劉迎嘉

新疆醫(yī)科大學(xué)第五附屬醫(yī)院病理科，烏魯木齊830011

宮頸癌是全球女性最常見的惡性腫瘤之一，也是欠發(fā)達(dá)國家女性癌癥死亡的第三大原因［1］。近年宮頸癌的發(fā)病率呈逐漸上升和年輕化趨勢［2］。新疆是宮頸癌的高發(fā)地區(qū)，維吾爾族女性宮頸癌的發(fā)病率、病死率均較高。晚期復(fù)發(fā)宮頸癌患者的預(yù)后差，其主要原因?yàn)槟[瘤細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移。細(xì)胞間黏附喪失和細(xì)胞極性改變是導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞侵襲、遷移的關(guān)鍵原因。分離缺陷基因3（PARD3）的產(chǎn)物是一種緊鄰細(xì)胞質(zhì)膜肌動蛋白網(wǎng)絡(luò)層的極性蛋白，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展進(jìn)程中起重要作用。研究［3］顯示，缺氧可導(dǎo)致蛋白激酶Cζ（PKCζ）/PARD3/PARD6 轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)下調(diào)，誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞的遷移、侵襲。人乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231、SK-BR3 中均存在GAB1 過表達(dá)，加強(qiáng)GAB1 與PARD3 的互相作用，最終導(dǎo)致PARD/αPKC 極性蛋白復(fù)合物解離，促進(jìn)細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移［4］。酪氨酸激酶2（Janus Kinase 2，JAK2）是非受體型酪氨酸蛋白激酶（Janus激酶）家族的一員，多種細(xì)胞因子和受體結(jié)合后可以磷酸化激活JAK2，進(jìn)一步磷酸化下游靶蛋白的絡(luò)氨酸殘基，從而調(diào)控下游基因的轉(zhuǎn)錄，在癌細(xì)胞的增殖、分化、凋亡過程中發(fā)揮調(diào)控作用［5-6］。但目前PARD3 在宮頸癌侵襲、轉(zhuǎn)移中的潛在分子機(jī)制尚不清楚，PARD3是否通過調(diào)控p-JAK2表達(dá)在宮頸癌的侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮調(diào)控作用相關(guān)研究較少。2021 年2月起，我們觀察了抑制PARD 3 表達(dá)的宮頸癌細(xì)胞系SiHa 的增殖、凋亡、侵襲、遷移能力變化，并探討PARD3、p-JAK2 對SiHa 細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移中的調(diào)控作用機(jī)制，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞、試劑及儀器 人宮頸癌細(xì)胞系SiHa 細(xì)胞（Cell Bank of the Chinese Academy of Science，Shanghai，China）培養(yǎng)于含10%胎牛血清的DMEM（41500034，Gibco）培養(yǎng)基中，細(xì)胞的密度達(dá)到80%時按1∶3 的比例傳代，37 ℃、5% CO2飽和濕度條件下擴(kuò)大培養(yǎng)。

1.2 PARD 3siRNA 腺病毒真核載體制備 以前期實(shí)驗(yàn)室保存的PARD3 質(zhì)粒為模板，針對PARD3 全部轉(zhuǎn)錄本設(shè)計(jì)siRNA1 和siRNA 2（Ribobio，guangzhou，China）序列分別為GAAGGTCTATGTCTACTGA 及GAAACAGCGTTGGATGATA。在目的片段兩端添加上相應(yīng)的酶切位點(diǎn)，進(jìn)行PARD3 目的片段PCR 擴(kuò)增。將PARD3PCR 產(chǎn)物和目的載體pRS-AD-1 用Asc1、Pme1 分別進(jìn)行酶切，T4 DNA ligase 連接PCR 產(chǎn)物及目的載體。挑取單菌落進(jìn)行菌落PCR，將PCR鑒定呈陽性的克隆接到LB液體培養(yǎng)基中，搖菌過夜，次日抽提質(zhì)粒。進(jìn)行腺病毒載體的重組及鑒定大量擴(kuò)增穿梭質(zhì)粒pRS-AD-1-PARD3 和骨架質(zhì)粒pRS-AD-2-MCS-RFP，以PacⅠ單酶切重組病毒質(zhì)粒，37 ℃孵箱放置4 h。制備PARD 3siRNA1（抑制PARD3 基因表達(dá)）、PARD 3siRNA2（抑制PARD3 基因表達(dá)），同時以骨架質(zhì)粒pRS-AD-2-MCS-RFPp-JAK2作為siRNC空白對照。

1.3 SiHa 細(xì)胞分組及PARD 3siRNA 腺病毒真核載體轉(zhuǎn)染方法 取處于對數(shù)生長期生長狀態(tài)良好的SiHa 細(xì)胞分為siRNA1 組、siRNA2 組、siRNC 組，以2×105/孔接種于細(xì)胞培養(yǎng)6 孔板，每組6 個復(fù)孔，37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜。用100 μL無血清opti-MEM分別稀釋10 μL 的PARD 3siRNA1、PARD3siRNA2、siRNC，加入混合LipofectamineTM2000 和siRNA 的稀釋液，每個培養(yǎng)孔加混合液200 μL培養(yǎng)。

1.4 三組細(xì)胞增殖、凋亡情況觀察 ①三組細(xì)胞增殖情況觀察：培養(yǎng)48 h 時采用CCK-8（E606335-0100，上海生工）法觀察細(xì)胞增殖情況。取三組細(xì)胞，37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)6 h 吸出混合液換入完全DMEM 培養(yǎng)基，37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；分別于培養(yǎng)24、48 h 時每孔加入10 μL CCK8溶液，37 ℃培養(yǎng)4 h，采用酶標(biāo)儀測算各孔細(xì)胞的光密度OD450 值，以O(shè)D450 值代表各組細(xì)胞的增殖情況。②三組細(xì)胞凋亡情況觀察：培養(yǎng)48 h 時取三組細(xì)胞，用不含EDTA 的0.25%胰酶消化細(xì)胞，終止消化后收集細(xì)胞；用PBS 將細(xì)胞潤洗2 次，1 500 r/min離心5 min；按照AnnexinV-FITC/PI細(xì)胞凋亡檢測試劑盒（40302ES20，USA）說明進(jìn)行操作，最后流式細(xì)胞儀上機(jī)檢測，測算三組細(xì)胞凋亡情況。重復(fù)3次，取平均值。

1.5 三組細(xì)胞遷移、侵襲情況觀察 培養(yǎng)48 h時取各組細(xì)胞。①在24 孔板中預(yù)先加入800 μL 10%FBS 的DMEM 培養(yǎng)基（含雙抗），放入Transwell 小室，培養(yǎng)1 h 在Transwell 上室分別接入200 μL 各組細(xì)胞懸液，37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。取出Transwell，PBS 清洗。用干凈的棉球?qū)⑸鲜乙粋?cè)的未遷移的細(xì)胞擦干凈，顯微鏡下觀察并進(jìn)行細(xì)胞遷移計(jì)數(shù)，各組細(xì)胞遷移相對數(shù)量=各組遷移細(xì)胞數(shù)/siRNC 組遷移細(xì)胞數(shù)×100%；②在24 孔板中加入4 ℃預(yù)冷800 μL 10% FBS DMEM 培養(yǎng)基（含雙抗），放入Transwell 小室，在Transwell 小室上室底部中央垂直加入100 μL終濃度為1 mg/mL 的Matrigel，37 ℃溫育4～5 h 使其干成膠狀，待Matrigel 干成膠狀后在Transwell 上室分別接入200 μL 各組細(xì)胞懸液，37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)，取出Transwell，PBS清洗。用干凈的棉球?qū)⑸鲜乙粋?cè)的未遷移的細(xì)胞擦干凈，顯微鏡下觀察并進(jìn)行細(xì)胞侵襲計(jì)數(shù)，各組細(xì)胞侵襲相對數(shù)量=各組侵襲細(xì)胞數(shù)/siRNC 組侵襲細(xì)胞數(shù)×100%。重復(fù)3次，取平均值。

1.6 三組SiHa 細(xì)胞PARD3、JAK2 mRNA 檢測 采用qRT-PCR 法。轉(zhuǎn)染后即刻采用TRIzol 法提取三組SiHa細(xì)胞總RNA。合成逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。實(shí)時熒光定量PCR 檢測，反應(yīng)體系為20 μL，反應(yīng)條件為95 ℃預(yù)變性2 min、95 ℃變性15 s、60 ℃退火1 min，反應(yīng)40 個循環(huán)。GAPDH 上游引物5’-TCAAGAAGGTGGTGAAGCAGG-3’；下游引物5’-TCAAAGGTGGAGGAGTGGGT-3’。PARD3上游引物5‘-AGGGAGGCCCTTCTATTCCT-3’；下游引物5’-TGCCTACACCGCTTAAAGGC-3’。JAK2 上游 引 物5′-GTCATGGCCCCAATTTCGATGCC-3′；下游 引 物5′-TCGCTCGACAGCAAAAGTCA-3′。繪 制溶解曲線，以標(biāo)準(zhǔn)曲線法測算各組PARD3 及JAK2 mRNA的相對表達(dá)量。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，取平均值。

1.7 三組SiHa 細(xì)胞PARD3、JAK2 蛋白檢測 采用Western Blotting 法。分別于培養(yǎng)24、48 h 時適量取各組細(xì)胞，應(yīng)用RIPA 裂解液（Beyotime）提取總蛋白，BCA 蛋白定量后樣品加樣，每孔上樣SiHa 細(xì)胞蛋白15 μg 進(jìn)行SDS-PAGE 電泳。然后轉(zhuǎn)印至PVDF 膜，用含5% 脫脂奶粉的TBST（封閉液）浸泡PVDF 膜，室溫?fù)u床封閉2 h。用封閉液稀釋相應(yīng)的一抗PARD3（Ab64646，abcam）、JAK2（3230，CST），使PVDF 膜浸泡于一抗孵育液中，4 ℃孵育過夜。使PVDF 膜浸泡于二抗孵育液中，37 ℃搖床孵育2 h，洗去多余二抗。顯色曝光、掃描膠片，用BandScan分析膠片PARD3灰度值，以膠片灰度值代表PARD3的相對表達(dá)量。于培養(yǎng)48 h 時候取三組細(xì)胞Western Blotting 法測算三組細(xì)胞JAK2、p-JAK2 蛋白的相對表達(dá)量。重復(fù)3次，取平均值。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用GraphPad Prism5 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。采用P-P 圖檢驗(yàn)計(jì)量資料的正態(tài)性，呈正態(tài)分布的計(jì)量資料用以表示，組間比較采用單因素方差One-wayANOVA分析，其中細(xì)胞增殖數(shù)據(jù)采用Two-wayANOVA分析。P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同時間三組細(xì)胞OD450 值、細(xì)胞凋亡率比較 培養(yǎng)24 h 時siRNC 組、siRNA1 組、siRNA2 組細(xì)胞的OD450 值分別為1.07 ± 0.04、1.00 ± 0.05、1.02 ± 0.03；培養(yǎng)48 h 時siRNC 組、siRNA1 組、siRNA2 組細(xì)胞的OD450 值分別為1.37 ± 0.04、1.50 ±0.04、1.66 ± 0.04。與siRNC 組比較，培養(yǎng)24、48 h時siRNA1 組、siRNA2 組細(xì)胞的OD450 值增加（P均＜0.05）。siRNC 組、siRNA1 組、siRNA2 組細(xì)胞凋亡率分別為6.813% ± 0.571%、16.443% ±0.375%、23.020% ± 0.284%，與siRNC 組比較，siRNA2組細(xì)胞凋亡率降低（P＜0.05）。

2.2 三組細(xì)胞遷移、侵襲數(shù)比較 培養(yǎng)48 h 時siRNC 組、siRNA1 組、siRNA2 組細(xì)胞遷移數(shù)分別為100.000 ± 7.051、122.300 ± 4.290、129.200 ±7.086，細(xì)胞侵襲數(shù)分別為100.000 ± 9.039、120.500 ± 5.837、131.300 ± 7.903，與siRNC 組比較，siRNA1 組、siRNA2 組細(xì)胞遷移數(shù)、侵襲數(shù)增加（P均＜0.05）。

2.3 三組SiHa 細(xì)胞PARD3、JAK2 mRNA 相對表達(dá)量比較 siRNC組、siRNA1組、siRNA2組PARD3mRNA相對表達(dá)量分別為1.009 ± 0.147、0.676 ± 0.154、0.396 ± 0.091，JAK2mRNA相對表達(dá)量分別為1.015 ± 0.182、1.204 ± 0.265、1.030 ± 0.284；與siRNC 組比較，siRNA1 組、siRNA2 組PARD3 mRNA相對表達(dá)量低（P均＜0.05）；與siRNA1 組比較，siRNA2組PARD3 mRNA相對表達(dá)量低（P＜0.05）。

2.4 三組SiHa 細(xì)胞PARD3、JAK2、p-JAK2 蛋白相對表達(dá)量比較 培養(yǎng)24 h 時siRNC 組、siRNA1 組、siRNA2 組PARD3 蛋白相對表達(dá)量分別為100.000 ± 4.687、104.000 ± 4.488、118.000 ±4.741，培養(yǎng)48 h 時siRNC 組、siRNA1 組、siRNA2 組PARD3 蛋白相對表達(dá)量分別為100.000 ± 3.611、70.840±1.482、49.640±0.993，與培養(yǎng)24 h 比較，培養(yǎng)48 h 時siRNA1 組、siRNA2 組PARD3 相對表達(dá)量下降（P均＜0.05），因此后續(xù)實(shí)驗(yàn)選取轉(zhuǎn)染48 h為最優(yōu)處理時間。培養(yǎng)48 h 時siRNC 組、siRNA1 組、siRNA2 組JAK2 蛋白相對表達(dá)量分別為100.000 ±3.313、101.900 ± 1.403、102.100 ± 0.899；p-JAK2蛋白相對表達(dá)量分別為100.000 ± 5.487、174.700 ± 11.650、220.400 ± 5.757，與siRNC 組比較，siRNA1組、siRNA2組p-JAK2蛋白相對表達(dá)量均增加（P均＜0.05）。

3 討論

在侵襲過程中腫瘤細(xì)胞通過喪失細(xì)胞間粘附能力，獲得運(yùn)動的潛能，離開原發(fā)腫瘤部位浸潤到鄰近組織及脈管系統(tǒng)，最終導(dǎo)致遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。細(xì)胞間相互連接作用減弱，細(xì)胞失去細(xì)胞間黏連并改變細(xì)胞極性，往往是導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞發(fā)生侵襲、遷移的關(guān)鍵原因，而上皮細(xì)胞極性主要是依靠極性蛋白來調(diào)控的［7-8］。

Par/αPKC 極性蛋白復(fù)合物緊鄰細(xì)胞質(zhì)膜的肌動蛋白網(wǎng)絡(luò)層，建立和維持了細(xì)胞極性。一旦極性蛋白之間的平衡失調(diào)，則會破壞細(xì)胞極性，誘導(dǎo)腫瘤的發(fā)生、增殖及遷移。PARD3 是Par 極性蛋白家族的主要調(diào)節(jié)因子。研究［4，9-10］顯示，PARD3 在乳腺癌、甲狀腺癌等多種腫瘤中扮演著腫瘤抑制者的角色，隨著PARD3 平衡的改變，腫瘤表現(xiàn)出強(qiáng)的侵襲轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)傾向。ZHAO 等［9］研究發(fā)現(xiàn)，在Luminal A亞型乳腺癌中，PARD3 下調(diào)與較短的無復(fù)發(fā)生存期相關(guān)。轉(zhuǎn)錄因子Sp1 結(jié)合到PARD3 啟動子區(qū)域并誘導(dǎo)了PARD3 的表達(dá)，Sp1 低的乳腺癌患者RFS 明顯降低，抑制PARD3可促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的遷移和侵襲。過表達(dá)PARD3 部分逆轉(zhuǎn)Sp1 敲除誘導(dǎo)的遷移和侵襲，說明極性蛋白PARD3的下調(diào)受多種基因調(diào)控并與ER陽性乳腺癌患者預(yù)后不良相關(guān)。

ZHANG 等［10］發(fā)現(xiàn)在80 個甲狀腺腫瘤樣本中，MicroRNA 483-3p（miR-483）上調(diào)，PARD3 下調(diào)，無病生存期降低。過表達(dá)miR-483 可誘導(dǎo)細(xì)胞生長、遷移和侵襲。抑制miR-483 使PARD3 表達(dá)增加，抑制TGF-β1誘導(dǎo)的細(xì)胞遷移和侵襲降低。雙熒光素酶報(bào)告基因檢測結(jié)果表明，miR-483 靶向抑制時，PARD3 表達(dá)下調(diào)。TGF-β1可誘導(dǎo)上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化及Tiam1-Rac 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，過表達(dá)PARD3 可降低TGFβ1的表達(dá)。PARD3降低了EMT和Tiam-Rac1信號的抑制，這是由miR-483 轉(zhuǎn)染ATC 細(xì)胞引起的。結(jié)果表明，PARD3 下調(diào)導(dǎo)致ATC 細(xì)胞侵襲和EMT 增加，miR-483可促進(jìn)細(xì)胞侵襲和EMT。

本實(shí)驗(yàn)采用qRT-PCR和蛋白印跡法分別檢測轉(zhuǎn)染后siRNC組、siRNA1組及siRNA2組PARD3 mRNA含量和蛋白相對表達(dá)量，與siRNC 組相比，siRNA1組和siRNA2 組PARD3 mRNA 均顯著降低，與siRNA1 組相比siRNA2 組PARD 3mRNA 相對表達(dá)量下降更顯著，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。轉(zhuǎn)染后48 h siRNA1 組和siRNA2 組的PARD3 蛋白表達(dá)量顯著下降，分別為70.84%和49.64%，尤以siRNA2 組下降更為顯著。以上兩種實(shí)驗(yàn)方法檢測結(jié)果一致，說明本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)腺病毒真核載體siRNA-PARD3 轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)成功；篩選的2 條siRNA 基因轉(zhuǎn)錄本中siRNA2 轉(zhuǎn)染效果更明顯，可以更顯著降低PARD3 mRNA 及蛋白含量，為將來更深一步的研究提供基因轉(zhuǎn)錄本的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)24、48 h 時各組siHa 細(xì)胞的OD450 值都有顯著增加，隨著觀察時間的延長，培養(yǎng)48 h 時OD450 值則顯著增加，說明抑制PARD3 能夠促進(jìn)宮頸癌SiHa 細(xì)胞增殖，并且抑制PARD3 RNA表達(dá)越明顯，細(xì)胞增殖越快。流式檢測細(xì)胞凋亡發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)48 h 后SiHa 細(xì)胞凋亡百分比減少，與對照siRNC 組相比，siRNA2 組細(xì)胞凋亡率降低有顯著性差異，說明siRNA2 組能有效抑制SiHa細(xì)胞的凋亡。Treanswell小室和Matrigel實(shí)驗(yàn)結(jié)果均顯示干擾PARD3 基因表達(dá)的SiHa 細(xì)胞侵襲遷移數(shù)量增多，與對照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明沉默PARD3 后SiHa 細(xì)胞侵襲遷移能力增強(qiáng)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示PARD3 的下調(diào)可能在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的發(fā)揮重要作用。

JAKs/STAT3 通路的異常激活是多種惡性腫瘤的一個特征。JAKs/STAT3 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的激活在免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)、促進(jìn)細(xì)胞增殖、分化、發(fā)育、生存等方面都發(fā)揮重要作用，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展也有著密切的關(guān)系。STAT3 的上游因子JAK2，不僅作為原激酶介導(dǎo)其磷酸化，而且在大多數(shù)腫瘤活化中都起到關(guān)鍵作用［11］。一項(xiàng)研究［12］用JAK1，2 抑制劑處理ATM 基因沉默的非小細(xì)胞肺癌A549cisR 和H157cisR 細(xì)胞株，結(jié)果發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞侵襲能力減弱，上皮鈣粘附蛋白表達(dá)升高，神經(jīng)鈣粘附蛋白、波形蛋白和轉(zhuǎn)錄因子Snail表達(dá)降低，與細(xì)胞侵襲能力一致，提示ATM 通過JAK 1，2/STAT 3 途徑下調(diào)PD-L1，介導(dǎo)順鉑耐藥的A549cisR 和H157cisR 細(xì)胞的EMT和轉(zhuǎn)移。

SHEN 等［13］通過調(diào)節(jié)長鏈非編碼RNA HOST2（人卵巢癌特異性轉(zhuǎn)錄本2）和抑制JAK2/STAT3 信號通路，研究異丙酚對人卵巢癌細(xì)胞ES2 和OVCAR-3體外生長的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)ES-2和OVCAR-3細(xì)胞的細(xì)胞活力和細(xì)胞內(nèi)HOST2 的表達(dá)隨異丙酚濃度的增加而逐漸降低，且呈劑量依賴性。與異丙酚組相比，過表達(dá)HOST2 顯著促進(jìn)細(xì)胞增殖、遷移、侵襲，抑制細(xì)胞凋亡，改善異丙酚對腫瘤細(xì)胞生長的抑制作用。與異丙酚組相比，pcDNA-HOST2 組Bcl-2 表達(dá)顯著升高，Bax 表達(dá)顯著降低，Cleaved caspase3/caspase3 比值顯著降低。過表達(dá)HOST2 顯著提高了JAK2 和STAT3 的磷酸化水平，降低了異丙酚對JAK2/STAT3 信號通路的抑制作用。HUANG等［14］研究癌癥相關(guān)區(qū)域長非編碼RNA-7（CARLo-7）在膀胱癌發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制時，發(fā)現(xiàn)CARLo-7在膀胱癌組織和細(xì)胞系中表達(dá)顯著上調(diào)。sh-CARLo-7沉默CARLo-7 可顯著抑制膀胱癌細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，而強(qiáng)化CARLo-7 表達(dá)則促進(jìn)細(xì)胞增殖。同時，沉默CARLo-7 可減弱膀胱癌細(xì)胞的遷移、侵襲和EMT，而過表達(dá)CARLo-7 則有相反的效果。通過下調(diào)CARLo-7、β-catenin、p-JAK2和p-STAT3 mRNA和蛋白水平降低，而Wnt/β-catenin 或JAK2/STAT3通路的激活則消除了CARLo-7 下調(diào)對細(xì)胞增殖和遷移的影響。以上研究均提示腫瘤細(xì)胞的增殖遷移侵襲調(diào)控機(jī)制可能是通過抑制JAK2/STAT3 信號通路的激活來實(shí)現(xiàn)的。

本研究中siRNAPARD3 轉(zhuǎn)染SiHa 細(xì)胞48 h 后，與siRNC組相比，siRNA1組和siRNA2組JAK2 mRNA含量和JAK2總蛋白表達(dá)量無明顯變化，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但是p-JAK2的蛋白相對表達(dá)量增加，其中siRNA2 自P-JAK 表達(dá)升高更明顯更顯著，說明沉默PARD3 上調(diào)磷酸化的JAK2，激活下游磷酸化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路從而調(diào)控SiHa 細(xì)胞增殖凋亡遷移侵襲，促進(jìn)宮頸癌惡性進(jìn)展。以上結(jié)果顯示，PARD3 基因沉默后可以上調(diào)Tyr931 磷酸化的JAK2 并且促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲轉(zhuǎn)移，抑制了細(xì)胞凋亡，提示抑制PARD3表達(dá)可能通過調(diào)節(jié)JAK2 Tyr931磷酸化信號通路，促進(jìn)SiHa 細(xì)胞的侵襲，從而加速SiHa 腫瘤的發(fā)生發(fā)展，PARD3 和JAK2 共同在SiHa 細(xì)胞侵襲遷移中發(fā)揮重要的作用。

綜上所述，抑制PARD3 表達(dá)的SiHa 細(xì)胞PARD3 mRNA 和蛋白相對表達(dá)量均降低，p-JAK2蛋白相對表達(dá)量升高，細(xì)胞增殖能力升高、細(xì)胞凋亡抑制、侵襲遷移能力增強(qiáng)。PARD3 很可能通過調(diào)節(jié)SiHa JAK2 的磷酸化表達(dá)水平促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞SiHa的增殖、侵襲及遷移，抑制細(xì)胞凋亡。