馬有花，來(lái)有鵬

（青海大學(xué) 三江源生態(tài)與高原農(nóng)牧業(yè)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/青海省農(nóng)業(yè)有害生物綜合治理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，青海 西寧 810016）

【研究意義】茴香薄翅野螟（Evergestis extimalisScopoli，1763）又稱茴香螟、油菜螟、角野螟，在分類上屬于鱗翅目（Lepidoptera），野螟蛾科（Crambidae），薄翅野螟亞科（Evergestinae），薄翅野螟屬（Evergestis），寄主主要有油菜、茴香、白菜、甘藍(lán)等[1]。茴香薄翅野螟是青海高原春油菜田的毀滅性害蟲(chóng)，年均發(fā)生面積為油菜種植總面積的20%以上，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[2]。茴香薄翅野螟對(duì)其寄主植物主要以幼蟲(chóng)卷葉，取食心葉、種芽的方式為害，在油菜上主要以幼蟲(chóng)啃食嫩莖、鉆蛀油菜角果取食籽粒的方式為害[2-3]。目前生產(chǎn)上以化學(xué)防治為主，并且防治時(shí)使用的農(nóng)藥品種單一[3]，由于該蟲(chóng)已對(duì)常用農(nóng)藥產(chǎn)生較強(qiáng)的抗性，再加上農(nóng)藥殘留對(duì)于人畜的安全隱患，化學(xué)農(nóng)藥防治已受到了一定限制[4-5]，因此探索一種高效、低毒、低殘留的微生物殺蟲(chóng)劑迫在眉睫。【前人研究進(jìn)展】昆蟲(chóng)病原真菌作為一類廣泛存在于自然界的重要資源，能感染昆蟲(chóng)并在其體表或體內(nèi)增殖，使昆蟲(chóng)發(fā)病甚至死亡[6]，進(jìn)而高度有效地調(diào)控昆蟲(chóng)種群數(shù)量動(dòng)態(tài)?，F(xiàn)階段，在利用昆蟲(chóng)病原真菌防治農(nóng)林害蟲(chóng)方面，半知菌亞門的白僵菌和綠僵菌因具有寄主范圍廣、致病力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)而受到各界的廣泛關(guān)注[7]。王海鴻等[8]研發(fā)了防治西花薊馬（Frankliniella occidentalisPergande）的150 億孢子/g 球孢白僵菌可濕性粉劑，在該害蟲(chóng)的生物防治中取得了很好的效果并已商業(yè)化；Shehzad 等[9]研究表明在接種物直接噴施法及浸葉法2 種不同的施用方法下，球孢白僵菌（Beauveria bassiana）和金龜子綠僵菌（Metarhizium anisopliae）對(duì)小菜蛾（Plutella xylostella）2 齡和3 齡幼蟲(chóng)都有較強(qiáng)的毒力。毛霉屬真菌廣泛分布在自然界中，寄生于動(dòng)植物或腐生于土壤、動(dòng)植物殘?bào)w等基物[10-11]，部分毛霉菌是一些鱗翅目、鞘翅目和雙翅目昆蟲(chóng)的病原體[12]。Heitor[13]從甘藍(lán)夜蛾（Mamestra brassicae）幼蟲(chóng)個(gè)體上分離出一株有致毒作用的凍土毛霉（Mucor hiemalis）；Reiss 等[14]發(fā)現(xiàn)凍土毛霉（M.hiemalis）對(duì)鹵蟲(chóng)（Artemia salina）具有致病性；Konstantopoulou 和Mazomenos[15]從患病的橄欖果實(shí)蠅（Bactrocera oleae）蛹和蛀莖夜蛾（Sesamia nonagrioides）幼蟲(chóng)中分離到6種昆蟲(chóng)病原真菌，試驗(yàn)表明2株凍土毛霉（M.hiemalis）對(duì)地中海實(shí)蠅（Ceratitis capitata）幼蟲(chóng)有較好的防治效果。Konstantopoulou 等[16]研究發(fā)現(xiàn)凍土毛霉（M.hiemalisSMU-21）的代謝提取物具有殺蟲(chóng)活性?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】目前關(guān)于茴香薄翅野螟的病原真菌未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道?！緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】本研究從青海省大通回族土族自治縣采集的茴香薄翅野螟幼蟲(chóng)尸體上分離純化得到了一株致病真菌，通過(guò)形態(tài)學(xué)及ITS 分子鑒定確定其分類地位，研究菌株對(duì)茴香薄翅野螟的致病性，以期為生防劑的研發(fā)、綠色防控提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試蟲(chóng)源及培養(yǎng)基

在青海省西寧市大通縣、湟中縣采集茴香薄翅野螟卵及幼蟲(chóng)，置于20 ℃，相對(duì)濕度80%的條件下飼養(yǎng)。

1.2 病原真菌的分離純化

參考Hallouti 等[17]的方法，將感病的茴香薄翅野螟幼蟲(chóng)，浸入含有0.3%次氯酸鈉的蒸餾水溶液中消毒1 min，接著用無(wú)菌蒸餾水沖洗4 次后放入底部鋪有無(wú)菌濾紙的一次性培養(yǎng)皿中保濕培養(yǎng)。待蟲(chóng)體長(zhǎng)出菌絲或孢子時(shí)，在超凈工作臺(tái)中挑取少量菌絲或孢子接種于PDA 培養(yǎng)基，放置25 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)3 d。將長(zhǎng)好的菌絲挑入新的PDA平板，如此往復(fù)純化4次后的菌株于4 ℃冰箱保存。

1.3 病原真菌的適宜培養(yǎng)基篩選

從8種供試培養(yǎng)基（表1）中篩選出適宜病原真菌生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，以供后續(xù)試驗(yàn)使用。將活化的菌株打菌餅（d=8 mm）接種于各培養(yǎng)基平板中心，于25 ℃恒溫箱培養(yǎng)3 d，每天觀察菌落形態(tài)并用十字交叉法測(cè)量菌落直徑，計(jì)算日平均長(zhǎng)速；3次重復(fù)，培養(yǎng)6 d后在無(wú)菌條件下用無(wú)菌水洗脫孢子，4層紗布過(guò)濾，制成孢子懸浮液，于光學(xué)顯微鏡下用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)產(chǎn)孢量。

表1 供試培養(yǎng)基及其配方Tab.1 Test medium and its formula

1.4 病原真菌的形態(tài)學(xué)觀察

取活化的菌株打菌餅（d=8 mm）接種于PDA 平板，將滅菌蓋玻片斜插入培養(yǎng)基中，于25℃恒溫箱培養(yǎng)2～3 d，經(jīng)乳酸酚棉藍(lán)染色液染色后，用光學(xué)顯微鏡觀察菌株形態(tài)，參照真菌鑒定手冊(cè)[18]，對(duì)病原菌進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定。

1.5 病原真菌的分子生物學(xué)鑒定

用CTAB 法[19]提取菌株基因組DNA，運(yùn)用真菌通用引物ITS1（5′-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3′）、ITS4（5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′）進(jìn)行ITS-PCR 擴(kuò)增，引物均由上海生工生物有限責(zé)任公司合成。PCR 擴(kuò)增反應(yīng)體系：ITS1/ITS4 引物各1 μL、模板DNA 1 μL、PCR MasterMix 12.5 μL、ddH2O 9.5 μL，反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性5 min；94 ℃變性30 s，57 ℃退火30 s，72 ℃延伸90 s，30 個(gè)循環(huán)72 ℃延伸10 min。將擴(kuò)增產(chǎn)物送往上海生工生物有限責(zé)任公司進(jìn)行測(cè)序。

將菌株的序列測(cè)定結(jié)果提交至GenBank 核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)中，進(jìn)行BLAST 比對(duì)[20]，從中選取同源性較高的序列，利用MEGA 7.0[21]軟件，按照鄰接法，運(yùn)行1 000 次bootstrap 計(jì)算，構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)（Neighbor joining tree）對(duì)菌株進(jìn)行分類鑒定。

1.6 病原真菌的致病性測(cè)定

依據(jù)柯赫氏法則驗(yàn)證菌株對(duì)茴香薄翅野螟幼蟲(chóng)的致病性。供試菌株接種于SDAY 平板，25 ℃活化培養(yǎng)6 d，在超凈工作臺(tái)用10 mL 無(wú)菌水溶液（含0.5 mL 0.05%吐溫80）洗脫孢子，4 層紗布過(guò)濾菌絲，制成孢子懸浮液，用血球計(jì)數(shù)板調(diào)節(jié)孢子液濃度為1×107孢子/mL，10 mL 無(wú)菌水溶液（含0.5 mL 0.05%吐溫80）為空白對(duì)照。采用浸漬法進(jìn)行生物測(cè)定。用毛筆挑選2～5 齡幼蟲(chóng)，放入孢子懸浮液中，浸漬20 s挑出，晾干后，移入自制的養(yǎng)蟲(chóng)盒（8 cm×14 cm×5 cm）中，以新鮮的白菜飼養(yǎng)。各處理15 頭幼蟲(chóng)，重復(fù)4次，每天觀察幼蟲(chóng)存活情況，將死亡幼蟲(chóng)于鋪有濕潤(rùn)濾紙的培養(yǎng)皿（d=9 cm）中進(jìn)行觀察[22]，蟲(chóng)體長(zhǎng)出白色菌絲者即為感染。

1.7 不同孢子濃度對(duì)茴香薄翅野螟2齡幼蟲(chóng)的毒力

將培養(yǎng)8 d 的菌株按1.6 所述方式制孢子液后，稀釋成105，106，107，108孢子/mL 懸浮液，選取同等大小的2 齡幼蟲(chóng)浸入不同濃度孢子懸浮液中20 s，自然風(fēng)干后，于養(yǎng)蟲(chóng)盒中飼喂白菜并定期更換菜葉。各處理15頭幼蟲(chóng)，重復(fù)3次，按時(shí)觀察記錄幼蟲(chóng)死亡情況，將死亡幼蟲(chóng)保濕培養(yǎng)[22]。

1.8 數(shù)據(jù)處理

利用Excel整理數(shù)據(jù)，SPSS 26.0軟件進(jìn)行處理分析，統(tǒng)計(jì)處理幼蟲(chóng)的累計(jì)死亡率和累計(jì)校正死亡率，求得回歸方程、致死中時(shí)及致死中濃度，用Graphpad prism 8.0作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 病原真菌的適宜培養(yǎng)基篩選

據(jù)圖1及表2可知，病原菌在試驗(yàn)所選的8種培養(yǎng)基上都能生長(zhǎng)。菌株在孟加拉紅培養(yǎng)基、SDAY 培養(yǎng)基、PPDA 培養(yǎng)基中菌絲發(fā)達(dá)致密，邊緣整齊；在CPA 培養(yǎng)基、PDA 培養(yǎng)基、YEA 培養(yǎng)基中菌絲前期致密，后期稀疏；相對(duì)其他培養(yǎng)基而言，菌株在SA培養(yǎng)基和察氏培養(yǎng)基中長(zhǎng)勢(shì)較差、稀疏。

表2 菌株在不同培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)Tab.2 Colony morphology of strain on different media

圖1 菌株在不同培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)Fig.1 Colony morphology of strain on different media

由圖2所示，菌株在不同培養(yǎng)基上的日平均長(zhǎng)速和產(chǎn)孢量存在差異。菌株在PPDA 培養(yǎng)基上生長(zhǎng)速度最快，達(dá)2.81 cm/d，SDAY 培養(yǎng)基和CPA 培養(yǎng)基次之，長(zhǎng)速分別為2.80 cm/d、2.71 cm/d，彼此無(wú)顯著差異，孟加拉紅培養(yǎng)基中菌絲生長(zhǎng)最慢，僅為0.50 cm/d；培養(yǎng)6 d 后病原真菌在SDAY 培養(yǎng)基上產(chǎn)孢量最高，為2.9×107孢子/mL，孟加拉紅培養(yǎng)基及PPDA 培養(yǎng)基次之，分別是2.8×107孢子/mL、2.25×107孢子/mL，察氏培養(yǎng)基產(chǎn)孢量最低，為0.06×107孢子/mL，顯著小于其他培養(yǎng)基。因此，綜合菌落形態(tài)、生長(zhǎng)速度及產(chǎn)孢量，選擇SDAY 培養(yǎng)基為最適培養(yǎng)基。

圖2 菌株在不同培養(yǎng)基上的日長(zhǎng)速及產(chǎn)孢量Fig.2 Comparison of growth rate and sporulation yield of strain on different media

2.2 病原真菌的形態(tài)學(xué)特征

菌株在PDA培養(yǎng)基培養(yǎng)2～3 d，菌絲生長(zhǎng)迅速，呈白色羽毛狀，中間致密，邊緣稀疏，菌落圓形（圖1A）；在光學(xué)顯微鏡下觀察到菌株菌絲無(wú)隔，孢囊梗直立單生，頂生球狀孢子囊，含大量孢囊孢子，孢子橢圓形、圓形（圖1B）。根據(jù)以上觀察結(jié)果，參考魏景超[18]的研究，初步鑒定該菌為毛霉屬真菌。

圖3 病原真菌生物學(xué)特征Fig.3 Biological characteristics of pathogenic fungi

2.3 病原真菌的分子生物學(xué)鑒定

通過(guò)測(cè)序得到535 bp DNA 序列，提交至NCBI 數(shù)據(jù)庫(kù)（登錄號(hào)：OK427267）進(jìn)行BLAST 比對(duì)，結(jié)果表明分離株與凍土毛霉（Mucor hiemalis）對(duì)應(yīng)序列的同源性高達(dá)100%，構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)（圖4），發(fā)現(xiàn)菌株與M.hiemalis聚為一類，支持率為100%，結(jié)合形態(tài)學(xué)和ITS 序列相似性分析，最終確定該菌為凍土毛霉，菌株編號(hào)QH01。

圖4 基于ITS序列構(gòu)建的菌株QH01系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)Fig.4 Phylogenetic tree of strain QH01 based on ITS sequence

2.4 病原真菌的致病性分析

根據(jù)柯赫氏法則驗(yàn)證菌株對(duì)茴香薄翅野螟幼蟲(chóng)的致病性，結(jié)果表明：菌株QH01對(duì)2～5 齡幼蟲(chóng)均有一定致病力。以2、4 齡幼蟲(chóng)為例，幼蟲(chóng)死亡時(shí)變?yōu)楹稚蚝诩t色，蟲(chóng)體軟化，保濕培養(yǎng)2～3 d，體表覆蓋白色菌絲和黑色孢子囊（圖5）。表3 所示，接菌處理后茴香薄翅野螟2～5 齡幼蟲(chóng)累計(jì)死亡率隨齡期的增長(zhǎng)而下降，侵染第3～5天各齡幼蟲(chóng)累計(jì)死亡率存在極顯著差異，但在第7～9天3齡幼蟲(chóng)與4齡幼蟲(chóng)的累計(jì)死亡率無(wú)顯著差異；低齡幼蟲(chóng)比高齡幼蟲(chóng)對(duì)菌株更敏感，以1×107孢子/mL 孢子液處理9 d 后2齡幼蟲(chóng)的累計(jì)死亡率為71.78%，而5 齡幼蟲(chóng)的僅為28.89%。

圖5 茴香薄翅野螟幼蟲(chóng)侵染癥狀Fig.5 Infection symptoms of Evergestis extimalis larvae

表3 凍土毛霉處理后不同時(shí)間茴香薄翅野螟幼蟲(chóng)累計(jì)死亡率Tab.3 Cumulative mortality of Evergestis extimalis larvae at different times after treatment with Mucor hiemalis

由圖6可知，孢子懸浮液接種茴香薄翅野螟2～5齡幼蟲(chóng)后，隨著時(shí)間的推移，累計(jì)死亡率都呈現(xiàn)逐漸上升的趨勢(shì)。2 齡幼蟲(chóng)接菌1 d 后出現(xiàn)死亡，3～5 d 死亡率增長(zhǎng)較快，隨后漸趨平穩(wěn)，接菌9 d 后全部死亡，累計(jì)校正死亡率達(dá)66.7%；侵染3 齡幼蟲(chóng)1 d 后出現(xiàn)感菌死亡，1～5 d 增長(zhǎng)較快，10 d 后全部死亡，累計(jì)校正死亡率為47.50%；接種4 齡幼蟲(chóng)2 d 后初見(jiàn)感染，11 d 后供試幼蟲(chóng)全部死亡，累計(jì)校正死亡率為41.28%；5 齡幼蟲(chóng)處理3 d 后感菌且在1～3 d 對(duì)照累計(jì)死亡率高于處理組，11 d 后幼蟲(chóng)全部死亡，累計(jì)校正死亡率僅28.50%。

圖6 凍土毛霉1×107 個(gè)/mL的孢子濃度對(duì)茴香薄翅野螟幼蟲(chóng)的致病力Fig.6 The virulence of Mucor hiemalis at 1×107 spores/mL concentration on Evergestis extimalis larvae

2.5 不同孢子濃度對(duì)茴香薄翅野螟2齡幼蟲(chóng)的毒力

隨著經(jīng)凍土毛霉侵染時(shí)間的延長(zhǎng)，凍土毛霉對(duì)茴香薄翅野螟2齡幼蟲(chóng)的LC50減小，在處理后第5天，對(duì)茴香薄翅野螟2齡幼蟲(chóng)的LC50最大，為1.38×106孢子/mL，當(dāng)侵染第8天后，對(duì)茴香薄翅野螟2齡幼蟲(chóng)的LC50最小，為1.02×105孢子/mL（表4）；凍土毛霉對(duì)茴香薄翅野螟2 齡幼蟲(chóng)的LT50隨著接種濃度的增加而縮短，當(dāng)凍土毛霉孢子濃度為108孢子/mL 時(shí)，對(duì)茴香薄翅野螟2 齡幼蟲(chóng)的LT50最短，為3.73 d，而當(dāng)凍土毛霉孢子濃度為105孢子/mL時(shí)，茴香薄翅野螟2齡幼蟲(chóng)的LT50最大，為6.74 d，見(jiàn)表5。

表4 凍土毛霉對(duì)茴香薄翅野螟2齡幼蟲(chóng)的LC50Tab.4 LC50 of Mucor hiemalis against Evergestis extimalis second instar larvae

表5 凍土毛霉對(duì)茴香薄翅野螟2齡幼蟲(chóng)的LT50Tab.5 LT50 of Mucor hiemalis against Evergestis extimalis second instar larvae

3 討論與結(jié)論

昆蟲(chóng)病原真菌資源豐富，生長(zhǎng)繁殖快易生產(chǎn)，能寄生多種昆蟲(chóng)，且害蟲(chóng)很難產(chǎn)生抗性，因此在農(nóng)林害蟲(chóng)防治上具有相當(dāng)大的優(yōu)勢(shì)[23]。生防菌株資源的發(fā)現(xiàn)及鑒定是利用昆蟲(chóng)病原真菌進(jìn)行害蟲(chóng)生物防治的基礎(chǔ)[24-25]。相較其他昆蟲(chóng)，茴香薄翅野螟的生物防治資源較為匱乏。本研究從罹病的茴香薄翅野螟幼蟲(chóng)體上分離得到了一株病原真菌，結(jié)合形態(tài)學(xué)及分子生物學(xué)鑒定為凍土毛霉（M.hiemalis），通過(guò)柯赫氏法則驗(yàn)證其致病性，結(jié)果表明菌株對(duì)茴香薄翅野螟低齡幼蟲(chóng)有較強(qiáng)致病力，對(duì)高齡幼蟲(chóng)也有一定防治效果。研究病原真菌的培養(yǎng)條件對(duì)提高其利用率具有重要意義。趙鵬飛等[26]從6 種培養(yǎng)基中篩選出寄生曲霉Q527（Aspergillus nomiusQ527）生長(zhǎng)最優(yōu)培養(yǎng)基為PDA 培養(yǎng)基；劉思雨等[27]研究發(fā)現(xiàn)，SDAY 培養(yǎng)基是金龜子綠僵菌MAXD170705 生長(zhǎng)及產(chǎn)孢的最適培養(yǎng)基，本試驗(yàn)表明在此培養(yǎng)基上凍土毛霉的表現(xiàn)相比其他培養(yǎng)基更好。近年來(lái)，許多研究表明昆蟲(chóng)病原真菌對(duì)多種鱗翅目害蟲(chóng)有較強(qiáng)的防治效果[28-31]。鄭亞強(qiáng)等[32]經(jīng)分離培養(yǎng)獲得萊氏綠僵菌（Metarhizium rileyiZYSP190701），用1×108孢子/mL 濃度接種草地貪夜蛾3齡幼蟲(chóng)7 d后，幼蟲(chóng)的感染率達(dá)100%；何勁等[33]分離獲得4株蟲(chóng)生真菌并測(cè)定菌株對(duì)小菜蛾的毒力，試驗(yàn)表明4株菌對(duì)小菜蛾都有一定毒力且致死率隨時(shí)間的延長(zhǎng)而提高，本研究結(jié)果與之相似；有研究者[34]在測(cè)定萊氏野村菌（Nomuraea rileyi）對(duì)斜紋夜蛾（Spodoptera litura）幼蟲(chóng)的致病力時(shí)發(fā)現(xiàn)菌株對(duì)2 齡幼蟲(chóng)的侵染率最高，本試驗(yàn)結(jié)果與其一致。

凍土毛霉QH01 在室內(nèi)雖對(duì)茴香薄翅野螟2～5 幼蟲(chóng)均有致病力，但對(duì)高齡幼蟲(chóng)的侵染效果不佳，因此選用2 齡幼蟲(chóng)測(cè)定菌株對(duì)其的毒力。據(jù)報(bào)道，金龜子綠僵菌CHMA-005 對(duì)茶尺蠖（Ectropis oblique）幼蟲(chóng)的LC50隨侵染時(shí)間的減少，呈現(xiàn)梯度上升趨勢(shì)[35]；雷妍圓等[36]試驗(yàn)表明萊氏綠僵菌GZSF-1對(duì)草地貪夜蛾2 齡幼蟲(chóng)第7 天的LC50是1.02×106孢子/mL，隨孢子懸浮液濃度的升高，幼蟲(chóng)的LT50縮短，當(dāng)濃度為1×109孢子/mL 時(shí)，幼蟲(chóng)的LT50為3.03 d。本研究也發(fā)現(xiàn)隨著經(jīng)凍土毛霉侵染時(shí)間的延長(zhǎng)，凍土毛霉對(duì)茴香薄翅野螟2 齡幼蟲(chóng)的LC50遞減，在侵染第8 天后，對(duì)茴香薄翅野螟2 齡幼蟲(chóng)的LC50最小，為1.02×105孢子/mL，接種濃度為108孢子/mL 時(shí)，對(duì)茴香薄翅野螟2 齡幼蟲(chóng)的LT50為3.73 d。綜上，凍土毛霉QH01 有很好的生防潛能，值得發(fā)掘利用。

毛霉菌多為腐生，廣泛應(yīng)用于發(fā)酵工程[37]，少數(shù)可致人和動(dòng)物發(fā)病[38]。但毛霉菌對(duì)害蟲(chóng)有防治效果的相關(guān)報(bào)道很少。陳健鑫等[39]在云南香格里拉叉襀科稚蟲(chóng)蟲(chóng)體上得到一株凍土毛霉，該菌在稚蟲(chóng)處于亞健康狀態(tài)及抵抗力降低時(shí)易感，會(huì)加速寄生過(guò)程使稚蟲(chóng)死亡；本試驗(yàn)表明凍土毛霉QH01 對(duì)健康的茴香薄翅野螟低齡幼蟲(chóng)有較高的致死率，用1×107孢子/mL 孢子液處理9 d 后2 齡幼蟲(chóng)的累計(jì)死亡率達(dá)71.78%，但對(duì)高齡幼蟲(chóng)的致死率較低，這種顯著差異可能歸因于不同的體壁結(jié)構(gòu)和免疫能力，鱗翅目害蟲(chóng)的低齡幼蟲(chóng)體壁比高齡幼蟲(chóng)體壁較薄，致病菌更易侵染，高齡幼蟲(chóng)的角質(zhì)層硬化增厚、免疫及代謝加強(qiáng)因而抗病性更強(qiáng)[40-41]；以108孢子/mL 凍土毛霉孢子液接種2 齡幼蟲(chóng)的LT50最短，為3.73 d，因此利用該菌株防治茴香薄翅野螟幼蟲(chóng)的適宜期是低齡幼蟲(chóng)高峰期。王燕[42]從患病韭菜遲眼蕈蚊（Bradysia odoriphaga）幼蟲(chóng)中分離到一株凍土毛霉菌，經(jīng)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)該菌對(duì)韭菜遲眼蕈蚊不同蟲(chóng)態(tài)的致病力存在顯著差異，對(duì)韭菜遲眼蕈蚊幼蟲(chóng)有較強(qiáng)致病力，而對(duì)卵及蛹的致病力相對(duì)較弱；本試驗(yàn)僅測(cè)定了菌株QH01對(duì)茴香薄翅野螟幼蟲(chóng)的致病力，對(duì)其他蟲(chóng)態(tài)的致病性需進(jìn)一步研究。許多昆蟲(chóng)病原真菌在室內(nèi)條件下具有良好的致病性，但其田間效果取決于有利的環(huán)境條件，如溫度、濕度和微生物特性等[43-44]。研究[45]表明18～28 ℃是凍土毛霉BO-1 生長(zhǎng)和產(chǎn)孢的最適溫度，經(jīng)生物測(cè)定發(fā)現(xiàn)在此溫度下該菌對(duì)韭菜遲眼蕈蚊幼蟲(chóng)的致病性高于其他溫度。但凍土毛霉QH01的生物學(xué)特性、侵染機(jī)制等尚不清楚，仍需進(jìn)一步探究。

本研究首次報(bào)道了凍土毛霉對(duì)茴香薄翅野螟幼蟲(chóng)的致病性，豐富了該蟲(chóng)的生防資源，為后續(xù)菌株對(duì)茴香薄翅野螟致病機(jī)理的深入研究奠定基礎(chǔ)，也為該蟲(chóng)生防制劑的研發(fā)、綠色防控和農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全問(wèn)題提供了理論依據(jù)。