張 敏，羅 寧，陳愛昌，李煥宇，劉永剛，李惠霞 ，石明明，韓 變

(1.甘肅省農(nóng)作物病蟲害生物防治工程實(shí)驗(yàn)室，甘肅 蘭州 730070；2.定西市植保植檢站，甘肅 定西 743000；3.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 植物保護(hù)學(xué)院，甘肅 蘭州 730070；4.甘肅省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 植物保護(hù)研究所，甘肅 蘭州 730070)

芹菜(Apium graveolensL.)為傘形科(Umbelliferae)芹屬(Apium)植物，在中國種植歷史悠久、種植范圍廣泛，是一種藥食同源的植物。由于其富含蛋白質(zhì)、B 族維生素、胡蘿卜素和碳水化合物等[1]，在臨床應(yīng)用和保健類食品開發(fā)方面有廣闊的應(yīng)用前景[2]。芹菜是甘肅外銷的主要高原夏菜種類之一，種植面積逐年擴(kuò)大。2020 年，定西市芹菜種植面積達(dá)1.5 萬hm2，每667 m2產(chǎn)量達(dá)7～9 t，經(jīng)濟(jì)效益顯著[3]。

根腐病在苗期可導(dǎo)致芹菜大面積死苗，在生長期造成根部腐爛死亡。在內(nèi)蒙古，芹菜根腐病一般種植田發(fā)病輕時(shí)造成20%～30%的產(chǎn)量損失，發(fā)病重時(shí)損失可達(dá)60%～80%，甚至絕收[4]。芹菜根腐由多種病原菌引起[5]，不同地區(qū)病原種類和優(yōu)勢致病菌均有差異，其主要病原之一的鐮孢菌(Fusariumspp.)是一種世界性分布的真菌，可侵染瓜果、蔬菜[6]、中藥[7]、糧食作物[8]和牧草[9]等多種植物，引起根腐、莖基腐和花穗腐等多種病害。鐮孢菌有多種?；停煌瑢；鸵鸬陌Y狀也不盡相同，在培養(yǎng)過程中存在多型性和易變性，是真菌界最難準(zhǔn)確鑒定的病原菌之一[10]。

甘肅省定西市作為中國高原夏菜主產(chǎn)地之一，芹菜根腐病一般田塊發(fā)病率為10%～30%，嚴(yán)重地塊高達(dá)90%以上，可造成不同程度的產(chǎn)量損失，重度田塊甚至絕收[11]。近年來，隨著市場需求量增加，芹菜種植面積不斷擴(kuò)大，連作現(xiàn)象普遍發(fā)生，導(dǎo)致芹菜根腐病愈加嚴(yán)重。目前，關(guān)于甘肅省芹菜根腐病研究較少，引起芹菜根腐病發(fā)生的病原菌種類尚不清楚。為明確該地區(qū)芹菜根腐病病原種類，本研究對(duì)定西市芹菜根腐病進(jìn)行調(diào)查，鑒定病原菌種類，以明確防治靶標(biāo)，為該地區(qū)芹菜根腐病的有效防控提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

供試材料：2020—2021 年，在甘肅省定西市安定區(qū)和隴西縣采集芹菜根腐病樣；致病性測定的供試芹菜品種為凱爾文，由甘肅省定西市植保植檢站提供。

供試培養(yǎng)基：馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)、水瓊脂培養(yǎng)基(WA)和康乃馨葉片水瓊脂培養(yǎng)基(CLA)。PDA 由馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、瓊脂15 g 和蒸餾水1 L 制備而成；WA 由瓊脂15 g 和蒸餾水1 L 制備而成；CLA 的制備：先加入10～15 片滅菌的康乃馨葉片(3～4 mm2)，再加入瓊脂15 g 和蒸餾水1 L。

供試試劑：植物基因組DNA 提取試劑盒、瓊脂糖、Marker、ddH2O、PCR mastermix、無水乙醇、葡萄糖、核酸染料和瓊脂粉均購自北京擎科生物技術(shù)有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 芹菜根腐病發(fā)生情況調(diào)查

2021 年4—8 月，于定西市安定區(qū)鳳翔鎮(zhèn)、內(nèi)官鎮(zhèn)、符川鎮(zhèn)、團(tuán)結(jié)鎮(zhèn)、巉口鎮(zhèn)、魯家溝鎮(zhèn)和西鞏驛鎮(zhèn)以及隴西縣馬河鎮(zhèn)共8 個(gè)鎮(zhèn)的芹菜種植地進(jìn)行隨機(jī)取樣，統(tǒng)計(jì)病田率和病株率，采集病樣，帶回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行分離鑒定。

1.2.2 芹菜根腐病病原菌的分離純化

采用組織分離法[12]分離芹菜根腐病病原物。從根部和莖基部病健交界處剪取長約0.5 cm 的根，用75%乙醇浸泡30 s，無菌水沖洗3 次后在滅菌濾紙上吸干，置于PDA 平板上，于(25±1) ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；3～4 d 后，將病樣組織上長出的菌絲轉(zhuǎn)接到另一個(gè)PDA 平板上。采用改良的單孢分離法[13]純化病原菌。將孢子懸浮液稀釋后，用無菌針頭轉(zhuǎn)移至WA 培養(yǎng)基上，置于(25±1) ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；12 h 后，用無菌針頭將萌發(fā)孢子挑出，進(jìn)一步純化培養(yǎng)；7 d 后，將病原菌轉(zhuǎn)至1.8 mL 凍存管，存放于4 ℃冰箱，備用。

1.2.3 芹菜根腐病病原菌的形態(tài)學(xué)鑒定

將純化后的病原菌接種于PDA 培養(yǎng)基上，置于(25±1) ℃下暗培養(yǎng)。培養(yǎng)4 d 時(shí)測量菌落直徑；7 d 后觀察其在PDA 培養(yǎng)基上的菌絲形狀和色素產(chǎn)生情況等特征，并拍照記錄。將純化的菌株接種至CLA 培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)產(chǎn)生分生孢子，15 d 后于顯微鏡下觀察分生孢子形態(tài)。參考LESLIE 等[14]和王拱辰等[15]的方法進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定。

1.2.4 芹菜根腐病病原菌的分子生物學(xué)鑒定

(1) 病原菌DNA 提取

采用植物真菌基因組DNA 試劑盒提取病原菌DNA，試驗(yàn)步驟參照試劑盒說明書。根據(jù)形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果，每種菌選取3 株代表菌株活化培養(yǎng)，7 d 后提取菌株DNA，提取的DNA 模板于-20 ℃保存，備用。

(2) PCR 引物的選擇

利用rDNA-ITS 序列引物ITS1 和ITS4 以及翻譯延長因子TEF-1α 序列引物EF-1H 和EF-2T(表1)進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，引物委托擎科生物技術(shù)有限公司(西安)合成。

表1 芹菜根腐病鑒定所用引物序列Tab.1 Primer sequence for identification of celery root rot

(3) 目的基因的擴(kuò)增及系統(tǒng)發(fā)育分析

擴(kuò)增體系25 μL，包括：PCRTaqMix 13 μL，ddH2O 6 μL，上、下游引物各2 μL，DNA 2 μL。擴(kuò)增條件：94 ℃預(yù)變性3 min；94 ℃變性30 s，52 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，共35 個(gè)循環(huán)；72 ℃延伸10 min，4 ℃保存。以ddH2O 為陰性對(duì)照，擴(kuò)增產(chǎn)物在1.0%瓊脂糖凝膠上電泳30 min，于凝膠成像系統(tǒng)中確認(rèn)目的片段后，將PCR 產(chǎn)物送至擎科生物技術(shù)有限公司(西安)進(jìn)行基因測序。測序結(jié)果在NCBI GenBank (https://blast.ncbi.nlm.nih.gov)數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行同源性檢索，下載與目標(biāo)序列相似度99%以上的序列，使用BioEdit 7.0.5 進(jìn)行比對(duì)分析，使用MEGA 6.06 構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。

1.2.5 病原菌致病性的測定

于2021 年7 月，在智能人工氣候箱內(nèi)進(jìn)行致病性測定，試驗(yàn)采用根部刺傷接種法接種。于PDA 培養(yǎng)7 d 后，加無菌水洗脫孢子，制成孢子密度為1×106mL-1的懸浮液[16]；待芹菜長至4～5 葉時(shí)，用無菌針頭刺傷芹菜主根，每株芹菜注入孢子懸浮液10 mL，以等量無菌水作為對(duì)照，2 周后觀察發(fā)病情況。分離發(fā)病植株病原物，提取病原菌DNA，擴(kuò)增后測序進(jìn)行鑒定。

1.3 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel 2007 與SPSS 19.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，應(yīng)用Duncan 氏新復(fù)極差法進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 芹菜根腐病田間癥狀及發(fā)病情況

2.1.1 田間癥狀

根腐病致使芹菜長勢不良(圖1a)，達(dá)不到商用標(biāo)準(zhǔn)；或?qū)е赂扛癄€，植株大面積死亡，引起田間缺苗斷壟(圖1b)。調(diào)查發(fā)現(xiàn)芹菜根腐病有2 種癥狀：(1) 植株莖基部出現(xiàn)褐色水漬狀病斑，莖基部縊縮，病斑由外向內(nèi)侵入維管束(圖1c)；(2) 發(fā)病始于根尖，病斑自下而上延伸，整個(gè)主根腐爛壞死，病原菌繼續(xù)向上侵染新葉與莖稈，直至死亡；或芹菜主根部分腐爛，未腐爛處增生大量須根，但長勢較矮小或下部葉片偏黃，部分芹菜出現(xiàn)維管束變色、空心(圖1d～f)。

圖1 定西市芹菜根腐病田間癥狀Fig.1 Field symptoms of celery root rot in Dingxi City

2.1.2 發(fā)病情況

共調(diào)查139 個(gè)芹菜種植地，除隴西縣馬河鎮(zhèn)隴海線旁1 個(gè)田塊未發(fā)病外，其余調(diào)查地塊均有根腐病發(fā)生，平均病田率為63.54%，但各地發(fā)病率存在差異。由表2 可知：田塊病株率在0%～67.50%之間，平均每個(gè)地塊病株率為24.45%。馬河鎮(zhèn)化家川的病株率最高，為67.50%，發(fā)病最普遍；西鞏驛南河僅次于馬河鎮(zhèn)化家川，病株率為48.75%；內(nèi)官鎮(zhèn)萬崖村與團(tuán)結(jié)鎮(zhèn)馬家寺村的病株率最低。

表2 定西市芹菜產(chǎn)區(qū)根腐病發(fā)生情況調(diào)查Tab.2 Investigation of root rot disease in celery of Dingxi City %

2.2 芹菜根腐病真菌的分離和形態(tài)觀察

經(jīng)組織分離和純化，從定西市芹菜主要種植區(qū)采集的病樣中獲得78 株鐮孢菌(Fusariumspp.)菌株。根據(jù)菌落形態(tài)、菌絲生長狀態(tài)、色素顏色和孢子形態(tài)，將78 株鐮孢菌初步分為19 組，每組類型選取1 株代表菌株，用于形態(tài)學(xué)與分子生物學(xué)鑒定。

2.2.1 芹菜根腐病原菌形態(tài)學(xué)鑒定

代表菌株C33 的形態(tài)特征見圖2。菌株在PDA 上培養(yǎng)時(shí)易發(fā)生突變，部分菌株不產(chǎn)生氣生菌絲，產(chǎn)生“濕”狀菌絲體，中心呈淺紫色，邊緣白色。培養(yǎng)4 d 后，菌落直徑為45.00～48.00 mm，背面中間為淺紫色、邊緣為白色，基物不變色，氣生菌絲呈棉絮狀，顏色為淡紫色到白色。大分生孢子數(shù)量少，月牙形稍彎，多數(shù)3 隔，向兩端逐漸均勻變尖，大小為11.18～27.60 μm×3.83～3.96 μm；小分生孢子數(shù)量多，圓形或卵圓形，假頭狀著生在分生孢子梗上，大小為6.14～10.42 μm×2.35～3.58 μm；厚垣孢子易產(chǎn)生，單生對(duì)生或串生，球形，一般位于氣生菌絲末端或中間。依據(jù)上述形態(tài)特征，將編號(hào)為C33、B4、B16、C8、C16、C29、B1 和D4 的菌株歸為一種，初步鑒定為尖孢鐮孢菌(F.oxysporum)。

圖2 尖孢鐮孢菌培養(yǎng)性狀與形態(tài)特征Fig.2 Culture and morphological characteristics of Fusarium oxysporum

代表菌株A11 的形態(tài)特征見圖3。在PDA平板上培養(yǎng)4 d 后，菌落直徑為43.50～56.50 mm，分布均勻，菌絲茂密且致密，氣生菌絲白色棉絮狀，菌落背面白色，基物不變色。菌絲光滑有隔膜、分枝，大分生孢子為無色鐮刀型、較寬、粗壯、直或彎曲，0～4 隔膜，多數(shù)3 個(gè)隔膜。頂端細(xì)胞鈍圓形，有的基胞有足跟，有的幾乎圓柱形。大分生孢子通過分生孢子座產(chǎn)生，大小為24.93～35.56 μm×3.72～4.63 μm，單瓶梗產(chǎn)孢；小分生孢子卵圓形、橢圓形或腎形，有隔或無隔，大小為6.45～9.34 μm×2.42～3.56 μm；厚垣孢子單生或串生，多在菌絲中間或短的側(cè)枝上形成，無色，壁厚。依據(jù)上述形態(tài)特征，將編號(hào)為A11、D16、D17 和A7 的菌株歸為一種，初步鑒定為茄病鐮孢菌(F.solani)。

圖3 茄病鐮孢菌培養(yǎng)性狀與形態(tài)特征Fig.3 Culture and morphological characteristics of F.solani

代表菌株D8 的形態(tài)特征見圖4。在PDA 上培養(yǎng)4 d 后，菌落直徑為29.50～30.00 mm，初期菌落邊緣白色，氣生菌絲棉絮狀桃紅色，生長后期菌落從中間開始變黃，菌落中間有明顯的黃色同心輪紋，從菌落邊緣到中間桃紅色逐漸加深。PDA 上未觀察到大分生孢子，CLA 上大分生孢子彎曲呈紡錘狀，頂胞漸細(xì)，基胞足跟明顯，1～4個(gè)隔膜，大小為12.43～19.85 μm×2.62～4.33 μm，單瓶梗產(chǎn)孢；小分生孢子橢圓形或卵圓形，0～1個(gè)隔膜，大小為8.09～14.03 μm×2.23～ 3.11 μm，厚垣孢子球形單生、對(duì)生或串生。依據(jù)上述形態(tài)特征，將標(biāo)號(hào)為A1、A2、A5、A6、A9、A12 和D8 的菌株歸為一種，初步鑒定為銳頂鐮孢菌(F.acuminatum)。

圖4 銳頂鐮孢菌培養(yǎng)性狀與形態(tài)特征Fig.4 Culture and morphological characteristics of F.acuminatum

2.2.2 芹菜根腐病原菌代表菌株的分子生物學(xué)鑒定

(1) rDNA-ITS 序列分析

采用通用引物ITS1/ITS4 擴(kuò)增后，獲得大小約為700 bp 的片段，經(jīng)NCBI 比對(duì)和MEGA 系統(tǒng)發(fā)育樹(圖5)分析可知：19 個(gè)株菌聚為3 類。第I 類包括菌株B1、B4、B16、C8、C16、C29、C33和D4，與尖孢鐮孢菌的遺傳距離為0，置信度為99%，與形態(tài)鑒定結(jié)果一致，將其鑒定為尖孢鐮孢菌；第II 類包括菌株A7、A11、D17 和D16，該類與茄病鐮孢菌遺傳距離為0，置信度為99%，與形態(tài)鑒定結(jié)果一致，將其鑒定為茄病鐮孢菌；第III 類包括菌株A1、A2、A5、A6、A9、A12和D8，該類與銳頂鐮孢菌遺傳距離為0，置信度為99%，與形態(tài)鑒定結(jié)果一致，將其鑒定銳頂鐮孢菌。

圖5 基于rDNA-ITS 序列構(gòu)建3 種病原菌與相關(guān)菌株的系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.5 Phylogenetic tree of three pathogens and other related strains based on the rDNA-ITS sequence

(2) EF-1α 序列分析

基于EF-1α 序列的系統(tǒng)發(fā)育樹(圖6)與rDNAITS 序列分析結(jié)果相似，將病原菌聚為3 類，第1 類包括菌株C8、C16、C29 和C33 等，這些代表菌株與尖孢鐮孢菌聚為1 個(gè)分支，與形態(tài)鑒定結(jié)果一致，將其鑒定為尖孢鐮孢菌；第2 類包括菌株D8、A2、A6 和A9 等，與銳頂鐮孢菌聚在一起，與初步形態(tài)鑒定結(jié)果相符，將其鑒定為銳頂鐮孢菌；第3 類包括菌株D16、D17 和A11等，該類與茄病鐮孢菌聚為1 個(gè)分支，與形態(tài)鑒定結(jié)果一致，將其鑒定為茄病鐮孢菌。

圖6 基于EF-1α 序列構(gòu)建3 種病原菌與相關(guān)菌株的系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.6 Phylogenetic tree of three pathogens and other related strains based on the EF-1α sequence

結(jié)合形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)鑒定，分離純化得到的78 株鐮孢菌中，有尖孢鐮孢菌62 株、銳頂鐮孢菌11 株和茄病鐮孢菌5 株，分離頻率分別為79.49%、14.10%和6.41%。

2.3 芹菜根腐病分離物的致病性測定

分別將尖孢鐮孢菌、銳頂鐮孢菌和茄病鐮孢菌3 種病原菌代表菌株接種至健康芹菜植株上，7 d后尖孢鐮孢菌最先從莖基部發(fā)病，其他菌株14 d后才出現(xiàn)病癥。從發(fā)病植株部位分離到病原菌，純化培養(yǎng)后，經(jīng)形態(tài)鑒定與分子鑒定確定該病原菌與接種病原菌一致，表明這3 種菌均為定西市田間芹菜根腐病致病菌。

尖孢鐮孢菌致病性最強(qiáng)，發(fā)病情況最嚴(yán)重，發(fā)病率為91.66%，病情指數(shù)為78.33；茄病鐮孢菌發(fā)病率為77.78%，病情指數(shù)為24.44，癥狀表現(xiàn)為莖基部腐爛或主根下部腐爛，植株萎蔫；銳頂鐮孢菌發(fā)病率為22.22%，病情指數(shù)為11.11，多表現(xiàn)為莖基部維管束中間出現(xiàn)病斑，植株矮小，須根增多。尖孢鐮孢菌在田間能引起芹菜根與莖基部腐爛，盆栽中芹菜也出現(xiàn)該癥狀，植株枯死，盆栽試驗(yàn)與大田癥狀相符；銳頂鐮孢菌在田間引起芹菜根部腐爛，盆栽試驗(yàn)與田間癥狀相比發(fā)病較輕；茄病鐮孢菌在田間能引起根與芹菜莖基部發(fā)病，盆栽試驗(yàn)發(fā)病與田間癥狀相符(圖7)。試驗(yàn)結(jié)果表明：尖孢鐮孢菌致病性最強(qiáng)，是甘肅省定西市芹菜種植地優(yōu)勢病原菌。

圖7 3 種鐮孢菌對(duì)芹菜幼苗的致病性測定Fig.7 Pathogenicity test of three kinds of Fusarium spp.on celery seedling

3 討論

鐮孢菌類根腐病是一類重要的真菌性病害，可危害馬鈴薯[17]、苜蓿[9]、青稞[18]、缸豆[19]、棉花[20]和芹菜[5]等作物。由鐮孢菌引起的根腐病在芹菜苗期與生長期均可發(fā)生，是全周期型病害。本研究利用形態(tài)學(xué)方法與分子生物學(xué)方法，將引起甘肅省定西市芹菜根腐病的病原菌鑒定為尖孢鐮孢菌、茄病鐮孢菌和銳頂鐮孢菌，明確了甘肅省芹菜根腐病病原種類，并首次發(fā)現(xiàn)銳頂鐮孢菌能引起芹菜根腐病。尖孢鐮孢菌從莖基部、根和莖基部維管束分離得到，茄病鐮孢菌主要分離自莖基部和根，銳頂鐮孢菌在根、莖基部與莖稈處均可分離到。尖孢鐮孢菌分離頻率最高，盆栽試驗(yàn)發(fā)病也最嚴(yán)重，表明尖孢鐮孢菌是定西市芹菜根腐病的優(yōu)勢病原。

不同地區(qū)芹菜根腐病原菌有差異。王玲娜[21]報(bào)道內(nèi)蒙古芹菜根腐致病菌包括接骨木鐮孢菌(F.sambucinum)、鏈格孢(Alternaria alternata)、尖孢鐮刀萎蔫專化型(F.oxysporumf.sp.Vasinfectum)、芬芳鐮孢菌(F.redolen)、黃瓜萎蔫病菌(Plectosphaerella cucumerina)和尖孢鐮孢菌(F.oxysporum)；扈順等[4]在內(nèi)蒙古商都的西芹根腐病樣分離出茄病鐮孢菌(F.solani)；郝永娟等[22]發(fā)現(xiàn)天津芹菜的主要致病菌為茄病鐮孢菌；石延霞等[23]和晉知文[24]調(diào)查發(fā)現(xiàn)：北京地區(qū)芹菜根腐病主要病原是茄病鐮孢菌、側(cè)雄腐霉菌(Pythium paroecandrum)、核盤菌(Sclerotinia sclerotiorum)、胡蘿卜軟腐果膠桿菌(Pectobacterium carotovorum)；王國榮等[25]報(bào)道引起浙江省芹菜莖基腐病的病原菌為尖孢鐮刀菌。各地病原菌的差異可能與作物品種和種植環(huán)境有關(guān)。

鐮孢菌的形態(tài)復(fù)雜，在生長過程中形態(tài)變異較大，形態(tài)鑒定很難準(zhǔn)確地將其鑒定到種[26]。研究發(fā)現(xiàn)：ITS、mtSSU、β 微管蛋白和TEF-1α 能準(zhǔn)確鑒定鐮孢菌[19]。ITS被廣泛運(yùn)用于真菌鑒定，但對(duì)于鐮孢菌親緣關(guān)系較近的種或復(fù)合種，ITS 單一基因片段區(qū)分度不高，很難準(zhǔn)確鑒定，因此，需挖掘更多的基因片段或多基因聯(lián)合才能準(zhǔn)確地鑒定[26]。TEF-1α基因因其位點(diǎn)核苷酸的替換率高，對(duì)親緣關(guān)系較近的鐮孢菌有較高分辨力，常作為鐮孢菌屬真菌鑒定的有效方法[27]，如：張祥麗等[28]通過ITS 與TEF-1α基因鑒定出鐵皮石斛鐮刀菌根腐病病原菌為變紅—木賊鐮刀菌復(fù)合種群(F.incarnatum-equisetispecies complex)；李雪萍等[10]利用TEF-1α基因鑒定青稞根腐病病菌為尖孢鐮孢菌、木賊鐮孢菌(F.equiseti)與銳頂鐮孢菌。本研究在形態(tài)學(xué)觀察的基礎(chǔ)上，通過分子生物學(xué)手段選擇特異基因片段ITS 與TEF-1α序列對(duì)芹菜根腐病病原菌進(jìn)行鑒定，結(jié)果更加準(zhǔn)確、可靠。

從莖基部發(fā)病的芹菜植株在短時(shí)間內(nèi)死亡；從主根發(fā)病的芹菜，植株須根化嚴(yán)重，芹菜勉強(qiáng)生長，須根少的植株遇高溫后出現(xiàn)萎蔫，發(fā)病后期新長出的須根也會(huì)腐爛，最終導(dǎo)致芹菜心葉和莖稈發(fā)病。須根化嚴(yán)重的芹菜沒有主根或主根腐爛，推測是芹菜須根充當(dāng)主根為芹菜提供營養(yǎng)物質(zhì)，這可能是一種補(bǔ)償作用[29]。同一病株可分離出多種病原菌，說明田間存在多種病原復(fù)合侵染的現(xiàn)象。王家和等[30]發(fā)現(xiàn)：3 種鐮刀菌混合接種可加重蠶豆枯萎?。灰μ烀鞯萚31]證實(shí)尖孢鐮刀菌及歐文氏桿菌復(fù)合侵染可引起半夏腐爛；張德珍等[32]研究表明：鐮孢菌與多種病原菌復(fù)合侵染共同導(dǎo)致小麥根腐病。由此推測，芹菜根腐病田間可能存在復(fù)合侵染，從而加重發(fā)病，對(duì)于復(fù)合侵染病菌的種類和侵染程度還需進(jìn)一步開展研究。

4 結(jié)論

定西市芹菜根腐病病田率為63.54%、病株率為24.45%，田間發(fā)病有2 種癥狀，分別是芹菜主根腐爛和莖基部縊縮腐爛。分離純化得到78 株鐮孢菌，其中尖孢鐮孢菌 (F.oxysporum)、銳頂鐮孢菌(F.acuminatum)和茄病鐮孢菌(F.solani)的分離頻率分別為79.49%、14.10%和6.41%。尖孢鐮孢菌的致病性最強(qiáng)，是定西市芹菜根腐病的優(yōu)勢病原菌，銳頂鐮孢菌引起芹菜根腐病為國內(nèi)首次報(bào)道。