李明娜，李 想，孫玉鴻

(1.佳木斯大學，黑龍江 佳木斯 154007；2.雙鴨山市人民醫(yī)院，黑龍江 雙鴨山 155100)

宮頸癌(cervical cancer，CC)是全球女性第4大最常見的癌癥，也是女性癌癥死亡的第4大原因[1]。近年來，有研究報道許多疾病都存在漸進性細胞增殖異常及細胞周期調(diào)控系統(tǒng)的破壞[2]。增殖細胞核抗原(PCNA)是目前較為公認的可作為評價細胞增殖狀態(tài)的客觀指標。細胞周期蛋白依賴性激酶2(CDK2)調(diào)節(jié)細胞周期中的多個重要事件。目前對于CDK2和PCNA與宮頸上皮內(nèi)病變進展為宮頸癌之間聯(lián)系的研究較少。本研究擬探討CDK2和PCNA在不同程度宮頸上皮內(nèi)病變中的表達及相關(guān)性，以評價二者作為預(yù)測宮頸病變進展的可能性。

1 資料與方法

1．1 一般資料

收集2021-07～2022-06于我院進行病理確診的不同程度宮頸病變患者石蠟切片共116例，其中同期在本院行子宮肌瘤手術(shù)患者的宮頸組織20例,作為正常宮頸組。將病變組按照不同病變程度，分為低級別宮頸上皮內(nèi)病變組(LSIL)32例、高級別宮頸上皮內(nèi)病變組(HSIL)34例和宮頸鱗癌組(SCC)30例。所有組織均經(jīng)兩位高年資病理醫(yī)師確定符合本研究要求，術(shù)前均未進行放化療等抗腫瘤治療。

1.2 方法

CDK2、PCNA的檢測:采用免疫組化法檢測CDK2、PCNA的表達。所用兔抗人CDK2單克隆抗體、兔抗人PCNA單克隆抗體、二抗、DAB顯色試劑盒均購自上海碧云天生物技術(shù)有限公司。常規(guī)進行脫蠟、水化組織切片，按照說明書條件進行抗原修復(fù)。陽性對照采用已知陽性的乳腺癌切片，陰性對照用PBS代替一抗。

1.3 結(jié)果判讀標準

免疫組化檢測CDK2以細胞質(zhì)呈棕黃色為陽性，PCNA以細胞核呈棕黃色為陽性。每張切片隨機觀察5 個高倍視野(×400)，每個視野計數(shù)100個細胞，結(jié)果采用半定量積分法：將陽性細胞所占的百分比分值和染色強度分值相乘為結(jié)果：0～2分為陰性，3 分及以上為陽性。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS26.0軟件進行分析，各組間的比較采用χ2檢驗，相關(guān)性分析采用Speraman檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 CDK2在不同程度病變中的表達

CDK2在各組中表達差異顯著(χ2=31.041，P<0.01)，表達率由低到高依次是正常宮頸組10.0%、LSIL組31.3%、HSIL組64.7%、SCC組80.0%。SCC組CDK2的表達顯著高于正常宮頸組和LSIL組，(χ2=23.558，χ2=14.859，均P<0.01)，但正常組與LSIL組，HSIL組與SCC組差異無統(tǒng)計學意義(χ2=3.131，χ2=1.844，P=0.077，P=0.174)，見表1。

表1 CDK2在不同程度宮頸上皮內(nèi)病變的表達

2.2 PCNA在不同程度病變中的表達

PCNA在各組中表達差異顯著(χ2=30.554，P<0.01)，表達率由低到高依次是是正常宮頸組30.0%、LSIL組34.4%、HSIL組67.6%、SCC組93.3%。SCC組PCNA的表達顯著高于正常宮頸組、LSIL組、HSIL組(χ2=22.120，χ2=23.065，χ2=6.496，P<0.01，P<0.01，P<0.05)，但LSIL組與正常宮頸組差異無統(tǒng)計學意義(χ2=0.107，P=0.774)，見表2。

表2 PCNA在不同程度宮頸上皮內(nèi)病變的表達

2.3 CDK2、PCNA與宮頸病變相關(guān)性分析

經(jīng)Spearman相關(guān)性分析結(jié)果表明，CDK2與PCNA在不同級別宮頸上皮內(nèi)病變的表達呈正相關(guān)，有統(tǒng)計學意義(r=0.766，P=0.000)，見表3。

表3 CDK2和PCNA在不同程度宮頸上皮內(nèi)病變的相關(guān)性

3 討論

細胞增殖由復(fù)雜的蛋白質(zhì)網(wǎng)絡(luò)控制，這些蛋白質(zhì)網(wǎng)絡(luò)決定了細胞周期事件的順序和時間。CDK2是完成G1期和G1～S期過渡的一個關(guān)鍵的細胞周期蛋白依賴性激酶。CDK2與不同的cyclin結(jié)合發(fā)揮不同的作用，并促使細胞周期規(guī)律進行[3]。CDK2表達量的改變，與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，過表達可促使乳腺癌[4]、肝癌[5]、宮頸癌[6]等腫瘤的發(fā)生發(fā)展。在本研究中，CDK2在HSIL組和SCC組中的表達顯著高于其他組，可以推測CDK2的過表達對宮頸上皮內(nèi)病變進展有促進作用。研究發(fā)現(xiàn)，PCNA在細胞周期調(diào)控方面發(fā)揮重要作用，PCNA與cyclingE-CDK2形成的復(fù)合物是控制S期的入口點，進入S期后PCNA又與CDK2-cyclinA形成復(fù)合物，磷酸化復(fù)制因子C和 DNA連接酶I[7]。如果S期發(fā)生細胞損傷，P21通過結(jié)合 PCNA 使Cyclin-CDK 復(fù)合物作用滅活，從而抑制 DNA 聚合酶 δ 的激活，直接抑制 DNA 受損細胞在 S 期進一步復(fù)制[8]。當宮頸病變發(fā)生時，P21結(jié)合PCNA的能力被抑制，不能阻止受損DNA繼續(xù)復(fù)制，最終導(dǎo)致細胞惡性變[9]。本研究中，PCNA在SCC組中的表達水平，顯著高于正常宮頸組、LSIL組、HSIL組，與萬兵[10]等人的研究結(jié)果一致。通過Spearman相關(guān)性分析，CDK2與PCNA呈正相關(guān)，提示二者在病變進展中起協(xié)同作用。綜上所述，在宮頸上皮內(nèi)病變演變過程中，CDK2和PCNA的表達逐漸增加，進一步促進損傷細胞的惡性增殖能力，最終導(dǎo)致細胞的惡性變，二者聯(lián)合檢測有望成為預(yù)測宮頸上皮內(nèi)病變進展的分子標志。