精速溶粉具有較好的生物活性。JIE等[24]表明，超氧陰離子自由基是機(jī)體內(nèi)壽命最長(zhǎng)的自由基，與許多炎癥性疾病密切相關(guān)，而三七莖葉-滇黃精速溶粉對(duì)其具有較好的清除能力，表明其抗氧化效果是較為理想的。

4 結(jié)論

以三七莖葉-滇黃精(質(zhì)量比6∶4)為原料進(jìn)行開發(fā)工藝研究，最佳浸提工藝為：29%(體積分?jǐn)?shù))乙醇，料液比(g∶mL) 1∶21，浸提37 h，重復(fù)浸提2次，每1 kg物料所得提取液經(jīng)噴霧干燥可得三七莖葉-滇黃精速溶粉374.23 g，得粉率37.42%。速溶粉中富含皂苷、多酚、可溶性糖等活性成分，其中三七皂苷Fa、Fd、Fc、Rb3，CA、ECG、EGCG等含量較為豐富，通過抗氧化實(shí)驗(yàn)反映了本實(shí)驗(yàn)所得速溶粉具有較好的抗氧化能力。本研究三七莖葉-滇黃精浸提工藝為食品開發(fā)提供了基礎(chǔ)模型支持，所得速溶粉活性成分豐富，具有較好的食用保健價(jià)值，為三七及滇黃精的產(chǎn)業(yè)發(fā)展提供了科學(xué)依據(jù)。