馮友琴 張棋琦 胡永仙 黃河

嵌合抗原受體T細(xì)胞(CAR-T)治療復(fù)發(fā)難治性血液系統(tǒng)惡性腫瘤療效顯著，成為近年來(lái)腫瘤治療領(lǐng)域最重大的突破之一。據(jù)報(bào)道CD19 CAR-T治療復(fù)發(fā)難治性急性B淋巴細(xì)胞白血病(B-ALL)及復(fù)發(fā)難治性B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)的完全緩解率(CRR)分別是60%～90%[1-3]和40%～50%[4-5]；B細(xì)胞成熟抗原(BCMA)CAR-T治療復(fù)發(fā)難治性多發(fā)性骨髓瘤(RRMM)的CRR為39%～80%[6-8]；G蛋白偶聯(lián)受體C5家族亞型D蛋白(GPRC5D)CAR-T(OriCAR-017)治療RRMM的CRR/嚴(yán)格意義的CRR(sCRR)為60%(NCT05016778)；CD7 CAR-T治療復(fù)發(fā)難治性T細(xì)胞急性淋巴細(xì)胞白血病(T-ALL)或淋巴母細(xì)胞淋巴瘤(LBL)的CRR可達(dá)87.5%～94.0%[9]。盡管單靶點(diǎn)CAR-T療效顯著，但仍有部分復(fù)發(fā)難治性血液病患者存在治療無(wú)效或治療后復(fù)發(fā)。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，復(fù)發(fā)難治性B-ALL患者在使用CD19 CAR-T治療后的復(fù)發(fā)率約為17%～57%，其中CD19陰性復(fù)發(fā)率為7%～25%[1,10]。

CAR-T治療后復(fù)發(fā)是目前臨床面臨的巨大挑戰(zhàn)，其涉及機(jī)制主要包括抗原依賴性因素(抗原逃逸、抗原脫落或抗CAR抗體)及T細(xì)胞驅(qū)動(dòng)性因素(CAR-T耗竭、免疫抑制性腫瘤微環(huán)境)[11]。在血液系統(tǒng)腫瘤研究領(lǐng)域，靶抗原的缺失是最具特征的耐藥機(jī)制，靶抗原陰性克隆的復(fù)發(fā)具有多種潛在機(jī)制，如移碼/錯(cuò)義突變或可變剪接、預(yù)先存在的抗原陰性亞克隆選擇性擴(kuò)增、表位遮蔽和譜系轉(zhuǎn)換/轉(zhuǎn)分化等[12]。另有研究表明CAR-T還可通過(guò)胞啃作用將腫瘤細(xì)胞表面的靶抗原轉(zhuǎn)移到自身表面，降低腫瘤細(xì)胞上靶點(diǎn)的密度，并引起CAR-T之間相互攻擊，最終導(dǎo)致T細(xì)胞的耗竭與活性降低[13]。與單靶點(diǎn)CAR-T相比，多靶點(diǎn)CAR-T可降低抗原丟失的可能性，并可增加其抗腫瘤活性[13-14]。目前雙靶點(diǎn)CAR-T研發(fā)及臨床轉(zhuǎn)化日漸增多，從報(bào)道的綜合臨床數(shù)據(jù)可看出，雙靶點(diǎn)CAR-T展現(xiàn)出極富前景的應(yīng)用價(jià)值。本綜述總結(jié)了目前應(yīng)用多靶點(diǎn)CAR-T治療復(fù)發(fā)難治性血液系統(tǒng)惡性腫瘤臨床轉(zhuǎn)化研究的最新進(jìn)展。

一、多靶點(diǎn)CAR-T結(jié)構(gòu)

用于構(gòu)建多靶點(diǎn)CAR-T的CAR結(jié)構(gòu)主要包括：雞尾酒/序貫CAR、共轉(zhuǎn)導(dǎo)型CAR、并聯(lián)型CAR、二價(jià)串聯(lián)型CAR、二價(jià)環(huán)形CAR。

1.雞尾酒/序貫CAR(圖1A)：分別用兩種不同病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)的T細(xì)胞可產(chǎn)生兩種單獨(dú)的CAR-T產(chǎn)品，然后將兩種單獨(dú)的CAR-T以1∶1的比例混合在一起，同時(shí)或序貫輸注[15-16]。該方式可靈活調(diào)整組合和劑量，但生產(chǎn)成本高，從臨床實(shí)踐觀察，兩個(gè)CAR-T共同或序貫回輸，可能以某一靶點(diǎn)CAR起主要作用。

2.共轉(zhuǎn)導(dǎo)型CAR(圖1B)：用兩個(gè)病毒載體同時(shí)共轉(zhuǎn)導(dǎo)，每個(gè)載體編碼一個(gè)單獨(dú)的CAR結(jié)構(gòu)。其最終的混合產(chǎn)物中包含兩個(gè)單獨(dú)的單靶點(diǎn)CAR-T和一個(gè)雙靶點(diǎn)CAR-T[16]。但細(xì)胞產(chǎn)品中會(huì)存在沒(méi)有轉(zhuǎn)上CAR的T細(xì)胞，質(zhì)控比較困難。

3.并聯(lián)型CAR(圖1C)：即雙順?lè)醋覥AR，帶有不同單鏈抗體片段(scFv)的CAR分子轉(zhuǎn)入同一個(gè)T細(xì)胞，其中每個(gè)CAR靶向不同的抗原結(jié)合域，且具有各自獨(dú)立的信號(hào)傳導(dǎo)途徑[16-18]。但CAR分子較大易導(dǎo)致病毒包裝或轉(zhuǎn)導(dǎo)效率出現(xiàn)問(wèn)題，且兩個(gè)胞內(nèi)信號(hào)更易導(dǎo)致CAR-T耗竭。

4.二價(jià)環(huán)形或串聯(lián)型CAR(圖1D、1E)：將一個(gè)二價(jià)病毒載體引入T細(xì)胞而產(chǎn)生雙結(jié)構(gòu)域。根據(jù)scFv的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)和重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)排列順序的不同，可分為兩種結(jié)構(gòu)：串聯(lián)和環(huán)形CAR。兩種結(jié)構(gòu)的胞內(nèi)均只有一個(gè)共同的信號(hào)傳導(dǎo)途徑[18-19]。串聯(lián)結(jié)構(gòu)是由一個(gè)scFv的VL-VH直接連接另一個(gè)scFv的VL-VH，而環(huán)狀結(jié)構(gòu)則由一個(gè)scFv的VL-VH夾在另一個(gè)scFv的VH-VL中間形成。該類型CAR-T胞外結(jié)構(gòu)復(fù)雜，質(zhì)粒構(gòu)建難度大。

二、多靶點(diǎn)CAR-T臨床研究進(jìn)展

截至目前，多靶點(diǎn)CAR-T治療復(fù)發(fā)難治性血液病的臨床研究已取得重大進(jìn)展。同時(shí)靶向CD19/CD20、CD19/CD22、CD19/BCMA或BCMA/CS1的雙靶點(diǎn)CAR-T在通過(guò)臨床前研究證實(shí)具有強(qiáng)大的抗腫瘤活性后已進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段。本部分舉例綜述在不同血液系統(tǒng)腫瘤中多靶點(diǎn)CAR-T臨床試驗(yàn)的安全性與療效。見(jiàn)表1。

1.復(fù)發(fā)難治性惡性B細(xì)胞血液系統(tǒng)腫瘤：多項(xiàng)CD19/CD20及CD19/CD22雙靶點(diǎn)CAR-T臨床試驗(yàn)公布的結(jié)果表明,二者治療復(fù)發(fā)難治性B-NHL、復(fù)發(fā)難治性B-ALL均具有較高的緩解率且不良反應(yīng)可控，同時(shí)也是目前開(kāi)展最多的雙靶點(diǎn)CAR-T治療臨床試驗(yàn)。韓衛(wèi)東教授團(tuán)隊(duì)在2017年5月發(fā)起了一項(xiàng)開(kāi)放標(biāo)簽、單臂Ⅰ/Ⅱ期臨床試驗(yàn)(NCT03097770)，以評(píng)估CD19/CD20雙靶點(diǎn)CAR-T(TanCAR7-T)治療B-NHL的療效及安全性[19]。截至2021年3月，研究共入組87例患者，總緩解率(ORR)達(dá)78%，CRR可達(dá)70%。9例患者發(fā)生3～4級(jí)CRS，僅2例患者發(fā)生3級(jí)神經(jīng)系統(tǒng)反應(yīng)(癲癇)且不良反應(yīng)可控。中位隨訪27.7個(gè)月，仍有60%的患者維持持續(xù)緩解。

早在2020年4月韓衛(wèi)東教授團(tuán)隊(duì)率先證實(shí)了CD19/CD22的雙特異性CAR-T治療B-ALL的安全性和有效性[20]。我中心團(tuán)隊(duì)近期開(kāi)展了一項(xiàng)開(kāi)放標(biāo)簽、劑量遞增的Ⅰ期臨床試驗(yàn)(NCT04227015)，以評(píng)估CRISPR/Cas9基因編輯的通用型CD19/CD22雙靶點(diǎn)CAR-T(CTA101)治療復(fù)發(fā)難治性急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)的療效和安全性。截至2020年8月，研究共入組6例患者，輸注后的CRR為83.3%，中位隨訪4.3個(gè)月，獲得CR或CR伴不完全血液學(xué)緩解(CRi)的5例患者中有3例微小殘留病灶(MRD)持續(xù)陰性[21]。

2.復(fù)發(fā)難治性惡性漿細(xì)胞血液系統(tǒng)腫瘤：Ide-cel是第一個(gè)被美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)批準(zhǔn)用于治療RRMM的BCMA CAR-T產(chǎn)品，其療效顯著、不良反應(yīng)可控[6]。但單靶點(diǎn)BCMA CAR-T治療后仍有約45%患者出現(xiàn)腫瘤復(fù)發(fā)[22]，其中4%～33%CAR-T治療后復(fù)發(fā)的患者出現(xiàn)BCMA抗原的丟失或下調(diào)[6,23]。同時(shí)研究發(fā)現(xiàn)其他漿細(xì)胞標(biāo)志物和潛在的免疫治療靶標(biāo)，如CD38和CS1(SLAMF7)在疾病進(jìn)展過(guò)程中仍穩(wěn)定表達(dá)[24]。這些現(xiàn)象均表明靶向多種漿細(xì)胞抗原的CAR-T療法可能是避免抗原逃逸的一種可行方法。

基于該現(xiàn)象胡豫教授團(tuán)隊(duì)設(shè)計(jì)了BCMA/CD38雙靶點(diǎn)CAR-T，在體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)中評(píng)估其治療的有效性和安全性后，發(fā)起一項(xiàng)BCMA/CD38 CAR-T治療RRMM臨床試驗(yàn)(ChiCTR1800018143)。該研究共入組23例患者，中位隨訪9個(gè)月，12例(52%)患者達(dá)sCR，另有4例(17%)獲得非常好的部分緩解(VGPR)及4例(17%)出現(xiàn)部分緩解(PR)。87%的患者出現(xiàn)CRS，≥3級(jí)CRS僅22%，未發(fā)生任何級(jí)別神經(jīng)不良反應(yīng)。此外，該研究還發(fā)現(xiàn)BM38 CAR-T在9個(gè)月、12個(gè)月時(shí)可分別在77.8%、62.2%的患者體內(nèi)檢測(cè)得到，表明其在體內(nèi)持久性較好[17]。

2022年第27界歐洲血液學(xué)年會(huì)(EHA)公布了GC012F的臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)，這是一款可由亙喜生物FasTCAR平臺(tái)開(kāi)發(fā)的靶向BCMA/CD19雙靶點(diǎn)自體CAR-T。該研究共入組28例復(fù)發(fā)難治性B-NHL患者，中位隨訪6.3個(gè)月，不同劑量水平(DL)的ORR分別為100.0%(DL1)、80.0%(DL2)及93.8%(DL3)，75%患者獲得sCR。3級(jí)以上CRS只有7.1%，且所有患者均未發(fā)生任何級(jí)別神經(jīng)不良反應(yīng)(NCT04236011；NCT04182581)。此外第27屆EHA還公布了BCMA/CS1雙靶點(diǎn)CAR-T臨床試驗(yàn)結(jié)果，共入組13例RRMM患者，其ORR和CRR分別為76.9%和30.8%。31%的患者發(fā)生CRS，未見(jiàn)神經(jīng)不良反應(yīng)(NCT04662099)。

圖1 多靶點(diǎn)CAR-T結(jié)構(gòu)(A:雞尾酒/序貫CAR；B：共轉(zhuǎn)導(dǎo)型CAR；C:并聯(lián)型CAR;D:二價(jià)環(huán)形CAR；E：二價(jià)串聯(lián)型CAR)

表1 多靶點(diǎn)CAR-T治療的臨床試驗(yàn)

3.多靶點(diǎn)CAR-T治療其他復(fù)發(fā)難治性惡性血液系統(tǒng)腫瘤：相比B細(xì)胞血液系統(tǒng)惡性腫瘤，雙靶點(diǎn)CAR-T治療復(fù)發(fā)難治性急性髓系、T細(xì)胞性血液系統(tǒng)惡性腫瘤面臨更多挑戰(zhàn)。

CAR-T治療復(fù)發(fā)難治性急性髓系白血病(AML)的主要障礙在于AML細(xì)胞異質(zhì)性較大、缺少高度特異性靶點(diǎn)。AML細(xì)胞上各種表面抗原如CD123、CD34、CD33等，同時(shí)也在正常的造血干細(xì)胞、髓系和(或)淋巴祖細(xì)胞上表達(dá)[25]，針對(duì)這些靶點(diǎn)的CAR-T治療相關(guān)不良反應(yīng)較大。此外有研究發(fā)現(xiàn)AML細(xì)胞可分泌抑制T細(xì)胞增殖的免疫抑制因子，影響CAR-T在體內(nèi)的擴(kuò)增[26]。CAR-T治療T-ALL或T細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤(T-NHL)面臨的亟需解決的問(wèn)題主要有CAR-T的自相殘殺、患者T細(xì)胞缺乏、T細(xì)胞性再生障礙性貧血及制備的自體CAR-T易被惡性T細(xì)胞污染等問(wèn)題[27]。CAR-T治療急性髓系、T細(xì)胞血液系統(tǒng)腫瘤有待尋找合適的靶點(diǎn)及改進(jìn)制備工藝。

國(guó)內(nèi)一款靶向CLL1/CD33的CAR-T在治療復(fù)發(fā)難治性AML中顯示出積極療效。西部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院劉芳教授團(tuán)隊(duì)率先證實(shí)CLL1/CD33雙靶點(diǎn)CAR-T在小鼠體內(nèi)具有強(qiáng)大的抗腫瘤活性，隨后于2020年EHA上公布了該雙靶點(diǎn)CAR-T的Ⅰ期臨床研究數(shù)據(jù)，入組的9例復(fù)發(fā)難治性AML患者中7例達(dá)到CR，88.8%患者發(fā)生CRS但不良反應(yīng)可控(NCT03795779)。其余針對(duì)復(fù)發(fā)難治性AML治療的雙靶點(diǎn)如CD123/CLL1(NCT03631576)、CD123/CD33(NCT04156256)也已顯示出初步的療效和安全性，相關(guān)數(shù)據(jù)尚未證實(shí)發(fā)布。

三、多靶點(diǎn)CAR-T臨床前研究進(jìn)展

雖然多靶點(diǎn)CAR-T治療復(fù)發(fā)難治性血液病取得了較大進(jìn)展，但同樣面臨著相應(yīng)的臨床挑戰(zhàn)，如脫靶效應(yīng)、制備困難等。越來(lái)越多的研究者致力于新型多靶點(diǎn)CAR-T的研發(fā)，包括BAFF CAR-T治療RRMM、CRISPR/Cas9基因敲除CD5/CD7 CAR-T治療T-ALL及三靶點(diǎn)CAR-T治療復(fù)發(fā)難治性血液病等。同時(shí)越來(lái)越多的研究通過(guò)優(yōu)化多靶點(diǎn)CAR-T的結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)以減少不良反應(yīng)的發(fā)生。

1.BAFF CAR-T/APRIL CAR-T：B細(xì)胞激活因子(BAFF，BlyS)和增殖誘導(dǎo)配體(APRIL)是腫瘤壞死因子(TNF)超家族的兩個(gè)同源成員，BAFF可與表達(dá)在成熟B細(xì)胞上的3個(gè)受體BAFF-R、BCMA和穿膜蛋白活化物(TACI)結(jié)合，ARPIL可與BCMA、TACI結(jié)合，啟動(dòng)下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)以促進(jìn)惡性漿細(xì)胞的增殖與存活[28]。以BAFF或APRIL作為CAR-T胞外識(shí)別結(jié)構(gòu)域，相當(dāng)于可同時(shí)靶向腫瘤的多個(gè)抗原，在治療多種B細(xì)胞腫瘤時(shí)可起協(xié)同作用。BAFF CAR-T尚處于臨床前研究階段，Wong及其研究團(tuán)隊(duì)[29]設(shè)計(jì)了基于BAFF配體的CAR構(gòu)建體，利用非病毒TcBuster轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)將BAFF CAR整合到T細(xì)胞中，體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)均證實(shí)BAFF CAR-T具有顯著的抗腫瘤能力。我中心開(kāi)展的APRIL CAR-T治療RRMM研究已轉(zhuǎn)化臨床(NCT04657861)，相關(guān)數(shù)據(jù)尚未正式公布。

2.雙特異性及分離型(Biss)CAR-T：2020年He等[30]構(gòu)建出BissCAR，主要由P2A(linker)連接納米抗體Nb157、CD3ζ和anti-TIM3-scFv、CD28、4-1BB。P2A自剪切后BissCAR最終會(huì)分裂成兩個(gè)CAR。Nb157是由作者開(kāi)發(fā)的序列腫瘤選擇抗體和抗原檢索(STAR)技術(shù)篩選出來(lái)的納米抗體，能特異性識(shí)別在AML細(xì)胞上高表達(dá)的CD13。為了成功靶向耐藥AML干細(xì)胞而不“誤殺”正常骨髓造血干細(xì)胞，研究者選擇了T細(xì)胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(TIM3,在骨髓造血干細(xì)胞低表達(dá)或不表達(dá))作為另一種共刺激信號(hào)的靶抗原。實(shí)驗(yàn)證實(shí)BissCAR-T未攻擊K562-TIM3(CD13-TIM3+)系細(xì)胞，對(duì)NB4(CD13+TIM3-)系細(xì)胞僅表現(xiàn)出很低的殺傷作用，而對(duì)NB4-TIM3(CD13+TIM3+)系細(xì)胞卻表現(xiàn)出最大的細(xì)胞毒性[30]。同時(shí)靶向CD13和TIM3的BissCAR-T可根除AML細(xì)胞，且對(duì)正常造血干細(xì)胞影響較小，具有更高的臨床安全性。

3.synNotch “AND-gate” CAR-T：2017年Morsut等[31]在《Cell》上發(fā)布了一項(xiàng)研究，首次設(shè)計(jì)了一種基于Notch的組裝式受體即synNotch受體。隨后該團(tuán)隊(duì)利用這一平臺(tái)設(shè)計(jì)了synNotch “AND-gate” CAR系統(tǒng)，其識(shí)別抗原A的人工受體synNotch基因，包含了抗原A的識(shí)別片段及啟動(dòng)抗原B識(shí)別CAR基因轉(zhuǎn)錄的轉(zhuǎn)錄因子。裝載synNotch系統(tǒng)的CAR-T只能識(shí)別和殺傷同時(shí)表達(dá)抗原A和B的腫瘤細(xì)胞[32]。該策略為CAR-T的精準(zhǔn)識(shí)別和治療提供了新模式。

4.抑制型CAR-T：當(dāng)某種抗原在腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞上同時(shí)表達(dá)時(shí)，CAR-T治療可能會(huì)引起脫靶效應(yīng)，產(chǎn)生相應(yīng)的不良反應(yīng)。早在2013年就有研究者開(kāi)發(fā)了一種抑制型CAR-T(iCAR)，在CAR-T中同時(shí)表達(dá)CAR和iCAR。iCAR是經(jīng)過(guò)改造的抑制性受體[如程序性死亡受體1(PD-1)、細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4(CTLA-4)],能夠識(shí)別正常組織呈遞的抗原。這種CAR-T作用于正常細(xì)胞時(shí)活性會(huì)被抑制，從而精確靶向腫瘤細(xì)胞，發(fā)揮殺傷的作用[33]。此外，有些抗原在正常細(xì)胞中表達(dá)而在腫瘤細(xì)胞中不表達(dá)，利用這一特性，synNotch “OFF-gate” CAR-T在作用于正常細(xì)胞時(shí)可實(shí)現(xiàn)將synNotch通路激活的基因變成促凋亡相關(guān)基因，從而使T細(xì)胞發(fā)生凋亡，避免細(xì)胞治療中交叉反應(yīng)而導(dǎo)致的不良反應(yīng)[34]。抑制型CAR-T及synNotch “OFF-gate” CAR-T均為解決脫靶效應(yīng)提供了新的策略。

5.CRISPR/Cas9基因編輯CAR-T：正如上述提及，CAR-T療法對(duì)于復(fù)發(fā)難治性T細(xì)胞血液系統(tǒng)腫瘤效果欠佳。針對(duì)CAR-T自殺傷這一問(wèn)題，近期有研究在雙特異性CAR的慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)之前進(jìn)行基于CRISPR/Cas9的CD5和CD7基因敲除，功能實(shí)驗(yàn)證實(shí)基因敲除對(duì)細(xì)胞無(wú)明顯影響。且隨后的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)證實(shí)相較于并聯(lián)型CAR-T，串聯(lián)型CD5/CD7 CAR-T具有更高的殺傷活性，且能夠更有效地防止腫瘤逃逸[35]?；贑RISPR/Cas9基因編輯的CD5/CD7雙靶點(diǎn)CAR-T研究結(jié)果為T(mén)細(xì)胞血液系統(tǒng)腫瘤的免疫治療提供了新的方向。

6.三靶點(diǎn)CAR-T：在雙靶點(diǎn)CAR-T療法取得積極成果的同時(shí)，三靶點(diǎn)CAR-T的臨床前研究也取得相應(yīng)進(jìn)展。在一項(xiàng)新的研究中，Lentigen研究人員開(kāi)發(fā)出三特異性duoCAR-T ，由靶向CD19和CD20的串聯(lián)CAR通過(guò)P2A自裂解肽連接到另一種靶向CD22的CAR上組成，且證實(shí)最有效的duoCAR結(jié)構(gòu)包含ICOS、OX40或CD27共刺激域，而不是CD28或4-1BB。體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)證實(shí)duoCAR-T擁有較高的抗腫瘤效力和持久性，同時(shí)克服了腫瘤異質(zhì)性和腫瘤抗原逃逸的臨床挑戰(zhàn)[36]。三靶點(diǎn)CAR-T療法無(wú)疑是在雙靶點(diǎn)CAR-T的基礎(chǔ)上進(jìn)一步降低了因抗原逃逸或丟失導(dǎo)致的復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)，深度消除腫瘤細(xì)胞。但目前該技術(shù)還處于臨床前研發(fā)階段，仍需大量研究以評(píng)估其臨床前毒性、產(chǎn)品開(kāi)發(fā)工藝與質(zhì)控、適應(yīng)證人群、給藥劑量等問(wèn)題。

四、總結(jié)與展望

雖然CAR-T治療在復(fù)發(fā)難治性血液系統(tǒng)惡性腫瘤中取得了卓越的療效，但CAR-T治療后復(fù)發(fā)的問(wèn)題依然嚴(yán)峻。與單靶點(diǎn)CAR-T相比，多靶點(diǎn)CAR-T主要的優(yōu)勢(shì)在于可減少腫瘤細(xì)胞的抗原逃逸。雙靶點(diǎn)CAR-T治療的療效已在部分臨床試驗(yàn)中得到了驗(yàn)證，同時(shí)各個(gè)臨床試驗(yàn)報(bào)道的嚴(yán)重CRS和ICANS等不良反應(yīng)的發(fā)生率也較低。多靶點(diǎn)CAR-T可能成為未來(lái)細(xì)胞免疫治療領(lǐng)域研究的趨勢(shì)。

盡管如此，多靶點(diǎn)CAR-T治療仍面臨著前所未有的挑戰(zhàn)。首當(dāng)其沖的是靶點(diǎn)的選擇與驗(yàn)證。B細(xì)胞血液系統(tǒng)腫瘤潛在免疫治療靶點(diǎn)眾多，如何優(yōu)化靶點(diǎn)選擇以更好提高療效，還需更多基礎(chǔ)研究與臨床研究相結(jié)合。對(duì)于髓系血液系統(tǒng)腫瘤中雙靶點(diǎn)的合理選擇，如靶向CD33/TIM3或CLL1/TIM3仍待進(jìn)一步探究。另一個(gè)亟需解決的問(wèn)題是多靶點(diǎn)結(jié)構(gòu)的優(yōu)化。正如上述提到串聯(lián)型雙靶點(diǎn)CAR-T的療效優(yōu)于并聯(lián)型，但串聯(lián)型CAR-T開(kāi)發(fā)難度較大，linker的選擇也是需要關(guān)注的問(wèn)題。最后就是新型CAR-T的技術(shù)優(yōu)化與產(chǎn)品開(kāi)發(fā)。自體CAR-T面臨較多缺陷，如難以采集足夠多的外周血T細(xì)胞、自體CAR-T不能大規(guī)模生產(chǎn)及從采集到制備耗時(shí)較長(zhǎng)等問(wèn)題，通用型多靶點(diǎn)CAR-T和誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(iPSCs)來(lái)源的多靶點(diǎn)CAR-T為細(xì)胞治療領(lǐng)域開(kāi)辟了新的治療方向。