陳亞強(qiáng)，彭津津

（重慶三峽職業(yè)學(xué)院，重慶 404100）

隨著國內(nèi)禁止在畜禽生產(chǎn)中添加促生長類飼料添加劑以來，其替代品研究受到越來越廣泛的關(guān)注，如何制備能提高動物生產(chǎn)性能、增強(qiáng)免疫力的替代品是畜牧業(yè)健康發(fā)展亟待解決的問題。五倍子是我國傳統(tǒng)中藥，占世界總產(chǎn)量的95%，其最多的活性成分為單寧酸（GTA），具有顯著的抗氧化、抗炎癥、抗病毒、抗腫瘤和改善腸道微生態(tài)環(huán)境等多種作用（茍昌勇，2021）。近年來，國內(nèi)外多個研究表明，以GTA作為飼料添加劑能提高動物生產(chǎn)性能及免疫力水平（童玉鑫等，2022）。此外，五倍子對口腔疾病有多方面功能，由此制成五倍子凝膠有利于口腔保?。▌⒂衩泛托祆o舒，2017）。因此，本試驗(yàn)以斷奶仔豬為研究對象，探討前期研制的GTA凝膠對仔豬生長性能、血液生化指標(biāo)及免疫指標(biāo)的影響，以期為GTA凝膠作為新型添加劑在動物養(yǎng)殖中的應(yīng)用提供理論支撐。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 GTA購自西安西奧生物科技有限公司，水解單寧酸含量為50%；28日齡斷奶仔豬（杜×長×大）購自重慶萬州德康農(nóng)牧科技有限公司；牙齦卟啉單胞菌（ATCC33277）、具核梭桿菌（ATCC23276）由華南農(nóng)業(yè)大學(xué)提供；牛心腦浸液肉湯購自Sigma公司。

1.2 凝膠制備 將N-甲基吡咯烷酮、三乙酸甘油酯按7∶3配成混合溶劑，加入35%濃度的聚乳酸-羥基乙酸共聚物，靜置，待完全溶解后加入GTA，攪拌均勻，制成含GTA終末濃度為80 g/kg的凝膠，常溫避光，連續(xù)緩慢攪拌5 d，4℃避光保存。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 制備終濃度為8%的GTA凝膠；采用單因素完全隨機(jī)試驗(yàn)設(shè)計(jì)，將72頭體重相近健康斷奶仔豬分為4組，每組3個重復(fù)，每重復(fù)6頭豬（公母各半），分別為空白組（不飼喂凝膠），對照組（飼喂空白凝膠），凝膠1組（GTA凝膠300 mg/kg·bw），凝膠2組（GTA凝膠600 mg/kg·bw），均在采食后飼喂給仔豬。試驗(yàn)周期28 d。

參照NRC（2012）豬營養(yǎng)需要和《中國飼料成分及營養(yǎng)價值表》（2018）設(shè)計(jì)玉米-豆粕型基礎(chǔ)飼糧，營養(yǎng)水平參考發(fā)表文獻(xiàn)（茍昌勇，2021；鄧文等，2018）。

1.4 飼養(yǎng)管理 在重慶和厚農(nóng)牧發(fā)展有限公司進(jìn)行動物試驗(yàn)。試驗(yàn)豬均在同一圈舍，每個重復(fù)組在同一欄，圈舍通風(fēng)采光良好，每日上午7：30（使用凝膠）、11：00和下午 2：00、7：30（使用凝膠）進(jìn)行4次飼喂，向采食后仔豬口腔注入終濃度為8%的GTA凝膠，自由采食飲水。按照常規(guī)操作進(jìn)行飼養(yǎng)管理，每日觀察豬群健康。

1.5 測定指標(biāo)

1.5.1 生長性能 在試驗(yàn)開始前和結(jié)束當(dāng)天清晨，空腹稱重試驗(yàn)豬，記錄初重、末重，并記錄日耗料量，計(jì)算平均日增重、平均日采食量和耗料增重比，具體公式如下：

平均日增重=（末重－初重）/試驗(yàn)天數(shù)；

平均日采食量=耗料量/（試驗(yàn)天數(shù)×試驗(yàn)頭數(shù)）；

耗料增重比=耗料量/增重；

1.5.2 血液生化指標(biāo) 試驗(yàn)結(jié)束時，每個重復(fù)選取中等體重的3頭豬，采血10 mL，3 000 r/min離心10 min，-20℃保存，試劑盒測定血清中總蛋白、總膽固醇、尿素氮、血糖等指標(biāo)。

1.5.3 免疫指標(biāo) ELISA法測定上述血清的IgA、IgM、IgG、IFN-γ、IL-1。

1.5.4 體外抑菌試驗(yàn) 取牙齦卟啉單胞菌、具核梭桿菌菌株分別接種于牛心腦浸液肉湯培養(yǎng)基，37 ℃ 厭氧（80%N2、10%H2、10%CO2）培 養(yǎng) 48 h，將細(xì)菌密度調(diào)整為1.5×108CFU/mL，均勻涂布培養(yǎng)基，厭氧培養(yǎng)48 h。

將濾紙裁制成大小相同圓片，分別滴加GTA凝膠、生理鹽水、2%洗必泰，放置于3個上述制備的培養(yǎng)基，37℃厭氧培養(yǎng)4 d，測抑菌圈直徑。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析 采用SPSS 21.0進(jìn)行單因素方差分析，采用Duncan’s法進(jìn)行多重比較，數(shù)據(jù)結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，P＜0.05表示組間差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 對仔豬生長性能的影響 由表1可知，凝膠1組和凝膠2組能顯著提高仔豬日增重和平均日采食量（P＜0.05），凝膠2組能顯著降低耗料增重比（P ＜ 0.05）。

表1 GTA凝膠對仔豬生長性能的影響

2.2 對仔豬血清生化指標(biāo)的影響 由表2可知，凝膠1組能顯著降低血漿BUN濃度（P＜0.05），凝膠2組能顯著提高血漿TP濃度（P＜0.05）、極顯著降低血漿BUN濃度（P＜0.01）；對血漿TC、GLU濃度無顯著影響（P＞0.05）。

表2 GTA凝膠對仔豬血清生化指標(biāo)的影響

2.3 對仔豬免疫指標(biāo)的影響 由表3可知，凝膠1組能顯著提高血漿IgA、IgM、IgG濃度（P＜0.05）；凝膠2組能顯著提高血漿IgA、IgG、IFN-γ濃度（P＜0.05），極顯著提高血漿IgM濃度（P＜0.01），極顯著降低血漿IL-1β濃度（P＜ 0.01）。

表3 GTA凝膠對仔豬免疫指標(biāo)的影響

2.4 體外抑菌試驗(yàn)結(jié)果 由表4可知，GTA凝膠對牙齦卟啉單胞菌的抑菌圈大小為2.9 mm，對具核梭桿菌的抑菌圈大小為3.5 mm。

表4 GTA凝膠體外抑菌試驗(yàn)結(jié)果 mm

3 討論

凝膠制備飼料是目前仔豬飼料的發(fā)展趨勢之一（Miriam等，2012）。本研究制備的GTA凝膠在采食后直接注入口腔，主要考慮仔豬采食特點(diǎn)及口腔護(hù)理兩方面需求。

單寧是單胃動物的“抗?fàn)I養(yǎng)因子”，能抑制動物生長（鄭翠玲，2022）。但近幾年研究表明，日糧添加GTA具有改善動物生長性能、調(diào)節(jié)腸道菌群及免疫促進(jìn)作用（Huang Q等，2018）。胡成等（2021）按照0.1%添加單寧酸至仔豬日糧，測得70日齡體重增加7.46 kg，且腹瀉率顯著降低。李建光等（2021）研究發(fā)現(xiàn)，五倍子單寧酸能顯著提高仔豬日增重，且顯著優(yōu)于氧化鋅，并能減少腹瀉，提高仔豬生長性能。本研究發(fā)現(xiàn)，凝膠2組不僅能顯著提高仔豬日增重和平均日采食量，且能顯著降低耗料增重比。

血液生化指標(biāo)具有指示機(jī)體健康的作用，如TP反映蛋白質(zhì)吸收、TC反映脂代謝、BUN反映了腎臟代謝、GLU反映糖代謝。宋妍妍等（2021）研究發(fā)現(xiàn)，0.51%的五倍子單寧酸添加能損傷仔豬肝臟，0.1%則無影響。鄭翠玲（2022）研究發(fā)現(xiàn)，飼喂五倍子提取物能顯著提高仔豬血液總蛋白和球蛋白濃度，顯著降低尿素氮濃度。本研究同樣證實(shí)五倍子單寧酸對仔豬肝臟代謝有促進(jìn)作用，且使用劑量對仔豬肝臟無損害。

當(dāng)機(jī)體受到抗原侵入時，IgG、IgA、IgM發(fā)揮著重要的免疫防御功能（Cheng Y等，2020）。解湧芳（2022）研究表明，添加2%或4%的單寧酸能使綿羊IgA、IgG、IgM含量顯著提高。IL-1β是一種促炎細(xì)胞因子，可加劇炎癥反應(yīng)。IFN-γ是抗炎因子，若IL-1β濃度降低、IFN-γ濃度提高能反映免疫應(yīng)答增強(qiáng)（范秋麗等，2022）。童玉鑫等（2022）研究表明，GTA顯著增加脾臟IFN-γ的mRNA表達(dá)，從而提高免疫應(yīng)答。范秋麗等（2022）在研究發(fā)現(xiàn)，添加250 mg/kg和500 mg/kg五倍子提取物能顯著提高空腸分泌型免疫球蛋白A和IFN-γ含量，且顯著降低IL-1β、IL-8和TNF-α濃度。本研究的兩個試驗(yàn)組均能顯著提高血漿IgA、IgM、IgG濃度，且凝膠2組能顯著提高血漿IFN-γ濃度，極顯著提高IgM濃度，極顯著降低血漿IL-1β濃度，由于IFN-γ和IgM多在脾臟生成，因此，凝膠2組是否能增強(qiáng)脾臟功能有待于進(jìn)一步研究。

本研究以2%洗必泰作為陽性對照，發(fā)現(xiàn)GTA凝膠對牙齦卟啉單胞菌和具核梭桿菌均有較好的抑菌效果，可同時作為預(yù)防口腔疾病的藥物使用。

4 結(jié)論

GTA凝膠可有效提高仔豬生長性能、代謝水平和免疫能力，最佳使用量為600 mg/kg·bw，且具備一定的預(yù)防口腔疾病作用。