蔣洪久，李朝云，黃億，黃旋，王蕾，唐平華

（仁懷醬香白酒科研所，564500，貴州仁懷）

紫丁香蘑（Lepista nuda）又名紫晶蘑、裸口蘑，在真菌分類地位屬于擔(dān)子菌亞門、層菌綱、傘菌目、白蘑科、香蘑屬。紫丁香蘑的傘肉鮮嫩甜美，有彈性，菇香濃郁，口感獨特，子實體中含有人體必需的氨基酸、礦質(zhì)元素及維生素，經(jīng)常食用具有增強機(jī)體免疫力、抗炎抑菌、抗癌、抗氧化等多種功效[1]。紫丁香蘑作為中低溫型藥食皆用的名貴野生真菌，具有較高的研究開發(fā)價值，但是目前為止主要來源為野外采集，其天然資源有限，且質(zhì)量不能保證，在國內(nèi)市場上極缺，市場潛力大，產(chǎn)業(yè)化前景好。不少研究者成功培養(yǎng)了紫丁香蘑液體菌種、栽培種，但是在生產(chǎn)中很少出菇或不出菇，種植技術(shù)難度大，經(jīng)濟(jì)效益低，無法進(jìn)行產(chǎn)業(yè)化推廣。

筆者在貴州省仁懷市當(dāng)?shù)夭杉吧隙∠隳⑦M(jìn)行形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)種屬鑒定，分離得到純培養(yǎng)菌株，采用液體和固體菌種相結(jié)合的方法來制備紫丁香蘑栽培種，利用高粱秸稈、牛糞為主料來種植紫丁香蘑，既解決了農(nóng)村高粱秸稈的出路問題和牛糞污染環(huán)境的問題，提高了種植業(yè)、畜牧業(yè)副產(chǎn)品的附加值，又建立了一套快速而有效的紫丁香蘑栽培技術(shù)，為紫丁香蘑的人工馴化栽培提供參考。

1 材料與方法

1.1 母種培養(yǎng)及鑒定

采集當(dāng)?shù)匾吧迈r紫丁香蘑子實體，采用組織分離法提取無菌子實體放在PDA 培養(yǎng)基上，于25 ℃下培養(yǎng)大約10 d 獲得母種，于4～6 ℃冰箱中保存?zhèn)溆?。ITS 序列分析采用引物ITS1（上游引物）：5′→3′TCCGTAGGTGAACCTGCGG；ITS4（下游引物）：5′ →3′TCCTCCGCTTATTGATATGC 。送生工生物工程（上海）有限公司進(jìn)行測序鑒定[2]。

1.2 液體菌種培養(yǎng)

挑取3～5 塊長勢好的母種放入裝有200 mL 加富PDA 液體培養(yǎng)基的錐形瓶中。加富PDA 液體培養(yǎng)基配方：馬鈴薯300 g，酵母粉2 g，豆胨1 g，葡萄糖15 g，硫酸鎂0.3 g，磷酸二氫鉀0.5 g，加水定容至1 000 mL 。pH 值為7.0。在恒溫?fù)u床溫度25 ℃、轉(zhuǎn)速150 r/min 條件下培養(yǎng)[3-4]。

1.3 栽培種制備

選用650 mL 組培瓶，內(nèi)置大半瓶小麥固體培養(yǎng)基。小麥培養(yǎng)基配方（質(zhì)量）：小麥98%，碳酸鈣1%，石膏1%。吸取8～12 mL 液體菌種轉(zhuǎn)接到高溫滅菌后的小麥固體培養(yǎng)基，小麥培養(yǎng)基充分搖勻，在溫度25 ℃的黑暗環(huán)境下培養(yǎng)。

1.4 出菇管理

栽培料按以下質(zhì)量百分比堆積發(fā)酵制成：高粱秸稈50%～60%，牛糞35%～50%，過磷酸鈣0.5%～1.5%，碳酸氫銨0.5%～1.5%，石膏0.5%～2%，石灰0.5%～1.5%。栽培場地要求畦寬1 m，高10 cm，畦間距40 cm，畦上鋪料8～12 cm。將紫丁香蘑栽培種撒播在栽培料表層，菌種使用量0.5 kg/m2，播種后料面蓋上地膜保溫保濕發(fā)菌，菌絲基本長滿栽培料表層時即可蓋土，保持適宜的濕度、溫度、光照培育出菇。

1.5 營養(yǎng)成分指標(biāo)

選取新鮮紫丁香蘑子實體烘干打磨后留樣備用。蛋白質(zhì)檢測采用GB5009.5—2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中蛋白質(zhì)的測定》，粗多糖檢測采用NY/T1676—2008《食用菌中粗多糖含量的測定》，氨基酸檢測采用GB5009.124—2016 《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中氨基酸的測定》，粗脂肪檢測采用GB5009.6—2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中脂肪的測定》。[5]

2 結(jié)果與分析

2.1 母種培養(yǎng)及鑒定結(jié)果

采集紫丁香蘑菌蓋未開散的子實體，在子實體表面擦拭少量75%酒精消毒后，掰開挑取小塊無菌子實體在PDA 培養(yǎng)基上25 ℃下培養(yǎng)10 d 左右，即菌絲長滿平板，呈淡紫色，輻射狀生長，形成大量氣生菌絲。通過ITS 序列測定，其ITS 序列長度594 bp，將獲得的紫丁香蘑ITS 序列與NCBI 的GenBank 數(shù)據(jù)庫進(jìn)行BLAST 檢索比對，ITS 序列與基因庫中的L.nuda txid64659 菌株的序列相似性高達(dá)99.66%，結(jié)合形態(tài)學(xué)和分子鑒定，將分離得到的菌株鑒定為紫丁香蘑。

2.2 液體菌種培養(yǎng)結(jié)果

紫丁香蘑母種在加富PDA 液體培養(yǎng)基恒溫?fù)u床溫度25℃、轉(zhuǎn)速150 r/min 條件下，2～3 d 小塊母種上長滿菌絲，4～5 d 開始逐漸增多小菌絲球，培養(yǎng)8～10 d出現(xiàn)大量菌絲球，11 d 過后菌絲球逐漸變紫，菌絲開始老化。選用8～10 d 指數(shù)生長期的液體菌種接種到栽培培養(yǎng)基上最佳。

2.3 栽培種制備結(jié)果

吸取8～12 mL 液體菌種接種到小麥固體培養(yǎng)基，在溫度25 ℃下培養(yǎng)5～7 d，待表層培養(yǎng)基大部分長滿菌絲開始搖瓶，使長有菌絲的小麥顆粒充分混勻在整個培養(yǎng)瓶中，菌絲繼續(xù)培養(yǎng)10 d 左右，菌絲滿瓶即可使用。

2.4 出菇結(jié)果

紫丁香蘑小麥栽培種撒播在栽培料上2～5 d，菌絲開始萌發(fā)并開始吃料，12～15 d 菌絲基本長滿基料表層即可蓋土，大棚土粒要進(jìn)行消毒處理，以避免受到雜菌污染。覆土后保持溫度在15～27 ℃為宜，促進(jìn)菌絲生長。超過30 ℃菌絲會老化、死亡，在栽培中要避開高溫[6];溫度低于10 ℃菌絲生長顯著減慢。筆者在10 月中旬基料表層長滿菌絲蓋土后，在低海拔500 多m 的蔬菜大棚試驗地，11 月中旬紫丁香蘑開始出菇，平均鮮菇產(chǎn)量在1.75 kg/m2;但在高海拔900 多m 的蔬菜大棚試驗地，12 月上旬紫丁香蘑才出菇:可見適宜的溫度對于紫丁香蘑出菇很重要。

2.5 營養(yǎng)成分

通過對干品紫丁香蘑營養(yǎng)成分含量檢測，紫丁香蘑含人體必需的8 種氨基酸，分別為：纈氨酸12 849.86 mg/kg、異亮氨酸12 870.75 mg/kg、蛋氨酸3 067.18 mg/kg、色氨酸6 106.85 mg/kg、蘇氨酸12236.56 mg/kg、賴氨酸18 664.54 mg/kg、苯丙氨酸13 280.59 mg/kg、亮氨酸21 098.63 mg/kg。另外，100 g 干品紫丁香蘑含粗多糖1.87 g、脂肪0.7 g，蛋白質(zhì)37.0 g 。紫丁香蘑粗多糖具有抗氧化能力，可見紫丁香蘑是一種低脂肪、高蛋白的很有開發(fā)價值的食用菌[7]。

3 結(jié)論與討論

紫丁香蘑是一種很有開發(fā)價值的食藥菌種，具有抗菌活性、抗氧化性、抗病毒及腫瘤等多種功效。筆者采用液體和固體培養(yǎng)基相結(jié)合的方式大大縮短了制種周期，紫丁香蘑栽培種菌絲生長均勻一致和菌齡整齊，提高了栽培種質(zhì)量。利用高粱秸稈為主料栽培紫丁香蘑生長周期較短，成本低，經(jīng)濟(jì)效益好，但是在栽培紫丁香蘑試驗過程中遇到蛞蝓、螨蟲等蟲害，以及鬼傘菌、胡桃肉狀菌、白色石膏霉等雜菌污染。因此，還需要進(jìn)一步研究紫丁香蘑生長最佳的溫度、濕度、光照等環(huán)境條件，建立科學(xué)有效的病蟲害防治措施，才能得到產(chǎn)量高、菇形正、色澤好的紫丁香蘑子實體。