于芳滄

曹縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東菏澤 274400

細(xì)菌性陰道炎是一種由細(xì)菌感染引起的臨床常見疾病，使患者出現(xiàn)陰道菌群紊亂情況，可降低患者陰道內(nèi)有益菌，且極易被致病菌所代替[1]。細(xì)菌性陰道炎這一婦科常見疾病，受病情進(jìn)展緩慢、無(wú)明顯臨床特征等因素影響，難以引起重視，當(dāng)臨床癥狀明顯時(shí)，則可能已進(jìn)展為盆腔炎、宮頸炎等疾病，病情嚴(yán)重時(shí)甚至誘發(fā)不孕[2]。所以，考慮到患者的身心健康，及早接受早期診斷及治療，對(duì)保障其生育能力具有重要作用。當(dāng)前臨床治療陰道炎疾病的關(guān)鍵是及時(shí)診斷患者病情，并準(zhǔn)確掌握病情進(jìn)展。白帶常規(guī)檢查是當(dāng)前婦科驗(yàn)證的常用輔助檢查方式，可通過(guò)檢查患者陰道分泌物，掌握患者陰道感染類型及感染情況。細(xì)菌培養(yǎng)法作為陰道炎疾病的一種常用診斷方法，隨其研究不斷深入，發(fā)現(xiàn)其需耗費(fèi)較長(zhǎng)時(shí)間，且陽(yáng)性檢出率不高，不少患者需要接受多次細(xì)菌培養(yǎng)檢驗(yàn)方可確診[3]。PCR檢驗(yàn)法作為一種近年來(lái)新興的檢驗(yàn)方法，其在臨床應(yīng)用廣泛。為深入研究細(xì)菌性陰道炎疾病的最佳檢驗(yàn)方式，本研究對(duì)2021年1—12月來(lái)曹縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科就診的120例細(xì)菌性陰道炎患者進(jìn)行臨床研究，給予PCR檢驗(yàn)法和細(xì)菌培養(yǎng)法檢驗(yàn)，對(duì)比兩種檢驗(yàn)結(jié)果差異?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

對(duì)來(lái)本院就診的120例細(xì)菌性陰道炎患者進(jìn)行臨床研究，采集患者陰道分泌物，其中對(duì)照組（60例）接受細(xì)節(jié)培養(yǎng)法檢測(cè)，年齡23～45歲，平均（33.68±1.43）歲；病程3個(gè)月～3年，平均（2.54±0.51）年。觀察組（60例）接受PCR檢驗(yàn)法檢測(cè)，年齡23～44歲，平均（33.17±1.56）歲；病程3個(gè)月～3.5年，平均（2.61±0.43）年。以影像學(xué)聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室檢查為金標(biāo)準(zhǔn)，所有患者均確診為細(xì)菌性陰道炎患者，兩組患者中棒狀桿菌、腸球菌、加納特菌患者均有20例。兩組研究對(duì)象一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審批通過(guò)，家屬及患者簽署知情同意書。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①均符合細(xì)菌性陰道炎臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)；②均伴隨白帶瘙癢、氣味異常、灼熱、陰道黏膜糜爛等臨床表現(xiàn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①患有重要臟器功能嚴(yán)重受損者；②合并凝血功能異常、精神障礙者；③參與研究前10 d使用過(guò)抗菌藥物、哺乳期、妊娠期者。

1.3 方法

患者取截石位，采取無(wú)菌陰道鏡，暴露宮頸，使用棉簽在患者陰道穹隆位置蘸取陰道分泌物，再放入裝有無(wú)菌生理鹽水的試管內(nèi)，分別對(duì)觀察組和對(duì)照組患者實(shí)施PCR檢驗(yàn)法與細(xì)菌培養(yǎng)法檢驗(yàn)。

1.3.1 PCR檢驗(yàn)法將觀察組300 mL陰道分泌物放入900 mL生理鹽水中，使用離心機(jī)離心，并調(diào)整其轉(zhuǎn)速為10000 r/min，離心13 min，清除其上清液，再加入組織裂解液，并進(jìn)行迅速攪拌，使其處于均勻狀態(tài)。將其置入溫度為90℃容器中，進(jìn)行14 min加熱，隨后再使用離心機(jī)離心，調(diào)整其轉(zhuǎn)速為10000 r/min，離心8 min。待完成離心，去少量上清液，制作出DNA模板，同時(shí)對(duì)比檢驗(yàn)細(xì)菌陰性與陽(yáng)性，以制作陰性為對(duì)癥，整個(gè)過(guò)程中，除不加入DNA模板外，其他均相同。隨后進(jìn)行PCR擴(kuò)增、產(chǎn)物檢查，再加入緩沖對(duì)、引物及模板，取24 μL無(wú)菌離子水，使用32 μL無(wú)菌液狀石蠟覆蓋其表面，然后進(jìn)入PCR循環(huán)階段。

1.3.2細(xì)菌培養(yǎng)法使用高壓蒸汽鍋對(duì)檢驗(yàn)所用工具進(jìn)行消毒、滅菌操作，再選擇適宜的培養(yǎng)基配方，調(diào)制出適宜陰道細(xì)菌生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。于無(wú)菌生理鹽水中取出患者陰道分泌物，置于無(wú)菌器皿內(nèi)。在保證無(wú)菌條件下，接種分泌物，并置于培養(yǎng)液中，再對(duì)無(wú)菌接種分泌物實(shí)施細(xì)菌分離。隨后將分離所得放入含有二氧化碳的孵育箱內(nèi)，將溫度保持在34℃左右。44 h后，使用顯微鏡對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)情況進(jìn)行觀察與監(jiān)測(cè)，當(dāng)培養(yǎng)液中培育出菌落，挑選出灰色、光滑、半透明的水滴狀菌落，對(duì)其進(jìn)行生化檢驗(yàn)，確保整個(gè)檢驗(yàn)過(guò)程與檢驗(yàn)結(jié)果均滿足生化檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。

1.4 觀察指標(biāo)

①對(duì)比患者陽(yáng)性檢出率：細(xì)菌培養(yǎng)陽(yáng)性檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)：當(dāng)其具有典型菌落，且菌落呈（+）陽(yáng)性；PCR陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)：當(dāng)其邊緣整齊，且條帶寬度＜1 mm。②對(duì)比兩組棒狀桿菌、腸球菌、加特納菌的實(shí)際檢出情況。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 24.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資料以[n(%)]表示，組間差異比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組檢驗(yàn)方法陽(yáng)性檢出率對(duì)比

觀察組陽(yáng)性率顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組檢驗(yàn)方法陽(yáng)性檢出率對(duì)比[n(%)]

2.2 兩組細(xì)菌檢出情況對(duì)比

觀察組棒狀桿菌、腸球菌、加特納菌檢出率高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組細(xì)菌檢出情況對(duì)比[n(%)]

3 討論

近年來(lái)，隨著人們生活節(jié)奏加快、環(huán)境變化等因素影響，陰道疾病發(fā)病率正呈升高趨勢(shì)，且患病人數(shù)逐漸增加[4]。陰道炎作為臨床常見婦科疾病，通常是由陰道內(nèi)寄生菌群失衡引起的。細(xì)菌性陰道炎則多是由陰道加特納菌引起的，其傳播途徑為性傳播。女性受社會(huì)環(huán)境、飲食結(jié)構(gòu)改變等因素影響，其細(xì)菌性陰道炎發(fā)病率正逐漸升高，除給女性的正常生活與身體健康帶來(lái)不便外，還限制了患者正常社會(huì)交往[5]。細(xì)菌性陰道炎是一種伴有外陰瘙癢、白帶異味等臨床癥狀的婦科常見疾病，其發(fā)病原因多與患者服用抗生素類藥物、性生活不潔等因素有關(guān)，出現(xiàn)陰道菌群失衡情況[6-7]。白帶分泌物可從一定程度上反映女性身體狀況，如果出現(xiàn)白帶分泌異常，需及時(shí)來(lái)院檢查。

陰道內(nèi)各類菌群能夠達(dá)到相關(guān)制衡作用，使陰道pH值處于合理范圍，通過(guò)保持陰道內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，達(dá)到抑制部分致病菌滋生的作用[8]。處于平衡狀態(tài)下的陰道菌群，其所分泌的物質(zhì)，對(duì)陰道內(nèi)環(huán)境具有穩(wěn)定作用，有助于保障女性陰道健康，但一旦出現(xiàn)陰道菌群失衡，則會(huì)導(dǎo)致陰道桿菌出現(xiàn)大量死亡情況，這給致病菌提供了良好的滋生與繁殖環(huán)境，不僅限制了陰道上皮細(xì)胞的屏障、保護(hù)作用，還極易引發(fā)細(xì)菌性陰道炎疾病[9-10]。由于陰道內(nèi)上皮細(xì)胞環(huán)境屬于弱酸性，可對(duì)陰道細(xì)菌疾病產(chǎn)生病理改變，起到保護(hù)作用；而當(dāng)致病菌侵襲表面抗原，則會(huì)改變患者陰道內(nèi)pH值，降低陰道桿菌數(shù)量，增加病菌數(shù)量，消耗掉許多營(yíng)養(yǎng)成分，降低正常上皮細(xì)胞新陳代謝能力，從而使其失去了良好的保護(hù)作用[11-12]。

陰道細(xì)菌給女性健康、工作及生活帶來(lái)較大影響，想要迅速鑒別出細(xì)菌種類，改進(jìn)細(xì)菌檢驗(yàn)操作方法十分必要，不僅能給醫(yī)師診斷病情提供便利條件，還便于醫(yī)師給患者制訂科學(xué)、合理的治療方案[13]。不少研究指出，女性陰道內(nèi)菌群失衡現(xiàn)象的出現(xiàn)，是多種因素共同作用的結(jié)果，使陰道桿菌出現(xiàn)大量死亡，不僅損耗大量糖原等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，還易引起陰道內(nèi)酸堿失衡，使陰道上皮細(xì)胞失去保護(hù)作用，誘發(fā)白帶增多、陰道炎等常見婦科疾病，如果得不到及時(shí)治療，則會(huì)加重病情，限制生活質(zhì)量[14]。所以，女性在日常生活中，為保持陰道內(nèi)菌群正常與穩(wěn)定，應(yīng)保持良好的外陰清洗習(xí)慣。因此，選擇一種高效、合理的檢驗(yàn)方法，對(duì)提升檢驗(yàn)效果具有重要作用。

陰道分泌物作為婦科判斷女性陰道炎的主要診斷方法之一，是一種良好的輔助檢查手段，借助該檢查方式，不僅能全面了解陰道內(nèi)膜炎性感染狀況與菌群失調(diào)狀況，還能幫助醫(yī)師準(zhǔn)確評(píng)估陰道炎預(yù)后質(zhì)量及治療干預(yù)方案[15]。所以，給患者尋求一種良好的檢驗(yàn)方式，對(duì)判斷其感染情況、判定致病菌具有重要意義。

細(xì)菌培養(yǎng)法這一臨床常用檢驗(yàn)方式，是當(dāng)前臨床用于檢驗(yàn)陰道細(xì)菌的金標(biāo)準(zhǔn)，但隨我國(guó)醫(yī)療技術(shù)水平不斷提升，該檢驗(yàn)方式也暴露諸多缺點(diǎn)：①細(xì)菌培養(yǎng)法不僅需要一定培養(yǎng)條件，其操作步驟也較為復(fù)雜，如果培養(yǎng)環(huán)節(jié)存在污染，則會(huì)誘發(fā)交叉感染，除降低檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確度，還會(huì)給醫(yī)務(wù)人員身體健康帶來(lái)嚴(yán)重影響。②細(xì)菌培養(yǎng)法培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)，其培養(yǎng)時(shí)間一般需要＞48 h；③細(xì)菌培養(yǎng)法的陽(yáng)性檢出率較低，且其檢測(cè)結(jié)果需要進(jìn)行反復(fù)核實(shí)方可確診。

PCR檢驗(yàn)法是一種陽(yáng)性檢出率較高的熒光定量檢測(cè)法，在當(dāng)前女性陰道細(xì)菌檢測(cè)中應(yīng)用廣泛。和細(xì)菌培養(yǎng)法相比，PCR檢驗(yàn)法更具檢測(cè)優(yōu)勢(shì)：①PCR檢驗(yàn)法操作步驟較為簡(jiǎn)單，且對(duì)實(shí)驗(yàn)室要求不高；②PCR檢驗(yàn)法具有較高的特異性，整體檢驗(yàn)時(shí)間也較短，且陽(yáng)性檢出率更高。

研究結(jié)果表明，經(jīng)PCR檢驗(yàn)，觀察組陽(yáng)性檢出率91.67%顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）。這表明在陰道細(xì)菌檢驗(yàn)中，PCR檢驗(yàn)法的陽(yáng)性檢出率，明顯優(yōu)于細(xì)菌培養(yǎng)法。這與閆清[16]“研究組經(jīng)檢驗(yàn)，患者陽(yáng)性率90%顯著強(qiáng)于對(duì)照組（P＜0.05）”的研究結(jié)果相一致。觀察組棒狀桿菌、腸球菌、加特納菌檢出率分別為95.00%、90.00%、90.00%高于對(duì)照組（P＜0.05）。這提示PCR檢驗(yàn)法應(yīng)用于陰道細(xì)菌檢驗(yàn)中，其檢出能力顯著強(qiáng)于細(xì)菌培養(yǎng)法。本研究結(jié)果表明陰道細(xì)菌檢驗(yàn)中采取PCR檢驗(yàn)法后，腸球菌、加特納菌、棒狀桿菌這3種菌陽(yáng)性率得到了大幅提升，進(jìn)一步表明PCR檢驗(yàn)法的檢驗(yàn)結(jié)果效率更高，具有較大的優(yōu)越性。PCR檢驗(yàn)法作為一項(xiàng)新型檢驗(yàn)技術(shù)，其PCR靈敏性、DNA特異性雜交等特征更加明顯，作為一種DNA特異片段，通常是體外酶合成的，整個(gè)過(guò)程一般是由DND變形、退熱、延伸3個(gè)步驟構(gòu)成的，經(jīng)過(guò)這一循環(huán)過(guò)程，有助于增加標(biāo)本中DNA含量，且PCR技術(shù)檢驗(yàn)結(jié)果也較優(yōu)，檢出率也較高，操作方法也較為簡(jiǎn)便。和PCR檢驗(yàn)法相比，細(xì)菌培養(yǎng)法陽(yáng)性檢出率不高，是一種由人工培養(yǎng)方式開展的細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖方法，受陰道細(xì)菌種類多、數(shù)量大等因素影響，檢驗(yàn)誤診率較高，且對(duì)光照、溫度、pH7.0等環(huán)境要求較高。細(xì)菌培養(yǎng)法受培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)、操作方法復(fù)雜、實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)要求較高等因素影響，部分基層醫(yī)院難以開展此項(xiàng)技術(shù)，所以，通常被PCR技術(shù)所代替。這與楊宇[17]“患者經(jīng)PCR檢驗(yàn)組，棒狀桿菌、腸球菌、加特納菌檢驗(yàn)準(zhǔn)確性為28.87%、26.80%、34.02%高于細(xì)菌培養(yǎng)組（P＜0.05）”的研究結(jié)果相符合。PCR檢驗(yàn)法可借助離心分離操作，對(duì)菌群進(jìn)行隔離處理，可最大限度降低菌群狀態(tài)的擾亂情況，通過(guò)將菌群與其他物質(zhì)進(jìn)行分離，能夠準(zhǔn)確檢測(cè)出患者菌群情況[18]。由于PCR檢驗(yàn)法檢測(cè)過(guò)程并無(wú)復(fù)雜操作過(guò)程，且對(duì)設(shè)備要求不高，檢驗(yàn)過(guò)程中僅需遵循無(wú)菌操作要求，不僅能避免發(fā)生細(xì)菌感染，還能防止檢驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)異常情況。本研究受檢測(cè)時(shí)間等因素影響，尚未對(duì)其他檢驗(yàn)方法進(jìn)行深入分析與對(duì)比，所以仍需進(jìn)行深入探索與研究。

綜上所述，陰道細(xì)菌檢驗(yàn)中采取PCR檢驗(yàn)法，其具有較高的陽(yáng)性檢出率，取得了不錯(cuò)的檢驗(yàn)效果，具有較高的臨床檢驗(yàn)價(jià)值。