王 華，李 鵬

（1.伊犁職業(yè)技術(shù)學(xué)院，新疆伊寧 835000；2.先正達(dá)（中國）投資有限公司，北京 100005）

蘋果黑星病菌［Venturia inaequalis(Cooke)Winter］是引起蘋果黑星病的病原真菌，該病菌在蘋果生長季節(jié)里能連續(xù)不斷地產(chǎn)生大量分生孢子，反復(fù)侵染寄主。蘋果樹一旦被蘋果黑星病菌感染，發(fā)病迅猛，蔓延快速。目前，蘋果黑星病的防治主要依賴于化學(xué)藥劑，隨著殺菌劑的持續(xù)施用，在很多地區(qū)已發(fā)現(xiàn)蘋果黑星病菌對腈菌唑和苯醚甲環(huán)唑產(chǎn)生了不同程度的抗藥性[1-3]，導(dǎo)致殺菌效果減弱。

蘋果黑星病發(fā)生范圍較廣，在我國黑龍江、吉林、內(nèi)蒙古、遼寧、河南、河北、甘肅、寧夏、山東、山西、陜西、新疆、四川、云南等地都有分布，尤其在部分地區(qū)發(fā)生嚴(yán)重，已影響到蘋果產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展[4-5]。為尋找防治蘋果黑星病更加有效的殺菌劑，本研究篩選了7種殺菌劑，并測定了其對蘋果黑星病菌的室內(nèi)毒力，以期為田間防治蘋果黑星病藥劑的選擇和輪換提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試菌株：新疆伊犁地區(qū)蘋果黑星病菌代表性菌株。

供試藥劑：10%苯醚甲環(huán)唑WG，天津市華宇農(nóng)藥有限公司；50%啶酰菌胺WG，巴斯夫有限公司；50%嘧菌環(huán)胺WG、20%氟唑菌酰羥胺SC，先正達(dá)作物保護(hù)有限公司；80%嘧霉胺WG，煙臺科達(dá)化工有限公司；20%吡噻菌胺SC，日本三井化學(xué)AGRO株式會社；25%吡唑醚菌酯SC，江西海闊利斯生物科技有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

采用菌絲生長速率法測定各藥劑對病原菌生長的抑制情況。將稀釋后的藥劑與熔化后的PDA培養(yǎng)基以1∶9的體積比混合均勻，制成含藥平板。每種藥劑設(shè)置5個(gè)濃度梯度，每個(gè)濃度設(shè)置3個(gè)重復(fù)，用加入相同體積無菌水的PDA培養(yǎng)基作為對照。藥劑有效質(zhì)量濃度見表1。

表1 供試殺菌劑質(zhì)量濃度梯度

將蘋果黑星病菌培養(yǎng)20 d后，用5 mm滅菌打孔器打取若干菌餅，供毒力測定使用。將菌餅移接至含藥培養(yǎng)基及對照培養(yǎng)基中央，在18℃，光照1 200 lx，12 h黑暗，12 h光照的條件下培養(yǎng)15 d后，用十字交叉法測量菌落直徑并拍照。

1.3 數(shù)據(jù)分析

按式（1）計(jì)算菌絲生長抑制率。使用SPSS19.0軟件基于Probit回歸法[6]對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行毒力回歸方程分析，得到半數(shù)有效濃度（EC50）。

2 結(jié)果與分析

2.1 7種殺菌劑對蘋果黑星病菌的抑制效果

試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)7種供試殺菌劑對蘋果黑星病菌菌絲均有一定的抑制作用，14.280 μg/mL 10%苯醚甲環(huán)唑WG、333.300 μg/mL 50%啶酰菌胺WG、500.00 μg/mL 50%嘧菌環(huán)胺WG、53.330～533.300 μg/mL 80%嘧霉胺WG、6.666×10-3～6.666×10-2μL/mL 20%吡噻菌胺SC、1.923×10-2～1.923×10-1μL/mL 25%吡唑醚菌酯SC、4.00～40.00 μL/mL 20%氟唑菌酰羥胺SC對蘋果黑星病菌的菌絲抑制率都可達(dá)到100.00%。藥劑20%吡噻菌胺SC和25%吡唑醚菌酯SC在有效質(zhì)量濃度較低時(shí)具有很高的菌絲抑制率；10%苯醚甲環(huán)唑WG、50%啶酰菌胺WG、25%吡唑醚菌酯SC、20%氟唑菌酰羥胺SC也表現(xiàn)出較好的抑制率，而菌絲抑制率最差的是50%嘧菌環(huán)胺WG。

表2 不同殺菌劑對蘋果黑星病菌的抑制效果

2.2 7種殺菌劑對蘋果黑星病菌室內(nèi)毒力

從表3可知，R2值均大于0.70，說明毒力回歸方程與觀測值擬合程度較好。7種供試殺菌劑中，對蘋果黑星病菌菌絲的EC50值從小到大依次是20%氟唑菌酰羥胺SC、25%吡唑醚菌酯SC、20%吡噻菌胺SC、10%苯醚甲環(huán)唑WG、50%啶酰菌胺WG、80%嘧霉胺WG和50%嘧菌環(huán)胺WG。毒力最好的是20%氟唑菌酰羥胺SC，EC50值為1.349 9×10-5μL/mL；其次為25%吡唑醚菌酯SC，EC50值為2.967 6×10-5μg/mL；最差是50%嘧菌環(huán)胺WG，EC50值為4.316 2 μg/mL。

表3 7種殺菌劑對蘋果黑星病菌室內(nèi)毒力測定結(jié)果

3 結(jié)論與討論

目前，世界各地蘋果產(chǎn)區(qū)蘋果黑星病菌種群對苯醚甲環(huán)唑和腈菌唑已經(jīng)具有了耐藥性和抗藥性[1-3]，蘋果黑星病菌的抗性突變體能改變氧化酶、呼吸作用等，使黑星病菌對嘧菌酯由敏感變成抗藥。也有研究表明，蘋果黑星病菌的抗藥性同DMI類殺菌劑的施用次數(shù)呈線性正相關(guān)。本研究選用7種殺菌劑對蘋果黑星病菌進(jìn)行毒力測定。結(jié)果表明，7種殺菌劑在不同濃度下對蘋果黑星病菌均有不同程度的抑制作用。EC50值從小到大依次是20%氟唑菌酰羥胺SC、25%吡唑醚菌酯SC、20%吡噻菌胺SC、10%苯醚甲環(huán)唑WG、50%啶酰菌胺WG、80%嘧霉胺WG和50%嘧菌環(huán)胺WG。抑菌效果最好的是20%氟唑菌酰羥胺SC，其次是25%吡唑醚菌酯SC，其中20%氟唑菌酰羥胺SC、25%吡唑醚菌酯SC和20%吡噻菌胺SC 3種殺菌劑的抑菌效果都優(yōu)于生產(chǎn)上常用的10%苯醚甲環(huán)唑WG。本研究結(jié)果與郭健等[9]的研究一致：氟唑菌酰羥胺和吡唑醚菌酯對蘋果黑星病菌分生孢子萌發(fā)具有較好抑制作用。因此，上述藥劑可進(jìn)行田間試驗(yàn)以進(jìn)一步明確防治效果。