侯月娥 曾俊霞 羅麗霞 劉進(jìn)芳 李馳*

（1.珠?？扑嚻諜z測科技有限公司，廣東珠海 519085；2.廣東省珠海市現(xiàn)代農(nóng)業(yè)發(fā)展中心，廣東珠海 519075）

隱孢子蟲是一種細(xì)胞內(nèi)寄生蟲，在全球范圍內(nèi)均有分布，可以感染各種脊椎動物，包括人與脊椎動物。目前已知的隱孢子蟲的基因型有70 多種，其中有4 種基因型的隱孢子蟲在人體中被發(fā)現(xiàn)[1]。這表明，隱孢子蟲是一種人畜共患寄生蟲，脊椎動物作為隱孢子蟲的主要宿主。1970 年首次在小鼠體內(nèi)被發(fā)現(xiàn)[2]，之后在全世界范圍內(nèi)均有報道。隱孢子蟲引起動物或人體發(fā)病主要是通過侵染動物腸道上皮細(xì)胞，造成小腸絨毛病變萎縮、變短、變粗，導(dǎo)致宿主消化吸收能力下降，最終引起宿主表現(xiàn)出腹痛、腹瀉、嘔吐等一系列的臨床現(xiàn)象[3]。對人類健康及牲畜生長產(chǎn)生明顯影響，造成了較大的經(jīng)濟損失。但目前對隱孢子蟲引發(fā)的隱孢子蟲病還沒有有效的治療方法?，F(xiàn)從隱孢子蟲的病原特點、流行病學(xué)、發(fā)病機制、診斷方法及防治措施等5 個方面對隱孢子蟲進(jìn)行全面綜述，以期為隱孢子蟲病的綜合防治提供理論參考。

1 病原特點

隱孢子蟲屬于原生生物界、頂復(fù)門，球蟲綱，真球蟲目，隱孢子蟲科，隱孢子蟲屬[4]。隱孢子蟲呈圓形或者橢圓形，直徑為4～6μm，主要寄生于人和動物腸道或其他組織上皮細(xì)胞中，造成局部炎癥，最終引起宿主產(chǎn)生腹瀉及消化紊亂等一系列癥狀[5]。隱孢子蟲主要通過水、食物、空氣及密切接觸等方式傳播[6]。當(dāng)易感動物接觸到被污染的水源或器具后，隱孢子蟲很可能入侵動物體內(nèi)。到達(dá)動物體內(nèi)后，子孢子便從孢子化的卵囊中被釋放出來，寄生于腸道及其他組織的上皮細(xì)胞中完成侵染過程[7]。之后子孢子在微絨毛邊緣的納蟲空泡內(nèi)發(fā)育為滋養(yǎng)體及裂殖體，之后每個裂殖體又具有重新侵染新細(xì)胞的能力[8]。隱孢子蟲的所有發(fā)育階段可在一個單獨的宿主細(xì)胞內(nèi)完成。孢子生殖在宿主細(xì)胞內(nèi)完成后可形成兩種類型的卵囊，分別為薄壁卵囊和厚壁卵囊[9]。薄壁卵囊直接在體內(nèi)破裂侵染新的細(xì)胞，厚壁卵囊可以隨糞便排出動物體外，隨后侵染新的動物。卵囊可以在正常外界條件下存活幾個月并保持侵染性[9]。隱孢子蟲單獨感染情況下不會造成宿主動物死亡，但當(dāng)與其他病原微生物共同感染或感染的宿主本身具有免疫缺陷時容易造成宿主的死亡。

2 流行病學(xué)

隱孢子蟲的宿主十分廣泛，可以寄生于人類、哺乳類、魚類等240 多種脊椎動物的體內(nèi)[10]。2019 年張齊元等對新疆地區(qū)羊駝腸道寄生蟲調(diào)查顯示，在羊駝體內(nèi)存在隱孢子蟲，檢出率為3.24%[11]。隱孢子蟲的感染沒有物種特異性，不同年齡階段的動物均可被感染。但年齡越小的動物感染后發(fā)病率越高。有研究報道，隱孢子蟲的感染常見于犢牛[12]。1～3 周齡的犢牛隱孢子蟲病發(fā)病率最高，在70%的犢牛中可以檢測到隱孢子蟲的存在。并且棲息地不同的動物感染隱孢子蟲概率也存在一定差異。2021 年韓宏曉等對上海市閔行區(qū)犬隱孢子蟲病流行病學(xué)調(diào)查顯示，來自農(nóng)村犬養(yǎng)戶、寵物醫(yī)院、犬養(yǎng)殖場和動物收容點的犬隱孢子蟲陽性率分別為0.83%、0、0 和3.57%，不同來源犬的感染率差異顯著[13]。2021 年鄭玲等對我國部分地區(qū)羊腸道隱孢子蟲的分子流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，河南、陜西、遼寧、貴州、內(nèi)蒙古、新疆等不同的地方隱孢子蟲檢出率有所不同[14]。其中河南地區(qū)隱孢子蟲感染率最高，為16.8%。其次為陜西和遼寧，感染率分別為1.5%和5.7%。但在貴州、內(nèi)蒙古、新疆3 地采集的樣品中均未檢出隱孢子蟲。表明在不同養(yǎng)殖環(huán)境及養(yǎng)殖模式下，動物感染隱孢子蟲的概率存在一定差異。

3 發(fā)病機制

隱孢子蟲主要是通過水源或被患病動物污染的器具進(jìn)行傳播[15]。主要經(jīng)糞口途徑進(jìn)入動物體內(nèi)，可引起動物消化道或呼吸道感染。當(dāng)隱孢子蟲侵入動物機體后，隱孢子蟲頂體復(fù)合物的分泌器官可以分泌蛋白，特異性的識別腸上皮細(xì)胞，促進(jìn)隱孢子蟲的卵囊黏附和入侵宿主細(xì)胞[16]。隱孢子蟲主要定植于腸道微絨毛或其他組織的上皮細(xì)胞上，并不侵入黏膜層。在微絨毛邊緣的納蟲空泡內(nèi)，隱飽子蟲進(jìn)行裂殖生殖、配子生殖、受精和孢子生殖。動物上皮細(xì)胞被隱孢子蟲感染后，向感染部位釋放促炎細(xì)胞因子和趨化因子，可能導(dǎo)致上皮細(xì)胞通透性增加，小腸絨毛變短變粗甚至脫落，并且腸黏膜分泌的酶量降低，尤其是乳糖酶含量下降，造成腸道吸收受損[17]。大量的水和電解質(zhì)流失及乳糖酶缺乏會造成乳糖沒有辦法被分解，進(jìn)而增加滲透作用[18]，從而引發(fā)被感染動物出現(xiàn)腹瀉及嘔吐現(xiàn)象。而隱孢子蟲如果入侵部位為動物呼吸道，動物表現(xiàn)出肺炎及氣囊炎的癥狀。這主要是由于隱孢子蟲入侵后，在動物氣管及支氣管上皮微絨毛處分布有大量蟲體，從而引起氣管纖毛脫落，黏膜功能喪失。

4 臨床癥狀

如果動物感染隱孢子蟲并引發(fā)機體患病后，患病動物主要表現(xiàn)為不同程度的呆滯、厭食、脫水。發(fā)病期間動物糞便為黃色或蒼白色，呈水樣并含有大量黏液[19-20]。腹瀉持續(xù)時間較長，即使接受藥物治療，腹瀉仍會持續(xù)數(shù)日。腹瀉期間，動物體重會出現(xiàn)明顯下降，并伴隨機體脫水甚至是酸中毒。呼吸道隱孢子蟲引起的感染主要表現(xiàn)為一系列的呼吸道疾病。如患病動物的眼、鼻有分泌物，鼻竇腫脹及呼吸困難等。

5 診斷方法

目前實驗室檢測隱孢子蟲的方法主要有飽和蔗糖溶液漂浮法、改良抗酸染色、免疫學(xué)診斷、分子生物學(xué)技術(shù)診斷等[21,22]。

5.1 飽和蔗糖溶液漂浮法和改良抗酸染色

目前實驗室檢測隱孢子蟲的傳統(tǒng)方法為飽和蔗糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法[23]。該實驗方法主要用于微小隱孢子蟲的檢測。因為微小隱孢子蟲卵囊為圓形，直徑為4～6um。卵囊外表面有一層厚壁卵殼，在其內(nèi)部有4 個子孢子，十分容易通過抗酸染色來辨別。該實驗方法具有成本低廉、操作簡單等優(yōu)點，但該實驗方法敏感性較低，極易出現(xiàn)假陰性。

5.2 免疫學(xué)診斷

免疫學(xué)診斷方法主要有酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測（ELISA）、免疫熒光技術(shù)、多重微珠免疫測定法、側(cè)流免疫層析法等。這些實驗方法被廣泛應(yīng)用于抗體特異性檢測，且與傳統(tǒng)實驗方法相比具有較高的靈敏性。

5.2.1 酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測

酶聯(lián)免疫吸附試驗被廣泛應(yīng)用于免疫學(xué)檢測中，具有重復(fù)性佳、成本低、特異性強、敏感性高、穩(wěn)定性好等一系列優(yōu)點[24]。張璐等通過制備抗隱孢子蟲抗體建立了隱孢子蟲的間接ELISA 方法。李軍等通過篩選隱孢子蟲重組蛋白包被抗原建立了牛隱孢子蟲抗體的間接ELISA 方法。

5.2.2 免疫熒光技術(shù)

免疫熒光技術(shù)是通過用熒光標(biāo)記抗體，抗體（抗原）和抗原（抗體）之間可以特異性結(jié)合，從而對相應(yīng)的抗原（抗體）進(jìn)行檢測。免疫熒光技術(shù)是檢測隱孢子蟲常用方法之一，該實驗方法也具有極高的特異性和極強的敏感性，可以廣泛用于隱孢子蟲的檢測[25]。直接免疫熒光技術(shù)是利用抗原和抗體特異性結(jié)合的原理。將用熒光標(biāo)記的單克隆抗體與隱孢子蟲進(jìn)行反應(yīng)，通過在熒光顯微鏡下觀察熒光強度對隱孢子蟲進(jìn)行檢測。與傳統(tǒng)實驗方法相比，該實驗方法特異性強、靈敏度高。但實驗前需要使用福爾馬林溶液對樣品進(jìn)行處理。

5.2.3 多重微珠免疫測定法

隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，寄生蟲的檢測方法不斷更新。2011 年，Du 等以純化的重組蛋白CP23、SA35和SA40 為檢測抗原，并以牛血清白蛋白作為內(nèi)部對照，將上述4 種蛋白與微珠偶聯(lián)，制備出多重微珠免疫測定法[26]。該方法可用于小隱隱孢子蟲感染后檢測多種抗體，而且多重微珠免疫測定法的特異性和敏感性很高，可作為流行病學(xué)調(diào)查工具。

5.2.4 側(cè)流免疫層析法

側(cè)流免疫層析是一種基于抗原、抗體免疫反應(yīng)的經(jīng)典床旁檢測技術(shù)。近年來，側(cè)流免疫層析法不斷發(fā)展，檢測性能得到很大提升，已逐步由定性檢測向定量檢測過渡，該實驗方法可檢測多種樣品，并且可以檢測樣品核酸。側(cè)流免疫層析法與其他實驗方法相比具有操作簡單，實驗室要求低等優(yōu)點。但該實驗方法的靈敏性不如以上的實驗方法[27-28]。

5.3 分子生物學(xué)技術(shù)診斷

1991 年，首次將PCR 技術(shù)用于隱孢子蟲檢測，此后PCR 技術(shù)被廣泛應(yīng)用于寄生蟲的蟲種鑒定和基因分型。目前常用于隱孢子蟲的分子檢測技術(shù)有普通PCR、套式PCR、反轉(zhuǎn)錄PCR、實時熒光定量PCR、多重?zé)晒釶CR 及PCR-RFLP 等[29]。分子生物學(xué)技術(shù)是目前針對隱孢子蟲診斷檢測技術(shù)中最快速和最敏感的方法之一，被廣泛應(yīng)用于野生、家養(yǎng)動物和人類樣品中隱孢子蟲的檢測。

6 防治措施

雖然隱孢子蟲病的出現(xiàn)給人和動物健康造成巨大威脅，也造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟損失，并引起了人們對隱孢子蟲病的高度關(guān)注。但目前隱孢子蟲病還沒有有效的治療方法及特效藥物。只能采取防大于治的治療方案。當(dāng)人患病后，一般采取硝唑尼特進(jìn)行治療。但該藥物對免疫缺陷病人并沒有很好的治療效果。動物患病后，人們采用乳酸常山酮對動物進(jìn)行治療[30]。近些年來，隨著科技的發(fā)展，提取工藝的進(jìn)步，人們發(fā)現(xiàn)一些中草藥對隱孢子蟲病具有很好的治療效果。如大蒜素、苦參堿、姜黃素、黃芪、青蒿琥酯等。研究表明，大蒜素、苦參堿、姜黃素、黃芪、青蒿琥酯等中草藥提取物可顯著抑制病畜體內(nèi)隱孢子蟲的生長[31]。由于隱孢子蟲主要通過糞口途徑傳播，易感動物通過攝入含有卵囊的水、食物或接觸被污染的物品而患病。因此，在動物患病后，應(yīng)做好病畜管理工作，避免病畜污染水源或其他物品。同時對養(yǎng)殖區(qū)域進(jìn)行及時消毒，避免健康動物接觸病畜的污染物。

7 小結(jié)

綜上所述，隱孢子蟲的宿主十分廣泛，且感染沒有物種特異性，不同年齡階段的動物均可被感染，但年齡越小的動物感染后發(fā)病率越高。因此，盡早運用合適的診斷方法檢測隱孢子蟲，并在動物患病后做好病畜管理工作和對養(yǎng)殖區(qū)域進(jìn)行及時消毒，可以減少隱孢子蟲病造成的經(jīng)濟損失，避免給人和動物的健康造成更大的威脅。在養(yǎng)殖中采取防大于治的治療方案，做好飼養(yǎng)管理和疾病預(yù)防工作才能有效防控隱孢子蟲病的發(fā)生。