林妍雪，秦艷麗，張繼明

復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院感染科，上海市傳染病與生物安全應(yīng)急響應(yīng)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，國家傳染病醫(yī)學(xué)中心，上海 200040

HDV是由意大利Rizzetto等［1］從重癥乙型肝炎患者肝組織標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)并于1977年首次報(bào)道。HDV RNA與HDAg結(jié)合為核衣殼，依賴HBsAg包膜進(jìn)行包裝從而進(jìn)出肝細(xì)胞建立感染，即HDV是HBV的衛(wèi)星病毒［2－3］。雖然HDV是迄今為止已知對人有感染性的最小病毒，基因組長度僅有1672～1697 bp［4］，但是能夠?qū)е伦顕?yán)重的病毒性肝炎。HDV感染主要有兩種形式，一種是患者首次同時(shí)暴露于HBV和HDV，稱為HBV/HDV聯(lián)合感染（co－infection），多數(shù)可自發(fā)康復(fù)，少數(shù)轉(zhuǎn)變?yōu)橹匕Y肝炎；另一種是在既往感染HBV的基礎(chǔ)上暴露于HDV，稱為重疊感染，其中70%～90%將發(fā)展為慢性HDV感染［5－6］。與HBV單一感染相比，合并HDV感染會(huì)加速肝臟炎癥進(jìn)展至肝硬化、肝癌及其他終末期肝?。?－9］，平均于5年內(nèi)進(jìn)展為肝硬化，10年內(nèi)進(jìn)展為肝細(xì)胞癌［10］。

由于各地區(qū)HDV感染的發(fā)病率、檢測率不一，檢測手段的靈敏度、特異度參差，不同研究對于丁型肝炎的流行率統(tǒng)計(jì)結(jié)果不盡相同。近年發(fā)表的幾篇大型Meta分析顯示，目前全球HDV感染者總數(shù)約為1200萬～6000萬，甚至可能達(dá)到7200萬，HDV流行率在總?cè)巳褐袨?.16%～0.8%，在HBsAg陽性人群中達(dá)到4.5%～13%［10－12］，顛覆了既往人們普遍認(rèn)為丁型肝炎發(fā)病率低的看法。

由于HDV的傳播依賴于HBV，關(guān)于丁型肝炎診治的意見多是在HBV相關(guān)指南中提出。2015年世界衛(wèi)生組織（WHO）慢性乙型肝炎指南提出HDV的活動(dòng)性感染應(yīng)該由高滴度的HDV抗體診斷，通過血清HDV RNA檢測來證實(shí)［13］。2015年亞太肝病學(xué)會(huì)（APASL）推薦通過HDV RNA、HDV抗原或抗HDV IgM檢測來確認(rèn)HDV活動(dòng)感染［14］。2017年歐洲肝病學(xué)會(huì)（EASL）推薦在所有慢性乙型肝炎患者中篩查各類血源傳播病毒［15］。2018年美國肝病學(xué)會(huì)（AASLD）建議對具有HDV感染風(fēng)險(xiǎn)的HBsAg陽性者進(jìn)行丁型肝炎檢測，包括HIV感染者、注射吸毒者、男男性行為者、來自HDV高流行地區(qū)的移民，以及HBV DNA低但轉(zhuǎn)氨酶高的患者；其推薦的篩查測試是HDV

抗體，測試結(jié)果為陽性的進(jìn)一步進(jìn)行HDV RNA檢測以診斷活動(dòng)性HDV感染［16］。目前不同指南對于丁型肝炎篩查對象及診斷方案的意見并不完全一致，不過檢測現(xiàn)狀顯然沒能達(dá)到上述任一指南的要求。本文就HDV RNA檢測的臨床意義及方法進(jìn)展進(jìn)行綜述，以期推動(dòng)丁型肝炎篩查的普及和檢測質(zhì)量的提高。

1 HDV RNA檢測的臨床意義

1.1 血液中檢出HDV RNA是丁型肝炎現(xiàn)癥感染的金標(biāo)準(zhǔn) 長期以來，對于HDV感染的評判常常是通過酶免疫法或放射免疫法來檢測HBV感染者血清中是否存在HDV抗體。這一方法操作簡便且成本低廉，但其不足也顯而易見：其一，在丁型肝炎感染早期，血HDV病毒載量迅速上升，而抗體卻遲遲不能檢出，HDV抗原雖在一段時(shí)間后可以測得，但不久就會(huì)同機(jī)體產(chǎn)生的抗體結(jié)合形成復(fù)合物，此時(shí)若依賴HDV抗原抗體檢測結(jié)果則有很大概率出現(xiàn)漏診［17－18］。其二，HDV IgG在HDV感染后長期存在，其陽性結(jié)果只能說明既往有過感染卻無法體現(xiàn)感染是否仍然持續(xù)。其三，現(xiàn)有的HDV抗體檢測試劑盒良莠不齊，靈敏度不盡如人意，上海一項(xiàng)研究［19］使用抗HDV－IgG商業(yè)試劑盒對225例轉(zhuǎn)氨酶升高的HBsAg陽性患者進(jìn)行血清抗體檢測，結(jié)果無一陽性，但對同一批樣本進(jìn)行HDV RNA檢測后發(fā)現(xiàn)陽性率達(dá)到4.9%。

肝組織中檢出HDAg及血中檢出HDV RNA都是HDV復(fù)制的直接證據(jù)，可作為丁型肝炎現(xiàn)癥感染的可靠依據(jù)［20］，然而HDAg與抗－HDV形成免疫復(fù)合物導(dǎo)致其不易檢出，靈敏度欠佳，且肝活檢有一定創(chuàng)傷性而難以常規(guī)開展。血HDV RNA檢測則因其兼具靈敏度和實(shí)用性而被公認(rèn)為診斷活動(dòng)性HDV感染的最佳指標(biāo)。在臨床實(shí)踐中，血清/血漿中HDV RNA不能檢出是診斷丁型肝炎治愈的必要條件。

1.2 HDV病毒血癥與丁型肝炎不良預(yù)后相關(guān) 在丁型肝炎抗體陽性人群中，檢出HDV RNA的患者有著更差的臨床結(jié)局。西班牙一項(xiàng)研究［9］對118例抗－HDV陽性患者中位隨訪8年后，起始測得HDV RNA陽性的患者更容易發(fā)展為肝硬化（31%vs 0，P＝0.002）和肝臟失代償（28%vs 3%，P＝0.019）。瑞典多家二級醫(yī)院合作開展的中位隨訪6.5年的觀察研究［21］發(fā)現(xiàn)，在337例HDV抗體陽性患者中，有HDV病毒血癥的患者肝臟不良事件的發(fā)生率為無HDV病毒血癥患者的3.8倍。意大利一項(xiàng)對299例HDV感染者長達(dá)28年的隨訪研究［7］中，HDV持續(xù)復(fù)制造成肝硬化和肝細(xì)胞癌的年發(fā)病率分別為4%和2.8%，是肝臟相關(guān)病死率的唯一預(yù)測指標(biāo)。Romeo等［22］發(fā)現(xiàn)對于就診時(shí)尚未發(fā)生肝硬化的丁型肝炎患者，其HDV病毒血癥水平越高，進(jìn)展為肝硬化和肝細(xì)胞癌的傾向就越大。而與HDV RNA持續(xù)陽性或一過性陰轉(zhuǎn)的患者相比，HDV RNA清除與更高的無事件生存率顯著相關(guān)［23］。

1.3 啟動(dòng)丁型肝炎治療有賴于HDV RNA精確定量 對于丁型肝炎患者，“早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療”有助于延緩甚至逆轉(zhuǎn)疾病進(jìn)展，從而改善預(yù)后。通過對HBsAg陽性的患者檢測HDV RNA，有助于及時(shí)識(shí)別丁型肝炎患者，確定其治療方案是單獨(dú)使用核苷（酸）類似物、還是單獨(dú)使用聚乙二醇干擾素（PEG－IFN）或者二者聯(lián)合治療［16］。目前推薦代償期慢性丁型肝炎患者的首選治療方案為PEG－IFN應(yīng)用至少48周；由于核苷（酸）類似物對HDV感染無效，因此不建議將其用于除肝硬化患者之外的HBV低復(fù)制的患者；而對于HBV DNA持續(xù)復(fù)制或水平升高的丁型肝炎患者，則應(yīng)考慮核苷（酸）類似物治療［15－16］。

更高的HDV RNA檢測靈敏度意味著更多丁型肝炎患者能夠被識(shí)別和救治。德國一項(xiàng)研究［24］使用RoboGene HDV RNA定量試劑盒（首款通過CE－IVD認(rèn)證的HDV RNA試劑盒）對以往HIDIT－Ⅱ臨床試驗(yàn)中收集的372個(gè)血液標(biāo)本重新進(jìn)行HDV RNA檢測，因最低檢出限由原來的930 IU/mL降低到了14 IU/mL，此前檢測為陰性的血液標(biāo)本中有1/3復(fù)測得到陽性結(jié)果［25］。

1.4 HDV RNA水平是監(jiān)測和預(yù)測抗HDV藥物療效的主要指標(biāo) Farci等［26］開展了用不同劑量IFNα－2a治療慢性丁型肝炎患者的隨機(jī)對照臨床試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)相比于低劑量IFN治療組和未治療組，高劑量IFN治療組患者血清HDV RNA滴度顯著持續(xù)下降，相對應(yīng)地，其停藥后的肝臟組織病理、臨床結(jié)局、生存率也有不同程度改善。Keskin等［27］發(fā)現(xiàn)PEG－IFN治療24周的HDV RNA水平是療程結(jié)束24周時(shí)病毒學(xué)應(yīng)答的獨(dú)立預(yù)測因素；HDV RNA下降幅度可以預(yù)測治療結(jié)局［28－29］。Yurdaydin等［30］對IFN治療后的丁型肝炎患者開展了中位時(shí)間為55個(gè)月的隨訪研究，產(chǎn)生持續(xù)病毒學(xué)應(yīng)答（停藥后HDV RNA持續(xù)陰性至少兩年）的患者與未產(chǎn)生持續(xù)性應(yīng)答的患者相比，出現(xiàn)并發(fā)癥和死于肝臟相關(guān)疾病的概率都明顯降低。Bulevirtide、lonafarnib等丁型肝炎治療新藥仍在審評中［31］，用藥前后對患者HDV水平進(jìn)行長期準(zhǔn)確定量使得在國際多中心臨床試驗(yàn)中評估HDV新療法的優(yōu)劣成為可能，也是制定丁型肝炎患者管理共識(shí)的必經(jīng)之路。目前各臨床試驗(yàn)中丁型肝炎治療目標(biāo)暫無統(tǒng)一意見，通常以停藥6個(gè)月以后無法檢測到血清HDV RNA或者療程結(jié)束時(shí)HDV RNA較基線下降≥2 log作為療效指標(biāo)［32］。

1.5 HDV RNA檢測是對HDV進(jìn)行基因分型的基礎(chǔ) HDV具有廣泛的遺傳多樣性，全基因組序列的變異程度可達(dá)40%，目前通過對已知毒株RNA序列進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析將其分為8種基因型（HDV－1～8），各基因型還可進(jìn)一步分為2～4種基因亞型［33－34］。通常，全基因組核苷酸序列相似度＞80%或基因組R0區(qū)域（889～1289）核苷酸序列相似度＞85%的兩個(gè)病毒株同屬一個(gè)基因型，全基因組核苷酸序列相似度＞90%（HDV－1＞84%）的兩個(gè)病毒株屬于同一個(gè)基因亞型［34］。不同HDV基因型和基因亞型的地域分布有所差異，亞洲主要分布有HDV－1、HDV－2和HDV－4［4，33－34］。

HDV基因型與丁型肝炎臨床病程及結(jié)局相關(guān)聯(lián)。Su等［35］研究表明，中位隨訪135個(gè)月后HDV－1型感染者相較于HDV－2型感染者有更低的臨床緩解率（15.2%vs 40.2%，P＝0.007）、更高的肝細(xì)胞癌發(fā)生率（32.6%vs 11.1%，P＝0.008）和病死率（45.7%vs 22.2%，P＝0.013）。HDV－4與HDV－2相似，較少造成嚴(yán)重臨床后果。HDV－3引起的急性感染是造成南美洲暴發(fā)性肝炎的主要因素［36］。在撒哈拉以南的非洲患者中，HDV－5比HDV－1更易致使肝臟纖維化［37］。HDV不同基因型和基因亞型致病性存在差異的原因尚未完全闡明，可能與RNA復(fù)制編輯及病毒組裝的效率相關(guān)［38－39］。

2 HDV RNA的檢測方法進(jìn)展

2.1 核酸印跡雜交 在PCR技術(shù)尚未發(fā)展的20世紀(jì)80年代，HDV RNA的檢測主要依賴核酸印跡雜交。其檢測流程是：抽提血清中的RNA，變性后直接轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素或尼龍膜，或通過變性瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行分離后轉(zhuǎn)移固定到膜上，用HDV RNA探針（放射性同位素標(biāo)記的HDV cDNA片段［40］或由體外轉(zhuǎn)錄HDV RNA［41］）雜交，洗膜后對其進(jìn)行顯影［42］。其優(yōu)點(diǎn)是可以半定量檢測HDV RNA，操作所需試劑儀器都易于取得，缺點(diǎn)則在于印跡雜交技術(shù)對于HDV RNA檢測的靈敏度有限［41］。

2.2 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT－PCR）技術(shù) 第1篇關(guān)于PCR技術(shù)的文獻(xiàn)［43］發(fā)表于1985年，其原理是在體外模擬遺傳物質(zhì)的天然復(fù)制，以微量的核酸模板擴(kuò)增得到大量的特定DNA片段。PCR面世不久就被應(yīng)用于HDV RNA的檢測［41］，擴(kuò)增產(chǎn)物可根據(jù)需要進(jìn)一步進(jìn)行核酸雜交或者測序，而隨著PCR技術(shù)不斷發(fā)展，HDV RNA檢測的靈敏度和特異度也在不斷提升。

常規(guī)反轉(zhuǎn)錄PCR：提取并純化待測患者血液中的RNA成分，將其反轉(zhuǎn)錄所得cDNA作為擴(kuò)增模板，選用一對HDV保守序列特異的引物，通過一定循環(huán)次數(shù)的變性、退火、延伸，獲得所需片段的拷貝。Madejón等［41］用RT－PCR產(chǎn)物進(jìn)行Southern印記雜交，發(fā)現(xiàn)常規(guī)PCR方法檢測HDV RNA比狹縫雜交要靈敏10 000倍。

反轉(zhuǎn)錄巢式PCR（RT－nested PCR）：針對HDV RNA序列設(shè)計(jì)內(nèi)外兩對引物，外引物用于血清cDNA的第一輪PCR，擴(kuò)增包含延伸側(cè)翼區(qū)域的片段，第二輪PCR以第一輪PCR產(chǎn)物為模板，由內(nèi)引物識(shí)別目標(biāo)區(qū)域繼續(xù)擴(kuò)增。巢式PCR能提高擴(kuò)增倍數(shù)同時(shí)減少非特異擴(kuò)增，從而更加靈敏且特異地檢測HDV RNA含量［44］。

實(shí)時(shí)反轉(zhuǎn)錄PCR（qRT－PCR）：qRT－PCR是指在PCR反應(yīng)中加入熒光物質(zhì)，通過在PCR過程中檢測熒光信號(hào)來實(shí)時(shí)判斷核酸擴(kuò)增情況，而后通過Ct值和標(biāo)準(zhǔn)曲線對模板進(jìn)行定量分析的方法。根據(jù)所用熒光物質(zhì)的不同，qPCR方法主要分為染料法和探針法。染料法是利用熒光染料游離時(shí)不發(fā)光而結(jié)合于雙鏈DNA小溝后發(fā)出熒光的特性，使得熒光信號(hào)強(qiáng)度隨著PCR雙鏈產(chǎn)物增加而成比增長，其優(yōu)點(diǎn)是成本較低，缺點(diǎn)在于非特異性產(chǎn)物和引物二聚體也可引起熒光信號(hào)，特異性不足［45］。探針法則是利用熒光共振能量轉(zhuǎn)移原理，探針上的報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)于PCR延伸階段分離從而產(chǎn)生熒光信號(hào)，當(dāng)探針設(shè)計(jì)良好時(shí)，此方法比染料法更為靈敏和特異，但成本也相對提高［46］。Yamashiro等［47］在2004年首次描述了應(yīng)用SYBR Green熒光染料對HDV RNA進(jìn)行RT－PCR定量方法，其對于合成HDV RNA片段的檢出限為1000拷貝/mL。Le等［48］在2005年描述了利用Taqman探針檢測HDV RNA的方法，對血清HDV RNA檢出限為100拷貝/mL。目前應(yīng)用于HDV RNA檢測的主流熒光方案是Taqman探針，其次為Fret探針、分子信標(biāo)以及SYBR Green染料［49］。

近些年HDV RNA實(shí)時(shí)反轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)的流程和細(xì)節(jié)設(shè)計(jì)得到了不同維度的優(yōu)化。一步法qRT－PCR使得cDNA合成與PCR擴(kuò)增在同一管中相繼完成，相比于分兩步進(jìn)行，簡化工作流程、節(jié)約時(shí)間的同時(shí)降低了污染可能性。UDG酶和dUTP的應(yīng)用有助于消除PCR殘留核酸污染，降低實(shí)驗(yàn)樣本的假陽性率。Wang等［50］針對HDV序列的兩處保守片段設(shè)計(jì)了雙靶標(biāo)引物和探針，任一片段檢測到陽性即判斷該樣本為HDV RNA陽性，理論上能夠減少由于病毒變異所致的檢測靈敏度下降，降低漏檢的發(fā)生。高溫變性后冷凍（95℃放置10 min后立即冷卻至80℃）的方法被證實(shí)可以更好地破壞HDV RNA的二級結(jié)構(gòu)，提高逆轉(zhuǎn)錄效率［51］。檢測增強(qiáng)劑（detection enhancer）被認(rèn)為可能有利于松弛二級結(jié)構(gòu)以及擴(kuò)增富含GC的核酸片段［18］。

反轉(zhuǎn)錄數(shù)字PCR（RT－dPCR）：數(shù)字PCR將待測樣品隨機(jī)分配到大量獨(dú)立的反應(yīng)單元中，每個(gè)反應(yīng)單元分別單獨(dú)進(jìn)行核酸擴(kuò)增后分析其熒光信號(hào)的有無，將判斷結(jié)果按照泊松分布的原理進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析從而得到靶分子的拷貝數(shù)及濃度。數(shù)字PCR可以實(shí)現(xiàn)對病毒核酸的絕對定量，其相對于qPCR靈敏度更高，具有耐受性好，標(biāo)本用量少等優(yōu)勢；但由于其系統(tǒng)復(fù)雜度增加且成本較高，目前尚未得到廣泛應(yīng)用。Olivero等［52］設(shè)計(jì)了使用ddPCR檢測HDV載量的方法，同時(shí)用qPCR與其進(jìn)行比較，結(jié)論是ddPCR方法檢測HDV RNA具有媲美qPCR的精度與重現(xiàn)性，同時(shí)其最低定量限為qPCR方法的1/5。目前應(yīng)用數(shù)字PCR對HDV RNA進(jìn)行檢測的文獻(xiàn)屈指可數(shù)，未來仍需更多的研究來對該方法的性能進(jìn)行評價(jià)。

2.3 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（loop－mediated isothermal amplification，LAMP） LAMP是由Notomi等［53］在1998年設(shè)計(jì)的一種等溫核酸擴(kuò)增技術(shù)，在60℃～65℃的穩(wěn)定溫度下依賴2～3對特異性引物和鏈置換DNA聚合酶，持續(xù)循環(huán)合成DNA。其優(yōu)勢為速度快、操作簡便、設(shè)備要求簡單、裸眼觀察濁度即可判讀結(jié)果；不足之處在于引物設(shè)計(jì)難度高且需要所有引物都與序列匹配才能擴(kuò)增，而HDV易于變異，一套引物可能只能滿足部分毒株的擴(kuò)增需要［54－55］。Wang等［54］開發(fā)了用于HDV－1檢測的RT－LAMP體系，認(rèn)為此方法靈敏度不亞于常規(guī)RT－qPCR。

3 HDV檢測的定量標(biāo)準(zhǔn)品選擇

目前絕大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室選擇qRT－PCR方法對HDV RNA進(jìn)行定量，選用的定量標(biāo)準(zhǔn)品主要包括質(zhì)粒、體外轉(zhuǎn)錄的RNA、自制患者血清標(biāo)準(zhǔn)品、裝甲R(shí)NA以及國際標(biāo)準(zhǔn)品。用含有HDV cDNA片段的質(zhì)粒作為標(biāo)準(zhǔn)品的主要優(yōu)點(diǎn)在于質(zhì)粒穩(wěn)定性佳，可重復(fù)性好，不足在于無法參與并監(jiān)控RNA提取及逆轉(zhuǎn)錄過程。體外轉(zhuǎn)錄的HDV RNA能夠參與核酸提取和逆轉(zhuǎn)錄，但因完全裸露而可能被環(huán)境中的核酸酶降解或受各類理化因素影響［47］，且亞基因組RNA與天然完整的HDV RNA的結(jié)構(gòu)并不一致，也不具備病毒包膜，從而無法真正模擬臨床樣本中HDV病毒顆粒的裂解變性過程［51］。Homs等［51］建立了具有完整HDV基因組序列的RNA作為標(biāo)準(zhǔn)品，經(jīng)過凍融仍保持穩(wěn)定，或許能夠在一定程度上模擬臨床樣本中HDV RNA的結(jié)構(gòu)和行為。自制患者血清標(biāo)準(zhǔn)品是從高HDV病毒載量的慢性丁型肝炎患者體內(nèi)獲得的，其最大優(yōu)勢在于能夠完整復(fù)刻真實(shí)樣本的檢測，不足之處則在于此類標(biāo)準(zhǔn)品中含有真實(shí)HDV顆粒而具有傳染性，可能面臨倫理問題，且無法大量供應(yīng)［56］。裝甲R(shí)NA是將目的RNA序列包裹到某種病毒外殼或其他蛋白外殼中構(gòu)建而成，具有可耐受核酸酶、穩(wěn)定性高、生物危險(xiǎn)性低的特點(diǎn)，同時(shí)也能參與核酸提取、逆轉(zhuǎn)錄、擴(kuò)增、檢測的全過程，從而更好地完成質(zhì)控，是較為理想的標(biāo)準(zhǔn)品選擇［57］。但目前似乎尚無文獻(xiàn)報(bào)道合成具有完整HDV基因組的裝甲R(shí)NA，可能是因其具有一定的技術(shù)難度。以上四類標(biāo)準(zhǔn)品的共同缺點(diǎn)在于各實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果不具有可比性，為推進(jìn)HDV RNA檢測結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)化，2013年WHO建立了第一批HDV RNA國際標(biāo)準(zhǔn)品［58］。該標(biāo)準(zhǔn)品是將患者血漿樣本中分離得到的HDV－1型毒株以人源陰性血漿稀釋后制成的凍干制劑。使用者自行將其用0.5 mL的無核酸酶水溶解后即可得到5.75×105IU/mL的標(biāo)準(zhǔn)血漿，該濃度是由多中心分別進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR協(xié)作定值。但因其獲取困難、價(jià)格昂貴，目前尚未得到全面普及。

4 小結(jié)與展望

長期以來，人們對HDV感染的臨床認(rèn)識(shí)普遍不足，加之缺乏標(biāo)準(zhǔn)而可及的檢測方案和試劑，導(dǎo)致HBsAg陽性人群中HDV檢測率嚴(yán)重低下，丁型肝炎診斷多有遺漏。臨床上廣泛用于治療慢乙型肝炎的核苷（酸）類似物對HDV感染并無改善作用［59］，丁型肝炎診斷不足無形之中帶來巨大疾病負(fù)擔(dān)。

目前國際上以RT－PCR為主流的HDV RNA檢測方案持續(xù)優(yōu)化，靈敏度、特異度都在不斷提高，高通量、自動(dòng)化更是大勢所趨?，F(xiàn)有的不少HDV RNA檢測方法對HDV－1反應(yīng)良好，對其他基因型的檢測能力卻相對低下，原因之一在于HDV RNA序列的異質(zhì)性對引物和探針的保守性提出了更高的要求，其次在于HDV序列易自身折疊形成復(fù)雜結(jié)構(gòu)從而影響反轉(zhuǎn)錄和擴(kuò)增的效率［49］。為了增加檢驗(yàn)的靈敏度，理想的引物和探針應(yīng)設(shè)計(jì)于高度保守的區(qū)域，同時(shí)要考慮到RNA二級結(jié)構(gòu)對反轉(zhuǎn)錄的影響。HDV國際標(biāo)準(zhǔn)品的出現(xiàn)使得對定量結(jié)果進(jìn)行校正成為可能，但目前只有HDV－1基因型，希望其未來可以繼續(xù)推出其他7種基因型HDV標(biāo)準(zhǔn)品，使得各方法對于血液HDV RNA含量的測定能力得以全面準(zhǔn)確評價(jià)。普及丁型肝炎感染知識(shí)，在HDV易感人群中全面開展血HDV RNA檢測，對推動(dòng)丁型肝炎早診早治，降低丁型肝炎疾病負(fù)擔(dān)具有重大意義。

利益沖突聲明：所有作者均聲明不存在利益沖突。

作者貢獻(xiàn)聲明：林妍雪負(fù)責(zé)查閱文獻(xiàn)和撰寫文章；秦艷麗負(fù)責(zé)修改文章；張繼明負(fù)責(zé)擬定寫作思路，指導(dǎo)撰寫文章并最后定稿。