徐華麗 劉安娜 蘇 雅 彭屹峰 肖體喬 杜國浩 何 偉

穴位是針灸理論的核心內(nèi)容，它是針灸治療疾病的刺激點，是臟腑經(jīng)絡(luò)氣血輸注和聚集于體表的特定部位，但對于其實質(zhì)存在許多學(xué)說［1］，沒有一個完整的定論。近年來研究穴位的實驗手段也比較多，主要采用的方法有MRI、解剖、CT、紅外成像等［2-7］。最近相位襯度成像技術(shù)基于成像機制的改進在穴位的研究上得到關(guān)注。

類同軸相位襯度成像法（IL-XPCI）是一種基于菲涅爾衍射的X射線相位成像方法，它要求X射線有較好的空間相干性，而同步輻射光源足夠的空間相干性可以滿足IL-XPCI對光源空間相干性的要求，并且IL-XPCI的裝置相比于基于吸收成像的裝置更簡單、更易操作，除了需要改變樣品和探測器的距離外，整個實驗過程中不需要改變其他裝置。

利用幾種基于同步輻射的類同軸相位襯度CT三維成像（IL-XPCT）的實驗方法進行穴位的形態(tài)結(jié)構(gòu)研究，判斷穴位與非穴位的差別，可以進一步了解穴位存在的物質(zhì)基礎(chǔ)。

基于中極和足三里兩個穴位點的重要臨床價值［8-9］，我們?nèi)≡搩裳ㄎ稽c進行研究。本實驗旨在通過對中極、足三里穴位進行相位襯度成像，獲得對穴位的微觀形態(tài)學(xué)的進一步認(rèn)知。

方 法

1. 實驗取材

中極位于腹部，趾骨聯(lián)合與胸劍聯(lián)合中點連線（共13等份）上的恥骨聯(lián)合上1等份處。足三里位于后肢背外側(cè)，脛骨粗隆下部外約0.3 cm處。有效直徑大約5 mm。各從遠(yuǎn)離中極和足三里穴位點3 cm左右組織作為對照樣品。

使用10%的福爾馬林固定血管與組織，浸泡24 h后，選取尸體的下腹部、下肢穴位附近的皮膚和肌肉組織，切割成約2 cm×4 cm大小，厚度基本均勻。所有樣品浸泡在10%的福爾馬林緩沖溶液中，密封保存。

實驗時，將樣品從容器中取出并自然晾干即可。再將樣品置于一個高1.2 cm、直徑為4.5 mm的圓柱體塑料容器中進行成像。從中極取下來的樣品命名為樣品1，從足三里取下來的樣品命名為樣品3；遠(yuǎn)離中極和足三里穴位點3 cm左右的對照樣品分別命名為樣品2和4。樣品1、2、3和4均為大致相同的尺寸。

2. 實驗過程

如圖1所示，根據(jù)預(yù)實驗的結(jié)果獲得相位襯度最佳的IL-XPCT成像的有效物像距離d，單色光的能量為20 keV；流強為10 mA；成像距離是1 m；光斑的大小是45 mm（水平方向）×5 mm（垂直方向）。

X射線穿過樣品后，進入探測器成像。探測器使用X射線CCD（charge couple device，電荷耦合器件）成像系統(tǒng)采集圖像。

3. 結(jié)果分析

對所獲得的中極、足三里穴位的相位襯度成像結(jié)果進行分析，比較它們與相應(yīng)對照組之間的微細(xì)血管分布的差異。

通過采用計算機圖像分析軟件分別計算血管的相對分布面積（Aa%）和血管的相對平均灰度（Gg%），從而對所獲得的穴位區(qū)域微血管的聚集影像進行定量描述。計算公式如下：

Aa%=血管面積/穴位點區(qū)域面積

Gg%=血管區(qū)域的平均灰度/穴位區(qū)域的平均灰度

此外，將血管的相對分布面積Aa%和血管的相對平均灰度Gg%都考慮進去，可以得到血管密度，表示為Aa-Gg%。

結(jié) 果

1.XPCI投影圖像觀察

在本實驗中，應(yīng)用XPCT方法獲得了較好的成像效果，分辨率達到了微米量級。

如圖2所示，對比特定穴位點和遠(yuǎn)離該穴位（即非穴位區(qū)域）的兩個區(qū)域，可以看出它們在形態(tài)學(xué)上的差別是非常明顯的。在穴位的區(qū)域可以觀察到大量微血管結(jié)構(gòu)（圖2A、2C中一些粗大血管帶有的細(xì)小微血管分支），而非穴位的區(qū)域就比較簡單、平整，而且微血管數(shù)量很少（圖2B、2D中只能觀察到明顯的粗大血管，未觀察到像穴位區(qū)域一樣的微血管精細(xì)結(jié)構(gòu)）。

然而，這些相襯投影圖片只是樣品的三維結(jié)構(gòu)在投影平面上的二維投影圖，這就導(dǎo)致樣品內(nèi)部結(jié)構(gòu)的重疊，而這種結(jié)構(gòu)的重疊使得我們很難分辨樣品的內(nèi)部結(jié)構(gòu)。

2.IL-XPCT圖像觀察

從斷層切片（圖3A~D左列）上我們可以看到，在穴位點樣品的不同區(qū)域組織中，肌肉組織對X射線的吸收系數(shù)不同，導(dǎo)致了不同組織之間的襯度分辨，最直接的結(jié)果就是不同組織之間的暗亮程度不同。這在X射線二維成像中是很難實現(xiàn)的（二維成像的襯度差別大多是由組織的結(jié)構(gòu)重疊造成），我們的這種成像方法則可以輕易地觀察到樣品中這種很小的組織襯度差別。

其次，斷層切片（圖3A~D中列）之間的對比中我們可以看到，血管（圖中的白點是血管的橫截面）的直徑和分布走向在兩個斷層切片中是不同的，但是在這兩張圖片上看不出更多細(xì)節(jié)，但從三維重構(gòu)圖像（圖3A~D右列）可以清楚地看到，穴位點區(qū)域的血管的相對分布面積和血管的相對平均灰度都要比非穴位點的值高，同時，血管密度也比非穴位點區(qū)域的大。

3. 微血管分布

從表1可以清楚地看到，穴位點區(qū)域的血管的相對分布面積Aa%值和血管的相對平均灰度Gg%值都要比非穴位點的值高，同時，血管密度Aa-Gg%值也比非穴位點區(qū)域的值大，這表明，在我們所調(diào)查的4個樣品上，在穴位點區(qū)域上確實有微血管的聚集現(xiàn)象。

表1 中極、足三里穴位及穴位外組織的Aa%、Gg%和Aa-Gg%值

討 論

經(jīng)絡(luò)是經(jīng)與絡(luò)的總稱。經(jīng)絡(luò)學(xué)說是中國醫(yī)學(xué)理論的核心。經(jīng)指的是通往各處的經(jīng)路，絡(luò)就是網(wǎng)絡(luò)般的錯綜聯(lián)結(jié)。人體經(jīng)絡(luò)就是全身氣血往來運行的通道；經(jīng)絡(luò)就是這樣把人體的五臟六腑、四肢百骸、五官九竅及經(jīng)脈、皮肉、毛發(fā)等組織和器官聯(lián)結(jié)成一個有機的整體的，是用以說明人體的生理功能、病理變化的。

穴位是針灸理論的核心內(nèi)容，它是針灸治療疾病的刺激點，是臟腑經(jīng)絡(luò)氣血輸注和聚集于體表的特定部位，其范圍因個體的不同而存在很大的差異。由于穴位是一個復(fù)雜的科學(xué)體系，現(xiàn)代生物學(xué)和醫(yī)學(xué)界在經(jīng)絡(luò)存在的客觀性、經(jīng)絡(luò)的物質(zhì)基礎(chǔ)和本質(zhì)等重要問題上長期以來一直存在很大的爭議。

穴位是一個復(fù)雜的實體，是什么物質(zhì)構(gòu)成的、是有形的還是無形的，人類尚未完全掌握，所以才會有如此之多的觀點。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，特別是近些年來，對經(jīng)絡(luò)實質(zhì)的研究更加活躍，各種理論和假說層出不窮，如神經(jīng)學(xué)說、神經(jīng)-內(nèi)分泌學(xué)說、神經(jīng)血管學(xué)說、結(jié)締組織學(xué)說等等。

對復(fù)雜實體物理特性的研究需要現(xiàn)代實驗方法，以往有MRI、解剖、CT、紅外成像等基于不同原理的研究方法，我們也不否認(rèn)這些現(xiàn)代實驗方法在穴位研究上的成果。

同步輻射技術(shù)是研究物理特性非常重要的方法之一，我們成功地在上海光源BL13W1成像站進行穴位的同步輻射IL-XPCT成像實驗，得到的空間分辨率達到了15μm。在穴位點區(qū)域和非穴位點區(qū)域三維圖像的對照中，我們發(fā)現(xiàn)微血管的聚集是穴位點的普遍特性，這種微血管的聚集在非穴位點區(qū)域很難看到。這些微血管有可能是穴位存在的物質(zhì)基礎(chǔ)之一，并且參與到穴位的調(diào)節(jié)作用中。

在后續(xù)的工作中，我們將進一步分析穴位點的具體組織、元素成分，以期獲得對穴位研究的進一步突破。