趙麗晶，喬振鑫，于 樂(lè)，熊均涵，楊宗霖，李 銘，宋愛(ài)南，曾仁鳳

(吉林醫(yī)藥學(xué)院：a.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，b.公共衛(wèi)生學(xué)院，c.臨床醫(yī)學(xué)院，吉林 吉林 132013)

急性酒精中毒是由于過(guò)量飲酒后導(dǎo)致行為和意識(shí)的異常，并可能伴有多種器官損傷，嚴(yán)重者危及生命。目前急性酒精中毒患者逐年增加,能夠有效預(yù)防急性酒精中毒的保護(hù)性藥物開(kāi)始受到越來(lái)越多的關(guān)注。葉黃素是一種天然無(wú)害的類胡蘿卜素，能有效的清除氧自由基，具有抗氧化、抗腫瘤等作用[1]，對(duì)心血管疾病以及預(yù)防老年性光斑變性具有一定療效,但在預(yù)防醉酒和保護(hù)胃黏膜方面鮮見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)葉黃素對(duì)急性酒精中毒小鼠進(jìn)行預(yù)防性干預(yù)，探討葉黃素的解酒作用及對(duì)胃黏膜損傷的預(yù)防保護(hù)作用，為開(kāi)發(fā)新的解酒產(chǎn)品提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康昆明種小鼠90只,清潔級(jí),25～30 g,雌雄各半,購(gòu)自吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,動(dòng)物許可證號(hào):SYXK(吉)2014-0013。

1.2 藥品、試劑和儀器

葉黃素(西安草翠芯生物科技有限公司，純度80.14%，批號(hào)：Lu150516)。 56°紅星二鍋頭酒(北京紅星股份有限公司)。海王金樽溶液(深圳市海王健康科技發(fā)展有限公司，批號(hào)：20150525)。乙醇脫氫酶(alcohol dehydrogenase，ADH)、丙二醛(malond ialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(super oxidedismutase,SOD)和谷胱甘肽過(guò)氧化酶(glutathione peroxidase，GSH-Px)等試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所。772可見(jiàn)分光光度計(jì)(上海菁華科技儀器有限公司)。

1.3 分組和給藥

小鼠隨機(jī)平均分為6組，正常對(duì)照組，酒精模型組，陽(yáng)性對(duì)照組(海王金樽20 mg/kg)，葉黃素低、中、高劑量組(20、40、80 mg/kg)。正常對(duì)照組和酒精模型組灌胃生理鹽水，葉黃素各組和陽(yáng)性組分別灌胃相應(yīng)劑量葉黃素和海王金樽。給藥30 min后，正常組灌胃蒸餾水，其余各組灌胃白酒0.02 mL/g，均為一次性給藥。觀察翻正反射消失的小鼠數(shù)量，記錄給酒后翻正反射消失的時(shí)間以及翻正反射恢復(fù)的時(shí)間。

1.4 指標(biāo)檢測(cè)

光學(xué)顯微鏡下觀察小鼠胃黏膜組織潰瘍情況，觀察出血點(diǎn)，計(jì)算潰瘍指數(shù)和潰瘍抑制率。潰瘍指數(shù)采用張守仁法[2]：0級(jí)胃黏膜完整；l級(jí)點(diǎn)狀出血點(diǎn)1～5個(gè)；2級(jí)點(diǎn)狀出血點(diǎn)6～10個(gè)；3級(jí)點(diǎn)狀出血點(diǎn)10個(gè)以上；4級(jí)條狀出血1～5條；5級(jí)條狀出血6～10條；6級(jí)條狀出血10條以上。潰瘍抑制率:潰瘍抑制率=(酒精模型組潰瘍指數(shù)-給藥組潰瘍指數(shù))/酒精模型組潰瘍指數(shù)×100%。

HE染色觀察胃黏膜組織的病理結(jié)構(gòu)變化。

生化指標(biāo)檢測(cè)：血液靜置2 h后離心(3500 r/min，10 min)，取血清，嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明檢測(cè)血清中ADH的含量；胃組織冰浴下制備5%組織勻漿,離心(3500 r/min，15 min),取上清液，按試劑說(shuō)明檢測(cè)胃組織中SOD、MDA、GSH-Px的含量。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

用SPSS22進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差描述，多個(gè)樣本均數(shù)的比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD檢驗(yàn)，以P<0.05差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 小鼠醉酒數(shù)及醉酒率

與酒精模型組比較，葉黃素低、中、高劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組小鼠醉酒潛伏時(shí)間延長(zhǎng),小鼠醉酒后睡眠時(shí)間縮短，尤其葉黃素高劑量組明顯(P<0.01)，睡眠時(shí)間和用藥劑量呈反比，葉黃素中劑量組醒酒效果與海王金樽溶液相仿(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表 1 葉黃素對(duì)小鼠醒酒時(shí)間的影響(n=15)

2.2 病理學(xué)觀察

正常對(duì)照組小鼠胃黏膜表面完整，較光滑無(wú)出血點(diǎn)；酒精模型組肉眼可見(jiàn)明顯水腫，光鏡下觀察胃黏膜條狀出血、糜爛，可見(jiàn)有大量的中性粒細(xì)胞及淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，腺體間隙擴(kuò)大，黏膜下層明顯水腫；葉黃素低、中劑量組可見(jiàn)部分胃黏膜上皮細(xì)胞脫落和少量炎性細(xì)胞；葉黃素高劑量組胃黏膜上皮細(xì)胞完整無(wú)脫落，無(wú)明顯出血點(diǎn)(圖1)。

2.3 胃黏膜潰瘍情況和血清中ADH含量

與正常組比較，酒精模型組ADH含量顯著降低(P<0.01)；與酒精模型組比較，葉黃素治療組和陽(yáng)性組ADH含量增高(P<0.05或P<0.01)。與酒精模型組比較，治療組潰瘍指數(shù)均降低(P<0.05或P<0.01)，葉黃素組潰瘍抑制率和藥物濃度呈正比，見(jiàn)表2。

表 2 小鼠胃黏膜潰瘍程度和血清中ADH含量(n=15)

2.4 胃組織SOD、MDA以及GSH-Px含量

與正常組相比，酒精模型組MDA含量明顯增高(P<0.05)，而SOD和 GSH-Px含量顯著降低(P<0.01)；與酒精模型組相比，葉黃素中、高劑量組MDA含量降低(P<0.05或P<0.01)，而SOD和GSH-Px含量顯著增高(P<0.05或P<0.01)，見(jiàn)表3。

表 3 小鼠胃組織中SOD、MDA以及GSH-Px含量(n=15)

3 討 論

急性酒精中毒主要表現(xiàn)為神經(jīng)精神癥狀。小鼠過(guò)量飲酒后初始癥狀為呼吸、心率加快等興奮狀態(tài)，接著行走不穩(wěn)、共濟(jì)失調(diào)，最后進(jìn)入昏睡期，常以翻正反射消失作為判斷急性酒精中毒有效指標(biāo)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：與酒精模型組比較，葉黃素低、中、高劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組小鼠醉酒潛伏時(shí)間延長(zhǎng),小鼠醉酒后睡眠時(shí)間縮短，尤其葉黃素高劑量組明顯、睡眠時(shí)間和用藥劑量呈反比，表明葉黃素可以減少或延緩酒精的吸收。大量飲酒會(huì)造成胃黏膜損傷[3]，本實(shí)驗(yàn)中酒精模型組肉眼可見(jiàn)胃黏膜組織明顯水腫；鏡下觀察胃黏膜出現(xiàn)條狀出血、糜爛；HE染色可見(jiàn)有大量的中性粒細(xì)胞及淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，腺體間隙擴(kuò)大，黏膜下層明顯水腫。上述病理結(jié)果表明小鼠大量飲酒后胃黏膜損傷模型成立。飲酒前給予葉黃素和海王金樽，小鼠胃黏膜潰瘍出血點(diǎn)等損傷明顯減少，HE染色也顯示隨著葉黃素劑量的升高，胃黏膜水腫、炎細(xì)胞浸潤(rùn)等情況明顯減輕，表明葉黃素對(duì)酒精過(guò)量引起胃黏膜組織損傷有預(yù)防保護(hù)作用。

乙醇是造成急性酒精中毒胃黏膜損傷的直接因素之一[3]。大量酒精進(jìn)入機(jī)體后,首先由胃黏膜敏感性分泌ADH進(jìn)行首過(guò)代謝,降低乙醇的生物利用度[4-5]。加速體內(nèi)酒精的代謝，減少體內(nèi)乙醇濃度也是保護(hù)胃黏膜的途徑之一。乙醇通過(guò)胃腸道吸收，分布在肝臟和胃中ADH，是酒精代謝的關(guān)鍵酶[5-6]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果葉黃素中、高劑量組ADH較酒精模型組明顯升高，提示葉黃素可能改善胃黏膜分泌ADH的功能，抑制ADH氧化，促進(jìn)酒精代謝，對(duì)胃黏膜具有一定保護(hù)作用。

胃黏膜在乙醇刺激下產(chǎn)生大量的氧自由基，氧自由基可以造成胃黏膜細(xì)胞脂質(zhì)過(guò)氧化從而參與胃黏膜的損傷[7]。大量飲酒后與乙醇代謝有關(guān)的氧化酶活性增高，通過(guò)氧化代謝反應(yīng)產(chǎn)生大量活性氧自由基(ROS)，ROS水平增高進(jìn)一步導(dǎo)致了過(guò)氧化脂質(zhì)(LOP)的大量堆積 ，從而損傷胃黏膜細(xì)胞[8]。SOD和GSH-Px是機(jī)體內(nèi)ROS的重要酶類清除劑，大量酒精進(jìn)入機(jī)體使其活性減弱，從而使不飽和脂肪酸被大量氧化成LPO。MDA是脂質(zhì)過(guò)氧化物的代謝產(chǎn)物，其含量可反映機(jī)體的脂質(zhì)過(guò)氧化程度，進(jìn)而反映細(xì)胞損傷的嚴(yán)重程度[9]。本實(shí)驗(yàn)中，與正常組比較，酒精模型組小鼠胃組織中MDA含量增加，而SOD和GSH-Px活性降低，與文獻(xiàn)一致。與酒精模型組比較，葉黃素中、高劑量組胃組織中SOD和GSH-Px活性明顯增加，于藥物濃度呈正相關(guān)，而MDA含量逐漸降低，呈良好的相關(guān)性。表明葉黃素可通過(guò)減少脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，提高胃黏膜組織抗氧化能力，清除氧自由基，進(jìn)而抑制胃黏膜的氧化損傷。

總之，葉黃素能有效保護(hù)胃黏膜，降低醉酒率和縮短睡眠時(shí)間，提高SOD和GSH-Px過(guò)氧化酶的活性，降低脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物MDA的含量，進(jìn)而抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)，保護(hù)ADH免受氧化反應(yīng)進(jìn)而促進(jìn)乙醇代謝。本研究為酒精中毒造成胃黏膜損傷提供藥物理論依據(jù)，為治療酒精中毒新藥研發(fā)提供參考價(jià)值。