侯文，盧建森，左懷文，劉宏勝（天津市第一中心醫(yī)院國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)危重病急救醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300192）

肝缺血/再灌注損傷 （hepatic ischemia /reperfusion injury，HIRI）是指肝臟在短暫失去血液供應(yīng)之后血液再灌注時(shí)肝細(xì)胞出現(xiàn)的不同程度的凋亡和壞死，使肝功能受損加重的過程，多見于肝移植、肝切除、失血性休克或創(chuàng)傷等過程［1］。HIRI 是手術(shù)后發(fā)生肝衰竭和死亡的關(guān)鍵因素［2］，因此，HIRI是近年來醫(yī)學(xué)科研學(xué)者一直在探索研究的熱點(diǎn)課題之一。所以，探尋HIRI 的病理機(jī)制與防治方法對(duì)提高肝臟外科手術(shù)的成功率具有重要的意義。

HIRI 是臨床上一種常見的病理生理現(xiàn)象，其發(fā)病機(jī)制尚未完全清楚，且無很好的防治手段［3］。近年來應(yīng)對(duì)HIRI 的干預(yù)方法主要有缺血預(yù)處理、藥物干預(yù)及單克隆抗體、信號(hào)通路抑制劑、細(xì)胞因子拮抗劑、基因敲除、RNA 干擾等［4］。目前關(guān)于HIRI 發(fā)生的機(jī)制主要包括氧化應(yīng)激、補(bǔ)體激活、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、炎性因子釋放及細(xì)胞凋亡［5-7］。但這些科研思路和方法大多還處于科研研發(fā)階段，真正用于臨床發(fā)揮療效還任重而道遠(yuǎn)。

熊果酸（ursolic acid， UA）是一類五環(huán)三萜類化合物，具有顯著的生物活性并廣泛存在于自然界各種水果、蔬菜和藥用植物中［8-10］。生理活性主要有抗氧化、抗炎、抗腫瘤、抗病毒、抗菌等藥理作用［11］。目前UA 在干預(yù)疾病研究方面的報(bào)道主要包括Mazumder 等［12］報(bào)道UA 能減輕糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生；Kim 等［13］報(bào)道UA 降低MCF-7 細(xì)胞來源的乳腺癌干細(xì)胞樣細(xì)胞的增殖；此外，UA 在直腸癌、肺癌、皮膚癌等腫瘤疾病均具有不同程度的干預(yù)作用［14-16］。UA 在干預(yù)臨床各種疑難雜癥中發(fā)揮著廣泛的藥理作用，非常值得進(jìn)一步探究在其他病癥中潛在的藥理作用及分子機(jī)制。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的概念是英國(guó)藥理學(xué)家Hopkins［17］在2007 年提出的，其闡明疾病的發(fā)生是人體相互作用的多基因、多功能蛋白、多通路相互作用的動(dòng)態(tài)平衡被打亂所造成的結(jié)果，也就是說發(fā)生疾病的分子基礎(chǔ)是多維的。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)能從分子、基因水平層面分析藥物單一成分作用于不同靶點(diǎn)、細(xì)胞和器官的特點(diǎn)，系統(tǒng)地預(yù)測(cè)和揭示藥物的作用和機(jī)制，從而評(píng)估藥物的療效、不良反應(yīng)及發(fā)現(xiàn)高效低毒的新藥。因此，這種研究方式為傳統(tǒng)中藥的研發(fā)帶來了巨大的轉(zhuǎn)機(jī)與希望［18］。

本項(xiàng)目前期的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，HIRI + UA 組能顯著降低小鼠血清中丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase，ALT）、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（aspartate transaminase，AST）的表達(dá)，且與HIRI 組比較具有顯著性差異（P ＜0.01），表明UA 能有效干預(yù)小鼠HIRI 的發(fā)生。因此，我們運(yùn)用生物信息網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)進(jìn)一步探討UA 減輕HIRI 發(fā)生的潛在機(jī)制，為臨床研制干預(yù)HIRI 的新藥提供理論參考。

1 資料與方法

1.1 材料：熊果酸（北京索萊寶科技有限公司），批號(hào)：SU8082，純度≥98%；羧甲基纖維素鈉（北京索萊寶科技有限公司），批號(hào)：316X021；EDTA 抗原修復(fù)液 （Servicebio，pH ＝9.0），批號(hào)：G1203；4%多聚甲醛（Servicebio），批號(hào)：G1101；PTGS2（Servicebio），批號(hào)：GB113892；HRP-山羊抗兔二抗（Servicebio），批號(hào)：GB23303；組化試劑盒DAB 顯色劑 （Servicebio），批號(hào)：G1211。

病理切片機(jī)，上海徠卡儀器有限公司，型號(hào)：RM2016；包埋機(jī)，武漢俊杰電子有限公司，型號(hào)：JB-P5；顯微鏡，Nikon，型號(hào)：E100；成像系統(tǒng)，尼康，型號(hào)：Nikon DS-U3。

1.2 動(dòng)物與實(shí)驗(yàn)用藥：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所提供，許可證號(hào)：SCXK（京）2014-0004。雄性C57BL 小鼠，5 ～6 周齡，體重19 ～23 g。飼養(yǎng)在裝有空調(diào)的SPF 環(huán)境，溫度控制在（23.5±1.0）℃，濕度控制在（65±20）℃，并喂食飼料與水。

使用0.5%羧甲基纖維素鈉加熱溶解UA。并以20 mg/g、40 mg/g（藥物/小鼠體重質(zhì)量）的劑量灌胃給藥。其中Sham + UA 組，UA 高劑量為40 mg/g。

1.3 動(dòng)物藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)：將31 只小鼠分為5 組，分別為假手術(shù)組（Sham）、假手術(shù)+UA 高劑量組（Sham+HUA）、HIRI 模型組、模型組+UA 低劑量組（HIRI+LUA）、模型組+UA 高劑量組（HIRI+HUA）。前2 組每組5 只小鼠，后3 組每組7 只小鼠。其中Sham+HUA、HIRI+LUA、HIRI+HUA 灌胃給予UA 7 d，1 次/d，其他Sham 與HIRI 模型組灌胃給予等量羧甲基纖維素鈉溶液。預(yù)處理末次給藥1 h后，腹腔內(nèi)注射戊巴比妥鈉（40 ng/g）麻醉小鼠，在上腹正中打開腹腔，小心暴露肝臟，并游離肝門韌帶。HIRI、HIRI+LUA 與HIRI+HUA 3 組夾閉肝左葉和肝中葉入肝血管阻斷血流，1 h 后松開血管夾，恢復(fù)血流（其中Sham 與Sham+HUA 兩組僅游離肝門且不阻斷血流）。再灌注6 h 后摘眼球取血，分離部分肝臟組織儲(chǔ)存于-80 ℃，另一部分儲(chǔ)存于10%福爾馬林中。

1.4 血清生化分析：首先，將收集到的小鼠血液常溫靜置60 min 后，3 000 r/min 離心 20 min，分離血清。然后，使用全自動(dòng)臨床生化分析儀（Sysmex CHEMIX-180）測(cè)定小鼠血清中ALT 及AST 的水平。

1.5 肝臟組織病理學(xué)檢測(cè)：從10% 福爾馬林中取出各實(shí)驗(yàn)組肝臟組織樣本進(jìn)行組織病理學(xué)檢測(cè)。首先將樣品固定在4% 的多聚甲醛緩沖溶液中，然后嵌入石蠟中。接著將樣本切片5 μm，用二甲苯和乙醇脫蠟，蘇木精和伊紅染色（hematoxylin and eosin，HE），脫水。最后用顯微鏡觀察切片，在隨機(jī)選擇的200 倍鏡下觀察組織學(xué)改變。

1.6 活性成分-HIRI 靶基因網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建：在中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)和分析平臺(tái)TCMSP 獲取UA 相關(guān)的小分子化合物結(jié)構(gòu)，然后，運(yùn)用Pharm Mapper、Swiss Target Prediction 數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)其對(duì)應(yīng)的靶基因。將獲得的靶基因合并、去除重復(fù)后統(tǒng)一在UniProt 服務(wù)平臺(tái)上校正和轉(zhuǎn)化，最終以UniProt ID 表示，建立UA 活性成分靶點(diǎn)數(shù)據(jù)庫(kù)。

首先在GeneCards 數(shù)據(jù)庫(kù)上以“hepatic ischemia reperfusion injury”為關(guān)鍵詞預(yù)測(cè)與HIRI 相關(guān)的靶基因，然后在UniProt 服務(wù)平臺(tái)上校正和轉(zhuǎn)化，最終以UniProt ID 表示。收集UA 成分與 HIRI 的交集靶基因共36 個(gè)，并運(yùn)用Cytoscape 3.7.2 軟件映射活性成分-HIRI 疾病靶基因可視化網(wǎng)絡(luò)圖。

1.7 交集靶基因的蛋白-蛋白相互作用：將36 個(gè)交集靶基因的gene symbol 導(dǎo)入STRING 服務(wù)平臺(tái)，限定種類為homo sapiens，獲得蛋白-蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)（PPI）數(shù)據(jù)集。將PPI 數(shù)據(jù)集導(dǎo)入Cytoscape 3.7.2 利用插件cytoHubba 中MCC 功能獲得前10 個(gè)hub 靶基因。

1.8 KEGG 通路分析：將36 個(gè)交集靶基因以O(shè)FFICIAL_GENE SYMBOL 為Select Identifier， 物種為Homo sapiens，使用DAVID 在線數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行KEGG（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes）分析。以P ＜0.01 為篩選條件獲得KEGG 富集數(shù)據(jù)集。

1.9 初步關(guān)鍵靶基因的獲得：取KEGG 中最重要的Pathways in cancer 所 包 含 的 靶 基 因 與MCC 功能獲取的核心靶基因的交集靶基因?yàn)槌醪疥P(guān)鍵靶基因。

1.10 通過分子對(duì)接分析確定最終hub 靶基因：取KEGG 中最重要的Pathways in cancer 所包含的靶基因與MCC 功能獲取的核心靶基因的交集靶基因。運(yùn)用PDB 及PubChem 數(shù)據(jù)庫(kù)下載交集靶蛋白和UA 小分子化合物的結(jié)構(gòu)，并使用DockThor 在線工具進(jìn)行分子對(duì)接。根據(jù)分子對(duì)接結(jié)果最終確定hub 靶基因并進(jìn)行實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，進(jìn)一步揭示UA 干預(yù)HIRI 的分子機(jī)制。

1.11 免疫組織化學(xué)法：首先依次將小鼠肝組織切片放入二甲苯、無水乙醇、蒸餾水中完成石蠟切片脫蠟。接著將組織切片置于盛滿檸檬酸 （pH ＝6.0）液的盒中，把盒子放入微波爐進(jìn)行抗原修復(fù)，中火加熱8 min 至沸，?；? min 保溫再轉(zhuǎn)中、溫火加熱7 min，自然冷卻后將切片置于PBS（pH ＝7.4）中，并于脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3 次，每次5 min。然后將切片放入3%雙氧水溶液室溫避光孵育25 min 以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶。接著在切片圈內(nèi)均勻滴加3% BSA，室溫封閉30 min。然后輕輕甩掉封閉液，在切片上滴加用PBS 稀釋的PTGS2（1 ∶200）抗體，切片平放于濕盒內(nèi)4 ℃孵育過夜。第2 天，切片用PBS 洗滌后在圈內(nèi)滴加與一抗對(duì)應(yīng)種屬的二抗（HRP 標(biāo)記）覆蓋組織，室溫孵育50 min。接著用PBS 洗滌切片后在圈內(nèi)滴加新鮮配制的DAB 顯色液，顯微鏡下控制顯色時(shí)間，陽(yáng)性為棕黃色，自來水沖洗切片終止顯色。最后用蘇木素復(fù)染細(xì)胞核，脫水封片。

1.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：免疫組化實(shí)驗(yàn)通過Histochemistry Score（H-Score）方法對(duì)每組3 個(gè)切片（n ＝3）的陽(yáng)性染色強(qiáng)度進(jìn)行定量分析。數(shù)據(jù)均采用one-way ANOVA 和Tukey’s post-hoc 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析組間差異。P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 血清生化與肝組織HE 檢測(cè)結(jié)果：將5 組動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的血清樣本經(jīng)全自動(dòng)臨床生化分析儀檢測(cè)后，與Sham 組比較，HIRI 模型組小鼠血清中的ALT、AST 水平顯著升高 （P ＜0.01），說明造模成功。與HIRI 模型組比較，HIRI+LUA、HIRI+HUA 組小鼠血清中的ALT、AST 水平明顯降低（P ＜0.01），說 明UA 對(duì)HIRI 小 鼠 有 保 護(hù) 作 用。Sham 組 與Sham + HUA 組比較小鼠血清中ALT、AST 的變化沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05），說明UA 不會(huì)對(duì)正常小鼠肝組織造成損傷，表明UA 的安全性。HIRI+LUA 組與HIRI+HUA 組相比，沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）。表明以20 ～40 mg/g（藥物/小鼠體重質(zhì)量）劑量范圍UA 能起到保護(hù)小鼠HIRI 的作用，但沒有劑量依賴性（圖1A、1B）。本項(xiàng)目選用HIRI+LUA 組完成后續(xù)各組的免疫組化實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。

選取各組小鼠肝組織的切片做HE 染色，各組實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與Sham 組比較，HIRI 組小鼠肝組織表現(xiàn)為不同程度的腫脹/壞死、脂肪變性、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)等。與HIRI 組比較，HIRI+LUA 組小鼠肝組織病理現(xiàn)象逆轉(zhuǎn)變好，表明UA 對(duì)小鼠HIRI有保護(hù)作用。Sham 組與Sham+LUA 組小鼠肝組織基本沒有發(fā)生變化，表明UA 基本對(duì)正常小鼠肝組織不造成損傷（圖1C ～1F）。

圖1 UA 對(duì)HIRI 小鼠藥效學(xué)及HE 檢測(cè)結(jié)果

2.2 活性成分-HIRI 靶基因網(wǎng)絡(luò)結(jié)果分析：將TCMSP 數(shù)據(jù)庫(kù)下載獲得的UA 小分子化合物結(jié)構(gòu)以MOL2 格式上傳至Pharm Mapper 服務(wù)平臺(tái)進(jìn)行靶點(diǎn)預(yù)測(cè)。將UA 化學(xué)成分的SMILES 上傳到Swiss Target Prediction 數(shù)據(jù)庫(kù)平臺(tái)進(jìn)行靶點(diǎn)預(yù)測(cè)。收集靶點(diǎn)，整理并去除重復(fù)項(xiàng)后以UniProt ID 表示，最終得到UA 的預(yù)測(cè)靶點(diǎn)共有 197 個(gè)靶點(diǎn)。

以“hepatic ischemia reperfusion injury”為 關(guān)鍵詞在GeneCards 數(shù)據(jù)庫(kù)獲得1 117 個(gè)靶基因，并以UniProt ID 表示。與上述獲得的197 個(gè)成分預(yù)測(cè)靶基因取交集，共得到36 個(gè)共有靶基因，然后利用Venn diagram 軟件將其可視化（圖2）。運(yùn)用Cytoscape 3.7.2 軟件繪制成分-HIRI 網(wǎng)絡(luò)映射可視圖，圖中紅色菱形節(jié)點(diǎn)表示UA 小分子化合物，藍(lán)色圓形節(jié)點(diǎn)表示HIRI 相關(guān)的靶基因，綠色線條表示成分與疾病靶基因的相交線（圖3）。

圖2 UA 成分與HIRI 共有靶基因示意圖

圖3 UA 成分-HIRI 網(wǎng)絡(luò)映射圖

2.3 關(guān)鍵靶基因的初步獲得：將在STRING 數(shù)據(jù)庫(kù)獲取的36 個(gè)交集靶基因的PPI 數(shù)據(jù)集導(dǎo)入Cytoscape3.7.2 軟件并利用其插件cytoHubba中MCC 功能獲得前10 個(gè)Hub 靶基因，分別為MAPK3（P27361）、P35354 （PTGS2）、PPARG（P37231）、PTGS1（P23219）、PLA2G1B（P04054）、ALOX5 （P09917）、IL1B （P01584）、MPO （P05164）、PTGES （O14684）、SOD2 （P04179）。

36 個(gè)交集靶基因使用DAVID 在線數(shù)據(jù)庫(kù)設(shè)定P ＜0.01 為篩選條件共獲得19 條KEGG 通路（圖4）。得 分 最 佳 的Pathways in cancer 共 含 有9 個(gè) 靶 基 因，分 別 為MAPK3 （P27361）、PTGS2（P35354）、PPARG （P37231）、AGTR1 （P30556）、RAC1 （P63000）、PPARD （Q03181）、MDM2（Q00987）、MTOR （P42345）、NOS2 （P35228）。

圖4 成分與HIRI 交集靶基因KEGG 通路示意圖

獲取Pathways in cancer 通路與MCC 功能所含的交集靶基因分別為MAPK3、PTGS2 及PPARG（圖5）。

圖5 Hub 靶基因的獲得

2.4 分子對(duì)接分析最終確定hub 靶基因：將從上述KEGG 與MCC 中得到的交集靶基因（MAPK3、PTGS2、PPARG）應(yīng)用PDB 數(shù)據(jù)庫(kù)獲得其蛋白晶體結(jié)構(gòu)，并上傳至DockThor 在線分子對(duì)接工具。同時(shí)在PubChem 數(shù)據(jù)庫(kù)下載UA 的3D 結(jié)構(gòu)并以sdf 形 式 上 傳 至DockThor，點(diǎn) 擊Blind Docking 確定活性位點(diǎn)，進(jìn)行分子對(duì)接，結(jié)果顯示，UA 通過2 個(gè)氫鍵與PPARG、MAPK3 的活性位點(diǎn)結(jié)合形成復(fù)合物；UA 通過5 個(gè)氫鍵與PTGS2 的活性位點(diǎn)結(jié)合形成復(fù)合物（表1）。從表中數(shù)據(jù)可知：UA 與PTGS2 的對(duì)接得分最小且通過5 個(gè)氫鍵相互結(jié)合?？梢姡琔A 與PTGS2 具有非常強(qiáng)的親和力。所以本研究最終確定PTGS2 為最終的hub 靶基因（圖6）。

圖6 UA 與PTGS2 分子對(duì)接結(jié)果

表1 UA 與靶基因的分子對(duì)接信息表

2.5 免疫組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析：將Sham、Sham +HUA、HIRI 及HIRI + LUA4 組（n ＝3）切片經(jīng)PTGS2（1 ∶200）免疫染色處理后，運(yùn)用Histochemistry score （H-score）組織學(xué)評(píng)分方法將每張切片內(nèi)陽(yáng)性數(shù)量及其染色強(qiáng)度轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的數(shù)值，達(dá)到對(duì)組織染色半定量的目的。H-score 為0 ～300 之間的數(shù)值，數(shù)值越大說明綜合陽(yáng)性強(qiáng)度越強(qiáng)［19-20］。結(jié)果表明，與Sham 組比較，HIRI 組中PTGS2 的表達(dá)顯著上升（P ＜0.01），說明該靶基因在正常肝組織中低表達(dá)，在HIRI 時(shí)高表達(dá)；與HIRI 組比較，HIRI+LUA組中PTGS2的表達(dá)顯著下降 （P＜0.01），說明UA 通過降低這2 種靶基因的表達(dá)能保護(hù)小鼠HIRI；Sham 組與Sham+HUA 兩組中PTGS2 的表達(dá)沒有顯著性差異（P ＞0.05），說明UA 對(duì)小鼠正常肝組織沒有造成傷害（圖7A ～E）。

3 討 論

HIRI 是肝膽外科手術(shù)后發(fā)生肝衰竭和死亡的主要因素。限于目前針對(duì)HIRI 沒有良好的防范措施，積極探索干預(yù)HIRI 的發(fā)病機(jī)制對(duì)提高手術(shù)成功率具有重要意義［21-25］。UA 是廣泛存在于諸多天然植物中的一類五環(huán)三萜類化合物，具有顯著的藥理活性，對(duì)多種疾病已有很好的防范作用［11］。我們前期的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)已經(jīng)驗(yàn)證UA 對(duì)HIRI 小鼠具有保護(hù)作用。因而，我們應(yīng)用生物信息網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)挖掘到PTGS2 是發(fā)生小鼠HIRI 的hub 靶基因，后續(xù)應(yīng)用HE 染色和免疫組化實(shí)驗(yàn)對(duì)hub 靶基因進(jìn)行了驗(yàn)證。

前列腺素內(nèi)過氧化物合酶（prostaglandin G/H synthase，PTGS），又稱為環(huán)加氧酶（cyclooxygenase，COX），是花生四烯酸代謝生成前列腺素的關(guān)鍵酶，在體內(nèi)廣泛分布。PTGS 有兩種同工酶，一種為結(jié)構(gòu)型表達(dá)的PTGS1（又稱為COX1），另一種為誘導(dǎo)型表達(dá)的PTGS2（又稱為COX2）。PTGS1與PTGS2 在各種組織的分布及表達(dá)調(diào)控各不相同［26-27］。其中PTGS2 在靜息細(xì)胞與正常生理狀態(tài)下的多數(shù)組織內(nèi)低表達(dá)。但當(dāng)組織或細(xì)胞收到相應(yīng)的刺激，導(dǎo)致疼痛或炎癥反應(yīng)時(shí)，一般在24 h 內(nèi)PTGS2 的表達(dá)會(huì)大幅度上升［28-29］。這一現(xiàn)象與我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相一致。圖7 免疫組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：與Sham 組相比，PTGS2 在HIRI 組的表達(dá)有非常顯著的上升（P ＜0.01），表明PTGS2 可能是血管在遭遇缺血/再灌注損傷引起炎癥反應(yīng)中的生物標(biāo)志物；與HIRI 組比較，HIRI+UA 組中PTGS2的表達(dá)水平顯著下降（P ＜0.01），表明UA 通過氫鍵與PTGS2 蛋白活性位點(diǎn)結(jié)合形成復(fù)合物能很好地抑制、減輕了炎癥反應(yīng)，從而對(duì)HIRI 起到保護(hù)作用；與Sham 組相比，Sham+HUA 組中PTGS2的表達(dá)沒有差異（P ＞0.05），表明UA 對(duì)正常小鼠肝臟組織沒用造成傷害，說明UA 自身的安全性。但同時(shí)也存在些許的不足之處，比如：HIRI+LUA組、HIRI+ HUA 組與HIRI 組比較雖都能起到抑制PTGS2 表達(dá)的作用（P ＜0.01），但彼此之間的比較沒有差異（P ＞0.05），也沒有形成劑量依賴性。這些問題在后續(xù)的研究中會(huì)更縝密地探討。

圖7 免疫組化法驗(yàn)證PTGS2 在HIRI 小鼠肝組織中的表達(dá)

綜上，本研究通過藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)確定UA 對(duì)HIRI有治療作用，接著運(yùn)用生物信息學(xué)篩查并獲取hub靶基因，最后通過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證來闡明UA 通過下調(diào)PTGS2 分子機(jī)制起到對(duì)HIRI 小鼠的保護(hù)作用，同時(shí)對(duì)未來臨床探究抗HIRI 的新藥提供了理論參考。