辛磊，安慧，錢豐，付躍，覃國樂

（河池學(xué)院化學(xué)與生物工程學(xué)院，廣西壯族自治區(qū) 宜州 546300）

核桃（Juglans regiaL.），又名胡桃，是胡桃科核桃屬多年生落葉喬木[1]，在我國有著悠久的栽培歷史，在經(jīng)濟樹種中占有重要地位，是世界著名四大干果之首，具有極高的營養(yǎng)和經(jīng)濟價值[2]。目前廣西種植的核桃品種主要為鳳優(yōu)1號、鳳優(yōu)2號、云新核桃、云南漾濞大泡核桃、美國山核桃、山東遼河1號等，但隨著核桃種植面積的擴大出現(xiàn)了很多問題，例如：種植技術(shù)粗獷、管理經(jīng)驗匱乏，病蟲害現(xiàn)象嚴(yán)重等[3]，造成核桃植株死亡或苗圃大面積死亡，嚴(yán)重威脅到廣西核桃業(yè)的整體發(fā)展[4]。

根腐病是核桃生產(chǎn)較嚴(yán)重的病害，發(fā)病率在很多地區(qū)呈逐年上升趨勢[5]。能引起核桃根腐病的病原菌有鐮刀菌、腐霉菌、絲核菌等，其中鐮刀菌為主要致病菌[6]。因根腐病屬土傳病害，且真菌孢子易擴散，故根腐病防治難度較大，國內(nèi)以化學(xué)防治為主[7]，易造成環(huán)境污染。生物防治是通過目標(biāo)生防菌劑對致病菌進行抑制，從而控制病蟲害發(fā)生，具有廣闊的發(fā)展前景[8]。

生物防治的田間試驗是驗證其菌株能否投入生產(chǎn)應(yīng)用的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。因微生物受環(huán)境變化的影響很大，其中溫度和濕度是影響生物農(nóng)藥防治效率最主要的因素[9]，在一般的研究中經(jīng)常會遇到室內(nèi)試驗、盆栽試驗及田間試驗的結(jié)果相差很大，生物農(nóng)藥的實際效果不理想等問題，因此篩選定殖能力、對環(huán)境適應(yīng)能力強的拮抗菌是以后研究的一個方向。

本實驗室前期已從當(dāng)?shù)氐暮颂腋亢Y選到一株對根腐病病原菌有抑制作用的細菌ML-11，經(jīng)鑒定為枯草芽孢桿菌。本研究以該菌株為對象，在當(dāng)?shù)氐暮颂颐绶N植區(qū)進行小區(qū)試驗，驗證該菌株對核桃根腐病的防治效果以及對核桃苗的促進作用，為該菌株以后的大面積推廣使用提供理論數(shù)據(jù)支持。

1 材料與方法

1.1 試驗地點概況

試驗地點位于宜州區(qū)的核桃苗種植基地，核桃根腐病時有發(fā)生。

1.2 試驗材料

供試菌種：枯草芽孢桿菌ML-11，本實驗室從當(dāng)?shù)亟】岛颂腋H土壤中篩選獲得。

供試核桃品種：漾濞大泡核桃（一年生）。

1.3 試驗方法

1.3.1 菌株的活化

將前期篩選到的枯草芽孢桿菌ML-11從冰箱中取出，刮取一定量的菌體接種于PDA培養(yǎng)基中活化，置于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)12 h，備用。

1.3.2 菌株ML-11發(fā)酵液制備

將活化后的ML-11接種于滅菌后的發(fā)酵培養(yǎng)基（蛋白胨10 g，酵母浸膏粉5 g，氯化鈉8 g，蒸餾水1 000 mL）中，置28℃搖床中培養(yǎng)24 h后混合，作為原液，調(diào)整菌數(shù)為8.0×108～10.0×108個，備用。

1.3.3 小區(qū)試驗

從核桃苗種植區(qū)選取長勢較一致的核桃苗150株進行試驗。將150株核桃苗分為4個試驗區(qū)（T1、T2、T3、T4）和對照區(qū)（CK），每個區(qū)域30株。處理1（T1）：ML-11發(fā)酵液原液200 mL，10倍稀釋液根部澆灌；處理2（T2）：ML-11發(fā)酵液原液200 mL，20倍稀釋液根部澆灌；處理3（T3）：ML-11發(fā)酵液原液200 mL，30倍稀釋液根部澆灌；處理4（T4）：ML-11發(fā)酵液原液200 mL，40倍稀釋液根部澆灌。每處理10株，重復(fù)3次，每月1日、15日進行澆灌2次，對照區(qū)以同等數(shù)量的自來水代替。各處理不再進行另外的根腐病的防治，其他農(nóng)事操作及管理措施、條件均相同，連續(xù)澆灌3個月。

1.3.4 病害調(diào)查方法

澆灌菌液之前調(diào)查原始基數(shù)，每月最后1 d進行調(diào)查核桃根腐病害發(fā)生情況，并計算感病率。

1.3.5 農(nóng)藝性狀調(diào)查

澆灌前調(diào)查原有植株的株高、直徑、葉片數(shù)量的原始數(shù)值，與病害調(diào)查時間一致，調(diào)查植株的農(nóng)藝性狀變化。

1.4 數(shù)據(jù)處理

采用Excel 2003和SPSS 17.0軟件對數(shù)據(jù)進行處理。

2 結(jié)果與分析

2.1 核桃根腐病田間防治結(jié)果

核桃根腐病防治效果見表1。從表2中可以看出，澆灌3個月后，T3處理的感病率較低，比對照區(qū)減少12.94%，防效最好，達到84.93%；稀釋40倍時和稀釋20倍及10倍的防效相差不大，說明直接施用原液或稀釋倍數(shù)較低，防效并不高，且浪費發(fā)酵液；稀釋過渡也會降低菌液的效果，說明該菌液對核桃根腐病具有一定的預(yù)防和治療效果。

表1 各處理核桃根腐病的防治效果Tab.1 The control effect of each treatment on walnut root rot

2.2 各處理對核桃農(nóng)藝性狀的影響

試驗3個月后，對各個區(qū)域核桃苗的株高、直徑、葉片數(shù)量調(diào)查的結(jié)果見表2。從表2中可以看出，T3處理的株高增量比對照區(qū)高0.55 cm，直徑增量高0.09 cm，葉片增量多約1.7個葉片，其他處理的影響情況相差不大，但都或多或少的較對照區(qū)有所增加。說明該菌液不僅能明顯減少核桃苗根腐病的感病率，還對核桃苗的生長具有一定的促進作用。

表2 各處理對核桃苗農(nóng)藝性狀的影響Tab.2 The effects of various treatments on agronomic characters of walnut seedlings

3 結(jié)論與討論

1919年Smith首次提出了“生物防治”概念，但對于植物病害生物防治的具體定義還存在一定的爭議?？傊?，植物生物防治主要指的是利用拮抗菌來防治植物病害[10]。芽孢桿菌屬作為生防菌劑已推廣多年，并在美國獲得多項商品化生產(chǎn)許可[11]，其中枯草芽孢桿菌利用較廣。

河池市作為桂西北典型的石漠化地區(qū)，核桃已成為重要的治理和扶貧樹種，但因技術(shù)、環(huán)境、操作等原因?qū)е赂“l(fā)病率普遍較高。本實驗室前期對當(dāng)?shù)氐暮颂腋〉闹虏【M行了研究，確定引起根腐病的病原菌為木賊鐮刀菌；從當(dāng)?shù)亟】岛颂业母H土壤中篩選到一株對該病原菌有良好生防效果的枯草芽孢桿菌ML-11。本研究利用ML-11的發(fā)酵液對核桃苗進行定期澆灌，設(shè)立對照區(qū)，經(jīng)過3個月的試驗，T3處理的感病率較低，比對照區(qū)減少12.94%，防效最好，達到84.93%；該處理區(qū)株高增量比對照區(qū)高出0.55 cm，直徑增量高出0.09 cm，葉片增量多出約1.7個葉片，證明該菌株ML-11不僅對核桃根腐病有良好的抑制作用，還對核桃苗的生長具有一定的促進作用。這為以后該菌株的大面積推廣提供了一定的試驗數(shù)據(jù)。