秦 丹

呼倫貝爾市食品藥品檢驗所，內(nèi)蒙古 呼倫貝爾 021000

蒙藥壯西-11是在壯西-10丸基礎之上改進工藝，由奶制紅石膏、大黃、土木香、木香、訶子等十一味藥材組成的復方制劑[1]。具有消瘀、散結、理氣、通脈、消炎的作用，用于月經(jīng)不調(diào)、氣瘀、血瘀癥、盆腔炎、附件炎、膀胱炎等。方中君藥為奶制紅石膏，指標成分不易控制，故選用臣藥大黃作為指標成分[1]。大黃為蓼科植物掌葉大黃(RheumpalmatumL.)、唐古特大黃(Rh.tanguticumMaxim.ex Balf.)或藥用大黃(Rh.officinaleBaill.)，具有瀉下攻積，清熱瀉火，涼血解毒，逐瘀通經(jīng)，利濕退黃之功效[2]?，F(xiàn)代研究證明，大黃藥理活性的主要成分為蒽醌類、蒽酮類、鞣質(zhì)、多糖等報道較多[3-4]。大黃蒽醌類衍生物主要包括蘆薈大黃素、大黃素、大黃素甲醚、大黃酚及大黃酸[5]。在壯西-10丸研究基礎之上，本制劑選擇大黃酚作為質(zhì)量控制指標，并建立了測定壯西-11中大黃酚含量的高效液相色譜方法，專屬性強，更便于產(chǎn)品的質(zhì)量控制?，F(xiàn)將實驗報道如下。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Waters e2695型液相色譜儀(2998 PDA Detector)、 UV-2450型紫外-可見分光光度計(島津儀器有限公司)。Sartorius BSA224S和BT 125D型電子天平，數(shù)顯恒溫水浴鍋，KQ-500DE型數(shù)控超聲波清洗器。

1.2 材料 大黃酚對照品(批號：110796-201922，純度99.4%)由中國食品藥品檢定研究院提供；壯西-11由內(nèi)蒙古自治區(qū)國際蒙醫(yī)醫(yī)院提供。

2 方法與結果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗 參照2020年版《中國藥典》一部“大黃藥材含量測定”項下含量測定方法，最終選定的色譜條件為色譜柱：SHIMADZU Shim-pack GIST C18(250 mm×4.6 mm，5 μm);流動相：甲醇-0.1%磷酸溶液(90∶10);檢測波長：254 nm；流速：0.8 mL/min;進樣量10 μL;柱溫：30 ℃，理論塔板數(shù)不低于3000[2,6]。色譜圖如圖1、圖2所示。

圖1 對照品溶液高效液相色譜圖

圖2 供試品溶液高效液相色譜圖

2.2 溶液制備方法 對照品溶液：取大黃酚對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL約含0.1 mg的溶液，即得。供試品溶液：參照2020年版《中國藥典》一部“大黃藥材含量測定”項下含量測定方法，將本品研細取約1.2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定重量，加熱回流1 h，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液5 mL，置燒瓶中，揮去溶劑，加入10 mL鹽酸溶液(8%)，超聲處理2 min，再加入三氯甲烷10 mL，加熱回流1 h，取出，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗滌容器，分取三氯甲烷層，剩余酸液再用三氯甲烷提取4次，10 mL/次，合并三氯甲烷液，減壓回收溶劑至干，殘渣加甲醇溶解，轉移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得[2,7]。

2.3 方法學考察

2.3.1 線性關系考察 取大黃酚對照品約2.36 mg，精密稱定，置25 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻(0.0938 mg/mL)。精密吸取對照品溶液適量，以甲醇稀釋配制成質(zhì)量濃度為2.814 μg/mL、3.752 μg/mL、 5.628 μg/mL、6.566 μg/mL、7.504 μg/mL的系列溶液。按上述色譜條件，以對照品溶液質(zhì)量濃度(X，μg/mL)為橫坐標，峰面積為縱坐標(Y)進行線性回歸，測得線性回歸方程Y=74220X-7454(R2=0.9997，n=10)。結果表明大黃酚質(zhì)量濃度在2.814～7.504 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關系良好。

2.3.2 精密度試驗 取大黃酚對照品溶液，重復進樣5次，記錄峰面積，計算RSD值為1.23%，表明儀器精密度良好。結果見表1。

表1 精密度試驗結果表 (n=5)

2.3.3 重復性試驗 制備供試品溶液，平行6份，記錄峰面積，結果樣品中大黃酚含量的RSD值為1.8%，顯示方法重復性良好。結果見表2。

表2 重復性試驗結果

2.3.4 穩(wěn)定性試驗 取同一份供試品溶液，分別于0 h、2.5 h、5 h、7.5 h、10 h、12.5 h、15 h依次進樣測定，結果大黃酚峰面積的RSD值為0.74%。結果表明：供試品溶液在15 h穩(wěn)定性良好。結果見表3。

表3 供試品溶液穩(wěn)定性考察結果

2.3.5 加樣回收試驗 取本品(大黃酚含量為0.216 mg/g)9份，每3份為1組，每一組精密加入大黃酚對照品溶液(0.1014 mg/mL)1 mL、1.3 mL、1.6 mL，制備供試品溶液，進樣測定，記錄峰面積，計算加樣回收率。結果表明，大黃酚的加樣回收率結果良好。結果見表 4。

表4 大黃酚加樣回收試驗結果

2.4 樣品含量測定 分別取3批壯西-11各約1.2 g，進樣測定并記錄峰面積，計算制劑中大黃酚的含量，結果見表5。

表5 三批壯西-11中大黃酚的含量表

3 討論

3.1 流速考察 在流速分別為0.8 mL/min、1.0 mL/min，其余色譜條件不變，對供試品溶液進樣考察。結果表明，供試品溶液中的大黃酚色譜峰在上述兩種流速下均能較好分離，但隨著試驗的進行，流速為1.0 mL/min時柱壓偏高，0.8 mL/min，柱壓相對理想，且含量無明顯差異，選擇流速為0.8 mL/min。

3.2 提取效率的考察 試驗中考察了甲醇加熱回流30 min、60 min、90 min不同提取時間對提取含量的影響，結果表明甲醇加熱回流提取60 min，大黃酚的含量基本穩(wěn)定不變，且高于加熱回流提取30 min及90 min時，故選擇甲醇加熱回流時間為60 min。

3.3 萃取次數(shù)的考察 試驗中考察了三氯甲烷提取次數(shù)：2次、3次、4次、5次(10 mL/次)對提取含量的影響，結果表明三氯甲烷萃取5次與4次含量基本不變，且含量高于萃取3次，故選擇萃取次數(shù)為4次。

3.4 色譜柱考察 選用不同的色譜柱(SHIMADZU Shim-pack GIST C18，SHIMADZU-GL WondaCract ODS-2)對供試品溶液進樣考察。結果表明，分離度、理論塔板數(shù)均能夠滿足要求，說明耐用性較好。

本試驗采用HPLC法對壯西-11中的大黃酚成分開展了方法學考察，建立了高效液相色譜方法，通過對三批樣品含量的測定進一步驗證了大黃酚含量測定的穩(wěn)定性。該方法簡便易操作，靈敏度和準確度較高，穩(wěn)定性試驗、重復性試驗及加樣回收試驗都理想，可以用于壯西-11中大黃酚的含量測定及質(zhì)量控制。