馮騰壘， 宋 瑞， 高景報， 劉 洋， 許 寧， 趙永坡， 謝 亮

（1. 石家莊市畜產(chǎn)品和獸藥飼料質(zhì)量檢測中心 050041； 2. 河北省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳 050000；3. 河北省農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣總站 050000； 4. 石家莊市農(nóng)林科學(xué)研究院 050000； 5. 新樂市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局 050000）

氟喹諾酮類藥物是人工合成的第三代抗菌藥物，此類藥物價格低廉、抗菌作用強(qiáng)，因而被廣泛用于治療畜禽動物的細(xì)菌感染疾病[1-3]。常見的氟喹諾酮類藥物有諾氟沙星、氧氟沙星、環(huán)丙沙星、沙拉沙星等[4]。但當(dāng)人體食用含有該類藥物的畜禽產(chǎn)品后，會引發(fā)人體內(nèi)分泌系統(tǒng)紊亂、神經(jīng)系統(tǒng)損傷及誘發(fā)體內(nèi)細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性[5]，因此國家已規(guī)定了畜禽產(chǎn)品中氟喹諾酮類化合物的最高殘留限量。但是由于部分從業(yè)人員對獸藥殘留限量的認(rèn)識不足，甚至一味兒追求經(jīng)濟(jì)利益，存在不規(guī)范使用該類藥物，甚至在動物飼養(yǎng)、飼料中大量使用，使得畜禽產(chǎn)品中氟喹諾酮類化合物殘留限量超標(biāo)[6]，對人類身體健康造成嚴(yán)重危害。因此，建立高效、靈敏的方法來檢測畜禽產(chǎn)品中氟喹諾酮類藥物變得十分重要。近年來，針對畜禽產(chǎn)品中氟喹諾酮類藥物的殘留檢測方法主要有高效液相-質(zhì)譜聯(lián)用法[7]、酶聯(lián)免疫吸附法[8]、分子印跡技術(shù)法[9]、高效液相色譜法[10]等。本文闡述了近年來氟喹諾酮類藥物的殘留檢測進(jìn)展，并為今后該類化合物的檢測發(fā)展做了展望。

1 高效液相色譜法（HPLC）

高效液相色譜法（HPLC）以液體作為流動相，利用高壓輸液泵，將具有不同極性的單一溶劑或混合溶劑等流動相泵入裝有固定相的色譜柱中，依據(jù)極性不同將各組分在色譜柱內(nèi)分離后，隨后進(jìn)入檢測器進(jìn)行檢測分析，從而實(shí)現(xiàn)對樣品的檢測。近年來又有廠家開發(fā)提供更大壓力的液相色譜系統(tǒng)，使用更高的壓力，更小的流速，使得檢測時間大大縮短，而更小的色譜柱粒徑，提高了柱效，改善了峰的分離度。該方法檢測速度快、靈敏性好、應(yīng)用范圍廣，因此被廣泛應(yīng)用于藥品分析、獸藥殘留檢測中。

陳薔[11]等利用反相高效液相色譜法，建立了對雞蛋中4種氟喹諾酮類化合物的殘留檢測方法。該方法采用正己烷脫脂，利用C18固相萃取柱凈化，反相高效液相色譜分離后，進(jìn)入熒光檢測器測定。該方法中達(dá)氟沙星的檢測限達(dá)到 1μg/kg。平均回收率達(dá)到82.2%～101.3%。劉媛[12]等利用高效液相色譜法，同時檢測雞蛋中 4 種氟喹諾酮類藥物。該方法以乙腈-0.05mol/L磷酸/三乙胺緩沖液（pH 2.4）（19∶81）作為流動相，并采用熒光檢測器，來檢測雞蛋中的4種氟喹諾酮類化合物。該方法中達(dá)諾沙星的最低檢出限為2ug/kg，環(huán)丙沙星、沙拉沙星/恩諾沙星的最低檢出限為10ug/kg，環(huán)丙沙星、恩諾沙星、沙拉沙星在2.5～500ug/l， 達(dá)諾沙星在 0.5～100ug/l線性范圍良好，且雞蛋中 4 種氟喹諾酮類化合物的加標(biāo)回收率為 78.1% ～95.7%。陳小紅[13]等建立了采用高效液相色譜法測定雞蛋中氟喹諾酮類藥物殘留檢測的方法，該方法采用熒光檢測器檢測，外標(biāo)法定量，該方法表明雞蛋中4 種氟喹諾酮類殘留藥物能在 15 min內(nèi)得到有效分離，且達(dá)氟沙星檢測限達(dá)到2ug/kg，回收率高。

2 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（LC-MS）

液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（LC-MS）檢測化合物殘留是將樣品在液相色譜柱中分離后，隨后進(jìn)入質(zhì)譜系統(tǒng)中，將目標(biāo)化合物分子離子化后，通過測量各種離子峰的強(qiáng)度，從而實(shí)現(xiàn)檢測化合物分析方法。

肖英平[14]等建立了高效液相色譜-質(zhì)譜檢測原料乳中的氟喹諾酮類化合物殘留的檢測方法，該方法采集了120份原料乳，結(jié)果表明，19種氟喹諾酮類化合物殘留的的檢出限達(dá)到0.05～0.25ug/L，回收率在88.2%～109.2%。該方法分離效果好、準(zhǔn)確性高。楊朝琳[15]等建立了利用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法來分析測定雞蛋樣品中氟喹諾酮類化合物殘留的方法。該方法利用磷酸-乙腈提取、離心后，經(jīng)流動相分離，采用電噴霧離子源，多反應(yīng)監(jiān)測模式，進(jìn)行定量分析檢測。該方法對8種氟喹諾酮類化合物在濃度為2～50ug/kg之間，線性范圍良好，線性系數(shù)均大于0.9956，8種氟喹諾酮類4化合物殘留的檢出限達(dá)到0.0005 ～0.22ug/kg，回收率為65.4%～119.6%。該方法優(yōu)化了前處理程序，不使用固相萃取柱，并通過基質(zhì)加標(biāo)消除基質(zhì)效應(yīng)，具有經(jīng)濟(jì)可靠、靈敏性高等優(yōu)點(diǎn)。宋偉[16]等建立了利用超高效液相色譜-質(zhì)譜法測定雞肉中4種氟喹諾酮類化合物的檢測分析方法，該方法用乙腈提取，并輔助以高速冷凍離心，用流動相溶解后，再用乙腈飽和正己烷除脂，最后將樣品用超高效液相-質(zhì)譜聯(lián)用議進(jìn)行定量分析檢測。該方法結(jié)果表明，喹諾酮類化合物檢出限為0.1ug/kg，定量限達(dá)到0.5ug/kg，方法回收率為81.5%～97.6%，該方法簡便、準(zhǔn)確度高，可作為雞肉中4種氟喹諾酮類化合物的殘留檢測方法。曹惠[17]等建立了同位素稀釋-固相萃取-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法來檢測畜禽肉產(chǎn)品中四類獸藥殘留的方法，該方法以乙腈和0.1%甲酸水溶液為流動相，梯度洗脫，在電噴霧正離子多反應(yīng)監(jiān)測模式下，進(jìn)行定量分析測量。利用該方法測定的氟喹諾酮類化合物在在5～200ug/L濃度范圍內(nèi)，氟喹諾酮類化合物的線性相關(guān)系數(shù)均大于0.99，方法檢出限在0.5～2.0ug/kg，定量限在2.0～6.5ug/kg，該方法經(jīng)濟(jì)、高效、準(zhǔn)確度高，適用于檢測畜禽產(chǎn)品中氟喹諾酮類化合物的快速檢測和確證。

3 酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）

酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）是一種免疫測定方法，其是依靠抗原和抗體的特異性反應(yīng)，具有針對性強(qiáng)、高效、快捷、耗費(fèi)低等優(yōu)點(diǎn)，在獸藥殘留檢測方面應(yīng)用廣泛。李燕君[18]等建立了用酶聯(lián)免疫吸附法測定牛奶中6種氟喹諾酮類化合物的殘留檢測方法，該方法在 20℃～25℃下進(jìn)行，結(jié)果表明，本方法建立的酶聯(lián)免疫吸附法的最低檢測限達(dá)到1.48ug/L，50% 抑制濃度的范圍在 0.254～0.361ug/L； 方法回收率達(dá)到84.58%～115.92%，此方法高速靈敏、精密度高、準(zhǔn)確性好，適用于牛奶中氟喹諾酮類化合物的殘留檢測分析。李建鯤[19]等建立了用酶聯(lián)免疫吸附法測定了雞蛋中的氟喹諾酮類化合物的殘留檢測分析，結(jié)果表明，氟喹諾酮類化合物在 0～8.ng/g范圍內(nèi) ，線性關(guān)系良好，線性相關(guān)系數(shù) r 為 0.997 6，50%抑制濃度在0.306～0.351 ng/g，回收率達(dá)到90.0%～102.0%，最低檢測限達(dá)到 3.2 ng/g，用該方法檢測雞蛋中氟喹諾酮類藥物靈敏性強(qiáng)、精密度高，檢測結(jié)果可靠，適用于在雞蛋中檢測該類化合物。

4 分子印跡技術(shù)方法（MIT）

分子印跡技術(shù)（MIT） 指的是通過制備某種對目標(biāo)化合物具備高度選擇性的物質(zhì)，從而達(dá)到目標(biāo)化合物分離的目的，該方法能從復(fù)雜的基質(zhì)樣品中選擇性分離目標(biāo)化合物。由于氟喹諾酮類化合物大多具有氫鍵，易于形成分子印跡聚合物，因此分子印跡技術(shù)被廣泛用于測定畜禽產(chǎn)品中氟喹諾酮類化合物的測定方法。

呂運(yùn)開[20]等利用水相系統(tǒng)，制備出諾氟沙星印跡溶膠—凝膠材料，并采用高效液相色譜法檢測分析魚樣品中的氟喹諾酮化合物殘留，該方法分離效果好、準(zhǔn)確度高。結(jié)果表明，魚樣品中的氟喹諾酮類化合物回收率在88.46%～98.24%，回收率高。杜麗麗等利用加替沙星為模板，并結(jié)合分子印跡技術(shù)，制備出新型的印跡聚合物，該聚合物具有高度識別性，以此作為填充材料，利用液相色譜法，檢測牛奶樣品中氟喹諾酮類化合物。利用該方法檢測牛奶中的加替沙星，其回收率達(dá)到79.87%，具有潛在應(yīng)用價值。

本文論述了近幾年畜禽產(chǎn)品中氟喹諾酮類化合物殘留檢測技術(shù)的研究進(jìn)展，大多具有高選擇性、靈敏度強(qiáng)、準(zhǔn)確度高等優(yōu)點(diǎn)，但所需操作復(fù)雜、樣品前處理繁瑣等缺點(diǎn)，因此還需進(jìn)一步開發(fā)新型檢測氟喹諾酮類化合物的檢測方法，以檢測畜禽產(chǎn)品中殘留的氟喹諾酮類藥物。