陸永梅 羅朝亮 鄧日建

廣西壯族自治區(qū)藥用植物園，廣西 南寧 530023

清喉咽合劑由地黃、麥冬、玄參、連翹、黃芩等五味藥材組成，具有養(yǎng)陰清肺、利咽解毒的功效。用于陰虛燥熱、火毒內(nèi)蘊(yùn)所致的咽部腫痛、咽干少津、咽部白腐有苔膜、喉核腫大；局限性的咽白喉、輕度中毒型白喉、急性扁桃體炎、咽峽炎等[1]。該產(chǎn)品適用于陰虛肺燥引起的咽喉部的各種不適癥狀，治療效果很好，在市場中倍受歡迎。

經(jīng)查閱有關(guān)清喉咽合劑的文獻(xiàn)，有對其進(jìn)行改劑型研究的，如清喉咽含片、清喉咽顆粒等[2-6]，但大部分都是對其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究[7-10]，經(jīng)筆者查閱文獻(xiàn)未發(fā)現(xiàn)有關(guān)清喉咽合劑提取工藝進(jìn)行改進(jìn)的研究，在《中華人民共和國藥典》一部的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的提取工藝采用滲漉和水提法，但該方法的缺點(diǎn)是提取時(shí)間很長，長時(shí)間占用了生產(chǎn)的設(shè)備，所以為縮短生產(chǎn)的時(shí)間和減少生產(chǎn)設(shè)備的使用時(shí)間，提高生產(chǎn)效率，進(jìn)而節(jié)約成本，將采用回流提取法對清喉咽合劑進(jìn)行提取，本試驗(yàn)通過正交試驗(yàn)對乙醇量、回流時(shí)間、乙醇濃度、回流次數(shù)等四個(gè)因素進(jìn)行提取工藝優(yōu)化研究，并與原工藝進(jìn)行對比，同時(shí)以該處方中黃芩藥材的主要成分黃芩苷為考核指標(biāo)，結(jié)果新工藝優(yōu)于原工藝，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與材料

1.1 儀器 VARIAN210高效液相色譜儀(美國瓦里安公司)、檢測器：UV檢測器、電子分析天平(賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司) 、超聲波清洗器( 上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司，型號：SK5200H,功率200W) 、循環(huán)水真空泵( 鞏義市予華儀器有限公司) 、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、干燥箱(上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠)、超純水機(jī)(Millipore S.A.S.)。

1.2 原料和對照品 藥材飲片原料：地黃(批號：20211201，產(chǎn)地：河南)；麥冬(批號：20210901，產(chǎn)地：四川)；玄參(批號：20210401，產(chǎn)地：浙江)；連翹(批號：20211201，產(chǎn)地：山西)；黃芩(批號：20210801，產(chǎn)地：河北)。以上藥材飲片均購于廣西德潤堂中藥科技有限公司，經(jīng)廣西藥用植物園副主任藥師鄧日建鑒定符合《中華人民共和國藥典》2020版一部的相關(guān)規(guī)定。對照品和試劑：黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品(中國食品藥品檢定研究院，批號：110715-201821)，甲醇為色譜純，檢測用水為超純水，磷酸為色譜純。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 檢測方法

2.1.1 對照品溶液的制備 取黃芩苷對照品適量，精密稱定，加甲醇超聲處理使溶解制成每1 mL含0.2 mg的溶液，即得。

2.1.2 供試品溶液的制備 取樣品1 g，精密稱定，置50 mL量瓶中，加甲醇適量，超聲處理(功率 200 W，頻率59kHz)20 min，取出；放冷，加甲醇至刻度，搖勻，精密量取 10 mL，置 25 mL 量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻；濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.1.3 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙腈-0.2%磷酸溶液(28∶72)為流動(dòng)相;檢測波長為 278 nm。理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于5000。

2.1.4 測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定，即得。

2.2 清喉咽合劑提取工藝單因素試驗(yàn)方法考察

2.2.1 清喉咽合劑回流提取工藝流程 取地黃、麥冬、玄參、連翹和黃芩五味藥材，粉碎成粗粉，加入乙醇，回流提取兩次，合并兩次提取液，減壓回收乙醇，定容到規(guī)定的體積。

2.2.2 加醇量對黃芩苷含量的影響 稱取地黃18 g、麥冬16 g、玄參26 g、連翹31.5 g、黃芩31.5 g各五份，分別混合粉碎成粗粉，各加60%的乙醇為10 BV、12 BV、14 BV、16 BV、20 BV，分別按以上的回流提取流程進(jìn)行操作，回流時(shí)間為2 h，回流兩次，合并兩次濾液，減壓回收乙醇，濃縮到適量，用熱水定容到100 mL，稱重，備用。

2.2.3 回流時(shí)間對黃芩苷含量的影響 稱取地黃18 g、麥冬16 g、玄參26 g、連翹31.5 g、黃芩31.5 g各五份，分別混合粉碎成粗粉，各加60%的乙醇為12 BV，分別按以上的回流提取流程進(jìn)行操作，回流時(shí)間分別為0.5 h、1.5 h、2 h、2.5 h、3 h，回流兩次，合并兩次濾液，減壓回收乙醇，濃縮到適量，用熱水定容到100 mL，稱重，備用。

2.2.4 乙醇濃度對黃芩苷含量的影響 稱取地黃18 g、麥冬16 g、玄參26 g、連翹31.5 g、黃芩31.5 g各五份，分別混合粉碎成粗粉，各加40%、50%、60%、70%、80%的乙醇為12 BV，分別按以上的回流提取流程進(jìn)行操作，回流時(shí)間分別為2 h，回流兩次，合并兩次濾液，減壓回收乙醇，濃縮到適量，用熱水定容到100 mL，稱重，備用。

2.2.5 回流次數(shù)對黃芩苷含量的影響 稱取地黃18 g、麥冬16 g、玄參26 g、連翹31.5 g、黃芩31.5 g各五份，分別混合粉碎成粗粉，各加60%的乙醇為12BV，分別按以上的回流提取流程進(jìn)行操作，回流時(shí)間為2 h，分別按1次、2次、3次、4次、5次減壓回收乙醇，濃縮到適量，用熱水定容到100 mL，稱重，備用。

2.3 清喉咽合劑提取工藝正交試驗(yàn) 以黃芩苷為考察指標(biāo)，按以上的清喉咽合劑的回流提取方法進(jìn)行提取試驗(yàn)，分別對加醇量(A)、回流時(shí)間(B)、乙醇濃度(C)、回流次數(shù)(D)這4個(gè)因素進(jìn)行分別考察，根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果，每因素選取3個(gè)水平，按L9(34)進(jìn)行正交試驗(yàn)。因素水平見表1。

表1 正交試驗(yàn)因素水平表

3 試驗(yàn)結(jié)果

3.1 單因素試驗(yàn)結(jié)果

3.1.1 加醇量對黃芩苷含量的影響試驗(yàn)結(jié)果 按以上的加醇量樣品進(jìn)行取樣，按相應(yīng)的測定方法測定不同的加醇量對清喉咽合劑黃芩苷含量。如圖1所示。

由圖1可知，隨著乙醇量的增加，黃芩苷含量增高，當(dāng)加的乙醇量達(dá)到12 BV時(shí)，提高緩慢，依據(jù)考察指標(biāo)，加乙醇量12 BV為最佳選擇，含量能達(dá)到理想要求，從而降低生產(chǎn)成本。

3.1.2 回流時(shí)間對黃芩苷含量的影響試驗(yàn)結(jié)果 取以上相應(yīng)的備用樣品，按以上測定方法測定不同的回流時(shí)間對黃芩苷含量的影響。如圖2所示。

由圖2可知，隨著回流時(shí)間的增大，黃芩苷的含量隨著增加，當(dāng)回流時(shí)間達(dá)到2 h后增幅變小，黃芩苷含量達(dá)到比較高的值，再增加回流時(shí)間含量增加不大，因此回流時(shí)間選擇2 h為宜。

圖1 加醇量對清喉咽合劑中黃芩苷含量的影響圖 圖2 回流時(shí)間對清喉咽合劑中黃芩苷含量的影響圖

3.1.3 乙醇濃度對黃芩苷含量的影響試驗(yàn)結(jié)果 按該試驗(yàn)項(xiàng)下樣品，照測定方法測定不同的乙醇濃度對清喉咽合劑中的黃芩苷含量影響。如圖3所示。

從圖3分析可知，隨著所加入乙醇的濃度的增大，所提取得到的黃芩苷含量增加，當(dāng)達(dá)到60%后基本達(dá)到高峰；再增加濃度對黃芩苷的含量的增幅不明顯，所以應(yīng)考慮60%為最佳提取濃度。

3.1.4 回流次數(shù)對黃芩苷含量的影響試驗(yàn)結(jié)果 按該試驗(yàn)項(xiàng)下樣品，照測定方法測定不同的回流次數(shù)對清喉咽合劑中的黃芩苷含量影響。如圖4所示。

從圖4數(shù)據(jù)分析可知，隨著回流次數(shù)的增大，所提取得到的黃芩苷含量增加，當(dāng)達(dá)到2次后基本達(dá)到最高；再增加回流次數(shù)對黃芩苷的含量的增幅不明顯，所以應(yīng)考慮2次為最佳提取回流次數(shù)。

圖3 乙醇濃度對清喉咽合劑中黃芩苷含量的影響圖 圖4 回流次數(shù)對清喉咽合劑中黃芩苷含量的影響圖

3.2 正交試驗(yàn)結(jié)果與分析 按照以上的操作流程，通過檢測結(jié)果，以黃芩苷含量為數(shù)值指標(biāo)，通過極差R和均值K進(jìn)行分析比較，優(yōu)化清喉咽合劑的提取工藝的參數(shù)。結(jié)果見表2。

表2 正交試驗(yàn)表

從表2分析可知，以黃芩苷的含量為指標(biāo)考核，其極差最大的是乙醇量(A)，可以看出提取工藝的主要影響因素是乙醇量(A)，其余因素影響次序?yàn)镃>B>D，以黃芩苷的均值分析可知，最佳的提取工藝為A1B3C2D2，即最佳提取工藝為乙醇量為12BV，回流時(shí)間為2 h，乙醇濃度為60%，回流次數(shù)為2次，這樣的提取黃芩苷的含量最佳。

3.3 清喉咽合劑HPLC色譜圖 如圖5所示。

A：黃芩苷對照品；B：供試品；C：黃芩苷陰性對照品圖5 清喉咽合劑HPLC色譜圖

4 驗(yàn)證試驗(yàn)

稱取地黃18 g，麥冬16 g，玄參26 g，連翹31.5 g，黃芩31.5 g各三份，分別混合粉碎成粗粉，各加60%的乙醇為12 BV，分別按以上的回流提取流程進(jìn)行操作，回流時(shí)間為2 h，回流兩次，合并兩次濾液，減壓回收乙醇，濃縮到適量，用熱水定容到100 mL，稱重，備用。結(jié)果見表3。

表3 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

從上表可知，RSD為1.0%，說明黃芩苷含量穩(wěn)定，工藝科學(xué)、穩(wěn)定、合理。

5 小結(jié)與討論

本試驗(yàn)為對現(xiàn)有產(chǎn)品的標(biāo)準(zhǔn)工藝進(jìn)行研究試驗(yàn)，是由于原有產(chǎn)品的標(biāo)準(zhǔn)工藝中的提取方法耗時(shí)和設(shè)備占用率高，因而生產(chǎn)效率低，成本高，本試驗(yàn)是在原標(biāo)準(zhǔn)的處方工藝不變的前提下所做的研究試驗(yàn)，因此通過本試驗(yàn)歸結(jié)如下幾點(diǎn)：①本試驗(yàn)所做的含量測定是測定了相應(yīng)的物料的水份后折算的含量；②本試驗(yàn)最后得到的工藝乙醇濃度于原標(biāo)準(zhǔn)的濃度基本一致，說明新舊標(biāo)準(zhǔn)的吻合性；③ 對產(chǎn)品的處方?jīng)]有改變，保證產(chǎn)品的一致性；④原標(biāo)準(zhǔn)工藝的生產(chǎn)周期為5～6d，用現(xiàn)本試驗(yàn)的提取工藝只需1d的時(shí)間，生產(chǎn)周期可以大大縮短；⑤研究的新工藝可以減少生產(chǎn)設(shè)備的占用時(shí)間，提高生產(chǎn)效率，節(jié)約生產(chǎn)成本；⑥經(jīng)與原提取工藝對比了檢測的高效液相色譜圖與本研究的高效液相色譜圖完全一致，說明所提取的成份沒有改變，而得的含量于本試驗(yàn)所得含量相符；⑦本研究具有創(chuàng)新性。

因此，本研究試驗(yàn)可以為未來的產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)的改進(jìn)提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，從而提高產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為實(shí)際生產(chǎn)提供真實(shí)的參考依據(jù)。