陳 希，鄢雷娜，劉緒平，段和祥

（江西省藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院 國(guó)家藥品監(jiān)督管理局中成藥質(zhì)量評(píng)價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室江西省藥品與醫(yī)療器械質(zhì)量工程技術(shù)研究中心,江西 南昌 330029）

安妥沙星是通過(guò)對(duì)左氧氟沙星的分子結(jié)構(gòu)優(yōu)化，在左氧氟沙星的8 位引入-NH2獲得的，是我國(guó)擁有自主開(kāi)發(fā)的一類(lèi)新藥，屬于手性喹諾酮類(lèi)藥物[1,2]。結(jié)構(gòu)改造后的安妥沙星抗菌作用不但優(yōu)于氧氟沙星、環(huán)丙沙星，且氨基的引入能使安妥沙星有效降低光敏毒性，心臟毒性甚至低于莫西沙星，有較高的安全性[3-5]。安妥沙星為單一左旋體，與右旋安妥沙星是一對(duì)對(duì)映體，為了控制藥品質(zhì)量，有必要對(duì)鹽酸安妥沙星片中右旋安妥沙星進(jìn)行控制，但目前，關(guān)于左、右旋安妥沙星測(cè)定的論文較少，只有洪建文[6]等采用高效毛細(xì)管電泳法實(shí)現(xiàn)了左、右旋安妥沙星對(duì)映體的拆分，且左、右旋安妥沙星峰未達(dá)到基線分離，檢測(cè)精密度（RSD 大于2%）和檢出限均較低。

目前，手性喹諾酮藥物對(duì)映體的拆分多采用以硫酸銅-手性氨基酸為手性添加劑的方法，該方法用手性喹諾酮與手性氨基酸和Cu2+形成三元非對(duì)映體的配位化合物，在較短時(shí)間內(nèi)在C18色譜柱上實(shí)現(xiàn)對(duì)映體的拆分，已經(jīng)有文獻(xiàn)對(duì)莫西沙星、帕珠沙星、氧氟沙星、尤利沙星等手性喹諾酮藥物對(duì)映體進(jìn)行了拆分測(cè)定[7-12]。本文采用L-苯丙氨酸和CuSO4為手性添加劑實(shí)現(xiàn)了左、右旋安妥沙星的拆分，并對(duì)鹽酸安妥沙星片中右旋安妥沙星進(jìn)行了測(cè)定。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器

LC-6AD 型高效液相色譜儀，帶二極管陣列檢測(cè)器（日本島津公司）；METTLER MS205DU 電子天平。

1.2 試劑試藥

右旋安妥沙星對(duì)照品（批號(hào)：130466-201101，含量：90.0% 中國(guó)食品藥品檢定研究院）；左旋安妥沙星對(duì)照品（批號(hào)：130457-201101，含量：90.9% 中國(guó)食品藥品檢定研究院）；甲醇為色譜純，L-苯丙氨酸生化試劑，其余試劑均為分析純。鹽酸安妥沙星片（規(guī)格：0.1g，批號(hào)190117，平均片重0.181g 安徽環(huán)球藥業(yè)股份有限公司）。

1.3 色譜條件

流動(dòng)相 L-苯丙氨酸-硫酸銅溶液（8mmol·L-1的L-苯丙氨酸和4 mmol·L-1的CuSO4，用NaOH 溶液調(diào)節(jié)pH 值至3.5）-甲醇（80∶20），流速：1.0mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)：302nm，進(jìn)樣量：10μL，柱溫40℃，色譜柱為Welch Ultimate XB-C18（4.6mm×250mm，5μm）。

1.4 溶液的制備

精密稱(chēng)取左旋安妥沙星對(duì)照品和右旋安妥沙星對(duì)照品各約27mg，置于25mL 量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為左、右旋安妥沙星對(duì)照品儲(chǔ)備液（左、右旋安妥沙星各約1000μg·mL-1）。精密稱(chēng)取右旋安妥沙星對(duì)照品約11mg，置于100mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻（右旋安妥沙星約100μg·mL-1）。精密量取上述溶液5mL，置50mL 量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為右旋安妥沙星對(duì)照品溶液（含右旋安妥沙星約10μg·mL-1）。

取鹽酸安妥沙星片，研細(xì)，精密稱(chēng)取細(xì)粉約18mg，置10mL 量瓶中，加流動(dòng)相超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液（左旋安妥沙星約1000μg·mL-1）。

2 結(jié)果與討論

2.1 系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)

取對(duì)照品儲(chǔ)備液，按上文色譜條件測(cè)定，左、右旋安妥沙星峰保留時(shí)間分別為11.698 和14.827min，兩峰間的分離度為5.618，達(dá)到基線分離。

圖1 左、右旋安妥沙星對(duì)照品色譜圖Fig.1 Levorotatory antofloxacin and dextral antofloxacin reference chromatogram

2.2 線性范圍

取左、右旋安妥沙星對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，分別加流動(dòng)相稀釋成含左、右旋安妥沙星濃度分別約為500、200、100、50、20、10、2μg·mL-1的 標(biāo) 準(zhǔn) 系 列 溶液，分別按上述色譜條件測(cè)定。以左、右旋安妥沙星的濃度（x）為橫坐標(biāo)，左、右旋安妥沙星的峰面積為縱坐標(biāo)（y）進(jìn)行線性回歸。安妥沙星兩對(duì)映體濃度在約2～500μg·mL-1之間與相應(yīng)對(duì)映體峰面積呈良好線性關(guān)系。左旋安妥沙星回歸方程為y = 4.008×104x+6.723×103，R2=0.99991。左旋安妥沙星回歸方程為y = 4.036×104x+8.099×103，R2= 0.99994。

2.3 精密度

取左、右旋安妥沙星濃度約為500μg·mL-1的混合對(duì)照品溶液，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定。對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣6 針?lè)治觯?、右旋安妥沙星峰面積的RSD 為0.1%和0.2%，說(shuō)明本方法精密度良好。

2.4 重復(fù)性

按“1.4”中供試品制備方法，平行制備6 份供試品溶液。取6 份供試品溶液和右旋安妥沙星對(duì)照品溶液（右旋安妥沙星約10μg·mL-1），分別按上述色譜條件測(cè)定，供試品典型色譜圖詳見(jiàn)圖2。

圖2 供試品色譜圖Fig.2 Chromatograms of sample

按外標(biāo)法計(jì)算鹽酸安妥沙星片中右旋安妥沙星的量，結(jié)果為0.0633%、0.0618%、0.0627%、0.0607%、0.0601%、0.0615%，平均值為0.062%，RSD 為2.0%。《中國(guó)藥典》2020 年版中對(duì)待測(cè)成分含量約0.1%的重復(fù)性RSD 要求小于3%，本方法重復(fù)性RSD 為2.0%，說(shuō)明本方法重復(fù)性良好。

2.5 定量限與檢出限

取左、右旋安妥沙星濃度約為2μg·mL-1，用流動(dòng)相稀釋成含左、右旋安妥沙星濃度約1.0 和0.3μg·mL-1的溶液，分別按上述色譜條件測(cè)定，結(jié)果左、右旋安妥沙星峰信噪比均滿(mǎn)足10∶1 和3∶1。本方法左、右旋安妥沙星的檢出限和定量限分別為1.0μg·mL-1和0.3μg·mL-1。

2.6 準(zhǔn)確度

精密稱(chēng)取鹽酸安妥沙星片細(xì)粉約18mg（9 份），分別加右旋安妥沙星對(duì)照品溶液（含右旋安妥沙星約100μg·mL-1）0.5、1.0 和1.5mL（每個(gè)濃度平行制備3 份），加流動(dòng)相超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)后照上述色譜條件測(cè)定并計(jì)算回收率?；厥章蕿?8.96%～101.57%，平均回收率為100.0%，RSD 為0.9%，說(shuō)明本方法準(zhǔn)確度良好，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）Tab.1 Results of recovery tests（n＝9）

3 結(jié)論

本研究采用以L-苯丙氨酸和CuSO4為手性流動(dòng)相添加劑的流動(dòng)相，使用C18色譜柱實(shí)現(xiàn)了左、右旋安妥沙星的拆分，并對(duì)鹽酸安妥沙星片中右旋體含量進(jìn)行了測(cè)定。該測(cè)定方法前處理簡(jiǎn)便，適用于鹽酸安妥沙星片中右旋體的控制，且具有極佳的精密度、重復(fù)性和準(zhǔn)確度等特點(diǎn)，方法優(yōu)于高效毛細(xì)管電泳法。