陳文杰，車春花，李 軍，沈東華，徐新曄

（溧陽(yáng)中南化工有限公司，江蘇溧陽(yáng) 213300）

萎銹靈是一種具有內(nèi)吸作用的雜環(huán)類殺菌劑，主要用于防治高粱絲黑穗病等禾谷類黑穗病，也可防治小麥穗病、棉草病害、粟白發(fā)病等[1]；苯醚甲環(huán)唑是三唑類殺菌劑，是甾醇脫甲基化抑制劑，具有廣譜內(nèi)吸性，廣泛應(yīng)用于果樹、蔬菜等作物，有效防治黑星病、黑痘病、白腐病、斑點(diǎn)落葉病、白粉病、褐斑病、銹病、條銹病、赤霉病等[2-3]。

目前，國(guó)內(nèi)有關(guān)萎銹靈和苯醚甲環(huán)唑有效成分分析方法報(bào)道有許多[4-6]。但目前同時(shí)檢測(cè)苯醚甲環(huán)唑·萎銹靈復(fù)配制劑的分析方法尚未見公開報(bào)道。本研究采用反向液相色譜法對(duì)2種有效成分同時(shí)進(jìn)行測(cè)定，具有快速、準(zhǔn)確、靈敏度高、重復(fù)性好的特點(diǎn)，適用于苯醚甲環(huán)唑和萎銹靈產(chǎn)品質(zhì)量的檢測(cè)分析。

1 材料與方法

1.1 儀器設(shè)備

LC-20A高效液相色譜儀配有紫外檢測(cè)器，日本島津公司；XB-C18色譜柱［250 mm×4.6 mm（i.d），5 μm］，月旭科技（上海）股份有限公司；LabSolutions色譜工作站，日本島津公司；電子天平AL204，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；超聲波清洗器KH2200，昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司；有機(jī)針式過濾器0.45 μm，上海安普實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司。

1.2 試劑

苯醚甲環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)品（純度98.9%）、萎銹靈標(biāo)準(zhǔn)品（純度98.0%），沈陽(yáng)化工研究院；乙腈（色譜純），永華化學(xué)科技（江蘇）有限公司；純凈水，娃哈哈集團(tuán)；冰醋酸（分析純），國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.3 溶液配制

1.3.1 標(biāo)樣溶液的配制

苯醚甲環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)品母液配制：稱取0.04 g（精確至0.000 2 g）苯醚甲環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)品于50 mL容量瓶中，加20 mL乙腈超聲溶解，冷卻到室溫后用乙腈稀釋至刻度，搖勻待用。

混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：稱取0.04 g（精確至0.000 2 g）萎銹靈標(biāo)準(zhǔn)品于100 mL容量瓶中，用移液管移取5.0 mL苯醚甲環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)品母液于容量瓶中，加20 mL乙腈超聲溶解，冷卻到室溫后用乙腈稀釋至刻度，搖勻待用。

1.3.2 試樣溶液的配制

稱取含萎銹靈0.04 g（精確至0.000 2 g）的樣品于100 mL容量瓶中，加20 mL乙腈超聲溶解，冷卻到室溫后用乙腈稀釋至刻度，搖勻過膜待用。

1.4 色譜分析條件

流動(dòng)相：乙腈-水-冰醋酸（80∶19.5∶0.5，V/V/V），經(jīng)濾膜過濾，并進(jìn)行脫氣；柱溫：（30±2）℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：230 nm；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣體積：5 L。在上述色譜條件下，萎銹靈和苯醚甲環(huán)唑保留時(shí)間分別約為4.4和5.3 min（見圖1、圖2）。

圖1 萎銹靈和苯醚甲環(huán)唑混合標(biāo)樣高效液相色譜圖

圖2 33%苯醚甲環(huán)唑·萎銹靈懸浮種衣劑試樣高效液相色譜圖

1.5 測(cè)定

在1.4所述的色譜操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，直到相鄰2針的相對(duì)響應(yīng)值變化小于1.5%，按下列順序進(jìn)行測(cè)定：混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，試樣溶液，試樣溶液，混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.6 計(jì)算

取2針平行試樣溶液和試樣峰面積的平均值，按式（1）計(jì)算試樣中2種有效成分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)w。

式中：A1、A2分別表示標(biāo)樣、試樣峰面積平均值，mAU·min；m1表示萎銹靈（苯醚甲環(huán)唑）標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量，g；m2為萎銹靈（苯醚甲環(huán)唑）試樣質(zhì)量，g；P為萎銹靈（苯醚甲環(huán)唑）標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的選擇

綜合考慮萎銹靈和苯醚甲環(huán)唑紫外光譜吸收值大小，及萎銹靈與苯醚甲環(huán)唑含量比值（10/1），選取檢測(cè)波長(zhǎng)230 nm。該波長(zhǎng)下靈敏度較高，雜質(zhì)干擾少，能滿足分析要求。

方法選擇C18這類常用色譜柱，使用不同比例的乙腈-水，并用醋酸調(diào)節(jié)流動(dòng)相的pH，最后確定三者比例乙腈-水-醋酸為80∶19.5∶0.5（V/V/V）最合適，該條件下分析時(shí)間短和分離效果好。

2.2 方法線性相關(guān)性分析

配制5個(gè)不同濃度梯度的萎銹靈、苯醚甲環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)溶液，按1.4所述的色譜條件進(jìn)樣分析，每個(gè)濃度分析2次，求其平均值。以萎銹靈（苯醚甲環(huán)唑）峰面積（y）為縱坐標(biāo)，以萎銹靈（苯醚甲環(huán)唑）的質(zhì)量濃度（x）為橫坐標(biāo)作圖，得到萎銹靈（苯醚甲環(huán)唑）的線性方程，數(shù)據(jù)結(jié)果見表1和表2。萎銹靈線性回歸方程：y=14 184x＋40 650，R2=0.999 7；苯醚甲環(huán)唑線性回歸方程：y=37 909x-949.1，R2=0.999 7。二者的R2值均大于0.999，可見本文方法在萎銹靈和苯醚甲環(huán)唑的所測(cè)濃度范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

表1 萎銹靈線性關(guān)系

表2 苯醚甲環(huán)唑線性關(guān)系

2.3 方法的精密度分析

任取一批33%苯醚甲環(huán)唑·萎銹懸浮種衣劑試樣，按本研究中的方法連續(xù)測(cè)定萎銹靈和苯醚甲環(huán)唑含量，分別計(jì)算平均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差、變異系數(shù)、精密度，結(jié)果見表3。萎銹靈和苯醚甲環(huán)唑的標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.101 1%和0.024 1%，變異系數(shù)分別為0.334%和0.758%。則該方法的重現(xiàn)性好，精密度高。

表3 方法的精密度試驗(yàn)

2.4 方法的準(zhǔn)確度試驗(yàn)

在空白試樣中添加不等量的苯醚甲環(huán)唑、萎銹靈標(biāo)樣，配成不同含量的試樣，測(cè)定回收率，見表4。苯醚甲環(huán)唑和萎銹靈回收率分別在99.6%～101.1%和99.3%～101.7%之內(nèi)，滿足NY/T 2887—2016《農(nóng)藥產(chǎn)品質(zhì)量分析方法確認(rèn)指南》[7]對(duì)定量分析中回收率的要求。

表4 方法準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié) 論

本研究建立了高效液相色譜快速測(cè)定33%苯醚甲環(huán)唑·萎銹靈懸浮種衣劑的分析方法。試驗(yàn)結(jié)果表明，該方法操作簡(jiǎn)便、快速，線性關(guān)系良好、準(zhǔn)確度和精密度高，是工業(yè)化大生產(chǎn)對(duì)萎銹靈和苯醚甲唑產(chǎn)品質(zhì)量控制的實(shí)用方法。