趙志娟 楊小霞 鐘俏君 陳冠海 彭相英 劉本文 朱 歡 劉國祥

(1. 南寧師范大學(xué),北部灣環(huán)境演變與資源利用教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,南寧 530001;2. 南寧師范大學(xué),廣西地表過程與智能模擬重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,南寧 530001;3. 中國科學(xué)院水生生物研究所,中國科學(xué)院藻類生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,武漢 430072)

剛毛藻(Cladophora)是水體中一類常見的絲狀分枝綠藻,隸屬于綠藻門石莼綱剛毛藻目(Cladophorales),在全球海洋及淡水中廣泛分布[1,2]。其藻絲常著生于水中基質(zhì)上或松散漂浮于水體表面,是水體中重要的生態(tài)類群,可為附植生物和底棲生物提供生產(chǎn)力和微生存空間[3,4]。

剛毛藻形態(tài)多為具分枝的絲狀體,細(xì)胞管狀多核,具網(wǎng)狀周生色素體;藻體通過頂端或居間細(xì)胞分裂生長,通過基部細(xì)胞、假根或固著器進(jìn)行固著。由于生態(tài)變異幅度較大、缺乏有效的形態(tài)診斷特征,該屬的分類鑒定一直較為困難[5,6]?；趥鹘y(tǒng)形態(tài)學(xué)方法對剛毛藻進(jìn)行分類鑒定的結(jié)果正不斷受到挑戰(zhàn)[7,8]。

隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展,基于多分子標(biāo)記的序列分析越來越多地被用于剛毛藻目的系統(tǒng)分類中[9—11]。Boedeker等[10]在對全球剛毛藻科樣品進(jìn)行廣泛調(diào)查和分析后提出: 在當(dāng)前剛毛藻科物種形態(tài)分類可靠性較低、部分模式標(biāo)本難以追溯確認(rèn)及獲得有效序列的情況下,依靠分子數(shù)據(jù)來推動該科的系統(tǒng)分類工作將是有幫助的。核糖體小亞基(SSU rDNA)和核糖體大亞基(LSU rDNA)是剛毛藻目系統(tǒng)分類研究中應(yīng)用最為廣泛的兩個分子標(biāo)記[12,13]。此外,內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)序列(ITS,ITS1-5.8S-ITS2)的使用也越來越多地受到重視。ITS序列相較于保守的SSU rDNA和LSU rDNA進(jìn)化速率更快,因此更適用于解決近緣物種的系統(tǒng)分類[14—16]。Boedeker等[10]和Zhu等[11]關(guān)于剛毛藻目的研究均表明淡水剛毛藻類群不同于咸水剛毛藻和海洋剛毛藻類群,已經(jīng)單獨(dú)進(jìn)化為一個支系。對中國內(nèi)陸采集的69份剛毛藻樣品進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析后,Zhu等[11]提出目前淡水剛毛藻類群至少包含8個支系(clades)。由于各個支系的形態(tài)特征存在一定重疊性,這些支系暫未定種。Zhao等[17]在此基礎(chǔ)上增加了淡水剛毛藻一新種硬剛毛藻Cladophora rigida,將淡水剛毛藻類群擴(kuò)增到至少9個支系。

赤水河發(fā)源于云南省昭通市鎮(zhèn)雄縣,干流全長436.5 km,是長江上游南岸較大的一級支流。流域地貌以中山丘陵為主,景觀類型多樣,是長江上游為數(shù)不多的沒有修建水壩和水庫的支流,仍保持著天然的河流特征[18,19]。赤水河還是“長江上游珍稀、特有魚類國家級自然保護(hù)區(qū)”的重要組成部分,因其生物多樣性豐富,是長江上游一條獨(dú)具價(jià)值的河流[20,21]。目前,有關(guān)赤水河流域藻類多樣性的研究較少,且主要集中在對浮游植物群落結(jié)構(gòu)的調(diào)查等方面[22,23]。本研究擬對冬季赤水河流域的剛毛藻進(jìn)行廣泛調(diào)查,以評估該流域剛毛藻多樣性,為今后赤水河流域的生態(tài)環(huán)境保護(hù)提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和科學(xué)支持。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

本研究對冬季赤水河流域開展剛毛藻樣品的廣泛采集,在上、中、下游共設(shè)計(jì)樣點(diǎn)38個 (圖1)。使用鑷子、刀片采集樣品,并放置于采樣瓶或采樣袋中。采集到的絲狀綠藻材料一部分保存于10%的福爾馬林溶液中用于形態(tài)學(xué)觀察,一部分保存于95%乙醇溶液中用于總DNA提取。環(huán)境樣品分別保存于南寧師范大學(xué)植物學(xué)實(shí)驗(yàn)室和中國科學(xué)院水生生物研究所。采集樣品帶回實(shí)驗(yàn)室后通過Leica DM5000B顯微鏡(Leica,Wetzlar,Germany)進(jìn)行鏡檢,篩選符合要求的樣品以備下一步進(jìn)行DNA提取。

圖1 赤水河流域采樣點(diǎn)圖Fig. 1 Location of sampling site at Chishui River basin

1.2 DNA提取及PCR擴(kuò)增

在解剖鏡下對目標(biāo)樣品進(jìn)行小心分離,挑取干凈的目的藻絲用ddH2O反復(fù)洗滌3—4次,在顯微鏡下鏡檢后置于含有磷酸鹽緩沖液(PBS,pH=7.0)及玻璃破碎珠的2 mL凍存管中。使用mini-beadbeater(Model 3110BX,Biospec Products,Bartlesville,Oklahoma,USA)震蕩破碎3min,重復(fù)3次直至藻絲破碎、內(nèi)含物充分釋放。最后用植物基因組提取試劑盒(Tiangen Biotech Co.,Beijing,China)對藻絲基因組總DNA進(jìn)行提取,獲得的總DNA保存于-20℃冰箱備用。

PCR擴(kuò)增的反應(yīng)體系: 2 μL模板DNA(10 ng/μL),1.25 UTaqDNA聚合酶(ExTaq,TaKaRa),正向引物和反向引物各0.2 μmol/L,0.4 mmol/L dNTPs和5 mmol/L MgCl2,加水補(bǔ)充至50 μL。SSU rDNA的序列由SR1-SS11H和SSU897-18SC2[6]兩對引物擴(kuò)增獲得。PCR反應(yīng)條件: 94℃預(yù)變性3min;94℃變性1min,55℃退火1min,72℃延伸1min 30s,此過程35個循環(huán);最后72℃延伸3min[13]。LSU rDNA序列擴(kuò)增使用的引物為C1 (F)和D2 (R)[8,24]。PCR反應(yīng)條件: 94℃預(yù)變性5min;94℃ 30s,57℃ 30s,72℃30s,循環(huán)31次;72℃延伸5min。參考Hayakawa等[2]的引物Clado ITS-9F和Clado ITS-7R擴(kuò)增內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)ITS序列。PCR反應(yīng)條件: 94℃預(yù)變性1min;98℃變性10s,65℃退火30s,68℃延伸2min,此過程30個循環(huán);最后72℃延伸10min。

1.3 系統(tǒng)發(fā)育分析

從GenBank數(shù)據(jù)庫下載相關(guān)序列,結(jié)合本研究所采集樣品的分子序列共同構(gòu)建剛毛藻科的系統(tǒng)進(jìn)化樹。本研究共建立了2個數(shù)據(jù)集(datasets):dataset 1,是基于SSU和LSU兩分子標(biāo)記聯(lián)合構(gòu)建的剛毛藻科數(shù)據(jù)集(共80條序列,選取硬毛藻Chaetomorpha作為外類群);dataset 2,是基于SSU,ITS和LSU三分子標(biāo)記聯(lián)合構(gòu)建的淡水剛毛藻數(shù)據(jù)集(共51條序列,選取咸水剛毛藻序列作為外類群)。使用MAFFT 7.0[25]進(jìn)行序列比對,并在MEGA 7.0[26]中進(jìn)行手工矯正。使用DAMBE 5.6[27]對比對變異位點(diǎn)進(jìn)行突變飽和評估分析。通過PAUP 4.0b/MrModeltest v3.7[28]進(jìn)行最佳模型測試。兩個數(shù)據(jù)集均同時(shí)采用貝葉斯法(BI)和最大似然法(ML)進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化分析。ML分析采用GTR+I+G模型在RAxML v8.1.2[29]中運(yùn)行分析,用自展(Bootstrap,BP)分析檢驗(yàn),開展1000次隨機(jī)重復(fù)抽樣。貝葉斯分析采用MrBayes v.3.2[30]軟件分析,運(yùn)行1×106代,每1000代取樣一次,分析達(dá)到平穩(wěn)(標(biāo)準(zhǔn)誤差＜0.01)則運(yùn)行結(jié)束。最大似然樹和貝葉斯樹分別在相應(yīng)分支上獲得自展支持值(BP)和后驗(yàn)概率值(PP)。采用MEGA 7.0[26]軟件對所構(gòu)建出的進(jìn)化樹各支系進(jìn)行支系內(nèi)和支系間的遺傳距離計(jì)算。最后綜合系統(tǒng)支持值、遺傳距離和形態(tài)數(shù)據(jù)對淡水剛毛藻進(jìn)行分類討論。

2 結(jié)果

本研究共設(shè)計(jì)采樣位點(diǎn)38個,獲得的剛毛藻目樣品(包含剛毛藻屬、根枝藻屬(Rhizoclonium)和黑孢藻屬(Pithophora)樣品)覆蓋采樣點(diǎn)21個,分布有剛毛藻屬樣品的位點(diǎn)19個,隸屬于赤水河、倒流河、古藺河、桐梓河、觀音寺河、大同河和習(xí)水河,覆蓋赤水河流域的上、中、下游(表1) (注: 二郎鎮(zhèn)以上為上游,復(fù)興鎮(zhèn)則為中、下游分界點(diǎn))。對照樣品采集信息及系統(tǒng)發(fā)育結(jié)果,冬季赤水河流域剛毛藻數(shù)量和多樣性分布整體呈現(xiàn)從上游向下游逐漸減少趨勢。

表1 各采樣點(diǎn)分布剛毛藻樣品情況Tab. 1 The distribution of Cladophora samples at each sampling site

篩選符合要求的樣品進(jìn)行DNA提取,目標(biāo)樣品的生境、編號及GenBank號等信息見表2。對所有剛毛藻樣品分別進(jìn)行SSU、LSU和ITS三分子標(biāo)記序列擴(kuò)增,獲得有效序列47條,其中同時(shí)成功獲得三標(biāo)記序列的有效樣品數(shù)有14個。擴(kuò)增所得的SSU、ITS和LSU序列長度約為: 1650、600和1000 bp?；?0條序列聯(lián)合(Dataset 1,長約2550 bp)構(gòu)建的SSU+LSU系統(tǒng)樹主要展示赤水河剛毛藻藻株在剛毛藻科內(nèi)的系統(tǒng)進(jìn)化位置(圖2)。該樹包含了剛毛藻科主要的3個屬: 剛毛藻屬、根枝藻屬和硬毛藻屬,其中剛毛藻屬和根枝藻屬具有較近的親緣關(guān)系。研究中所有采集自赤水河流域的剛毛藻均隸屬于淡水剛毛藻支系(圖2,BI=1.00;BP=95)?；?1條序列聯(lián)合(Dataset 2,長約3183 bp)構(gòu)建的SSU+ITS+LSU的系統(tǒng)樹主要展示赤水河流域剛毛藻在剛毛藻屬內(nèi)所處的系統(tǒng)進(jìn)化位置(圖3)?；谧畲笏迫环?gòu)建的系統(tǒng)進(jìn)化結(jié)果和基于貝葉斯法構(gòu)建的系統(tǒng)樹結(jié)果基本一致,圖示(圖2和圖3)僅展示貝葉斯建樹結(jié)果的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)。

表2 本研究所用剛毛藻樣品的采集信息及序列信息Tab. 2 Cladophora specimens used in this study,and associated collection information and GenBank accession numbers

基于核糖體序列所構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育結(jié)果(圖2和圖3)與Zhu等[11]及Zhao等[17]的研究結(jié)果基本一致。為保持研究的持續(xù)性及便于對比分析,本研究對淡水剛毛藻各clade的劃分和標(biāo)注與前述文獻(xiàn)[11,17]保持一致。加入赤水河樣品后,本研究將淡水剛毛藻類群由此前描述的“至少包含9個支系”擴(kuò)展到“至少包含10個支系”。新增的淡水支系clade 10(BI=1.00;BP=100)當(dāng)前僅包含兩條序列(CS0801CS2202),藻株分別采自赤水河和倒流河,系統(tǒng)樹圖顯示clade 10和clade 7具有較近的親緣關(guān)系(BI=1.00;BP=100;圖3)。基于SSU+LSU雙分子標(biāo)記和基于SSU+ITS+LSU三分子標(biāo)記的系統(tǒng)進(jìn)化結(jié)果基本一致,部分支系間的親緣關(guān)系和支持值有所差異。加入ITS序列所構(gòu)建的進(jìn)化樹,除clade 4支持度不高外,其他支系支持度良好(BI=1.00;BP＞95;圖3)。基于三分子標(biāo)記的進(jìn)化結(jié)果可將淡水剛毛藻類群劃分為兩組(group): 其中clade 1、clade 2和clade 4三個支系具有較近的親緣關(guān)系,聚為一組(Group Ⅰ;BI=1.00;BP=94);clade 5、clade 6、clade 7、clade 9和clade10五個支系具有較近的親緣關(guān)系,聚為另一組(GroupⅡ;BI=1.00;BP=100;圖3)。系統(tǒng)發(fā)育分析結(jié)果顯示,赤水河流域采集的樣品分屬于6個支系,覆蓋淡水剛毛藻類群支系(10個支系)一半以上。既有隸屬于Group Ⅰ的: clade 1 (CS0901CS3401CS2501)、clade 2 (CS1401)和clade 4 (CS3202),也有隸屬于Group Ⅱ的clade 7 (CS1101CS1102CS2401)、clade 9 (CS0821CS3003CS3003YN1901)和clade 10 (CS0801CS2202)。各支系間和支系內(nèi)的遺傳距離計(jì)算結(jié)果見表3和表4。從結(jié)果看,各支系內(nèi)部的最大遺傳距離均≤0.003,表明各支系所含序列遺傳差異較小(表4)。各支系間的遺傳距離變化范圍大(0.004—0.023),其中clade 8和其他支系間的遺傳距離均較大(0.019—0.023),新劃分的clade 10和clade 7之間的遺傳距離為0.006,該值和clade 5和clade 6之間的遺傳距離相同,高于clade 1和clade 4(0.004)、clade 2和clade 4 (0.005)間的遺傳距離(表3)。

圖2 基于SSU+LSU 兩個分子標(biāo)記構(gòu)建的剛毛藻科系統(tǒng)進(jìn)化樹Fig. 2 Bayesian SSU+LSU (based on dataset 1) phylogeny of Cladophoraceae

圖3 基于SSU+ITS+LSU 三個分子標(biāo)記構(gòu)建的淡水剛毛藻系統(tǒng)進(jìn)化樹Fig. 3 Bayesian SSU+ITS+LSU (based on dataset 2) phylogeny of the freshwater Cladophora

3 討論

由于剛毛藻形態(tài)上的簡單性、可塑性(易受環(huán)境條件影響),使得單獨(dú)依靠傳統(tǒng)分類特征(如細(xì)胞直徑、分枝類型、生長方式和固著器)進(jìn)行剛毛藻種類鑒定十分困難。本研究首次大規(guī)模地對赤水河流域的剛毛藻展開調(diào)查,并基于多分子標(biāo)記進(jìn)化系統(tǒng)發(fā)育分析。冬季赤水河流域剛毛藻多樣性較高,所采藻株分屬于6個支系,覆蓋當(dāng)前淡水剛毛藻支系一半以上。此外,剛毛藻在該流域分布廣泛,上、中、下游均有分布(表1)。其中,上游分布最多(11個位點(diǎn)),中游其次(5個位點(diǎn)),下游較少(3個位點(diǎn)),這可能與上、中、下游水質(zhì)狀況、透明度及水體流速等存在一定關(guān)系。

核糖體分子標(biāo)記是剛毛藻科系統(tǒng)分類研究中常用的分子標(biāo)記,常單獨(dú)使用或者聯(lián)合使用[11,31]。本研究分別基于SSU+LSU雙分子標(biāo)記和SSU+ITS+LSU三分子標(biāo)記構(gòu)建了剛毛藻屬的系統(tǒng)進(jìn)化樹。結(jié)果顯示,加入ITS分子標(biāo)記后,淡水剛毛藻內(nèi)部各個支系間的親緣關(guān)系更加明確、支持強(qiáng)度和聚類結(jié)果更好。例如: clade 1、clade 2、clade 5和clade 6的這幾個支系的自展支持值(BP)從小于75升至95以上。表明較為保守的分子標(biāo)記(SSU和LSU rDNA)的聯(lián)合適于屬以上水平的進(jìn)化分析,聯(lián)合變異速率較快的分子標(biāo)記(如ITS序列)則有利于屬以下、種水平的進(jìn)化分析,這一結(jié)論也在近年來剛毛藻科相關(guān)的系統(tǒng)學(xué)研究中得到支持[11,17]。

有關(guān)剛毛藻不同支系的劃分目前尚無嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn),本研究主要參考已有的文獻(xiàn)研究結(jié)果,同時(shí)結(jié)合不同支系間的遺傳距離及部分形態(tài)特征來劃分。例如,基于SSU+ITS+LSU三分子標(biāo)記聯(lián)合分析,Zhu等[11]將以HLJ1406為代表的藻株歸入clade 4分支,該支系支持值不高(-/50)。在本研究中,加入了赤水河流域剛毛藻序列后,clade 4的系統(tǒng)支持值有所提升,但提升也不明顯(0.50/60)。形態(tài)上,該分支內(nèi)部分藻株形態(tài)和C. rivularis(Linnaeus) Hoek 1963相似: 如多營漂浮生長,呈現(xiàn)弱化的向頂生長,藻絲長、分枝稀疏。但也有研究將采自中國的樣品(編號P02,鑒定為C.cf.glomerata)和采自冰島的樣品(編號B50,鑒定為球剛毛藻C. globulina)歸入clade 4。該支系的藻類究竟是溪生剛毛藻C. rivularis或球剛毛藻C. globulina還是應(yīng)歸入種以下單元目前尚不能確定。赤水河藻株CS1401和clade 2內(nèi)其他序列雖然具有一定堿基差異,但將其劃分至clade 2時(shí),該分支內(nèi)的平均遺傳距離僅為0.001,最大遺傳距離值0.003,低于其余分支間的遺傳距離(表3和表4)。在形態(tài)上,CS1401藻株幼小時(shí)基部區(qū)域分枝較多,上端分枝少;成熟藻絲很長,可平行排列、相互纏繞;具有固著器。這些形態(tài)和Zhu等[11]所描述的clade 2形態(tài)具有相似性,因此將CS1401劃分至clade 2。此外,值得關(guān)注的藻株是CS0801和CS2202,二者形成的新支系clade 10和clade 7具有較近的親緣關(guān)系。形態(tài)上CS0801、CS2202也和clade 7藻株具有部分相似性: 均具有基部固著器,細(xì)胞直徑大小相近,CS0801有和clade 7藻株類似的分支卷曲現(xiàn)象,CS2202有和clade 7藻株類似的分枝偏側(cè)生現(xiàn)象。但是CS0801和CS2202藻株也具有不同于clade 7的一些特征,如藻絲手感細(xì)軟(細(xì)胞有時(shí)因其柔軟而彎曲或變形),細(xì)胞居間分裂占優(yōu)勢,CS0801藻株一個細(xì)胞上?？尚纬?—4個細(xì)胞輪生的現(xiàn)象。在遺傳距離上,當(dāng)clade 7不包含CS0801、CS2202序列時(shí),分支內(nèi)平均遺傳距離為0.002,最大的遺傳距離為0.003,低于其余分支間的遺傳距離。加入CS0801、CS2202后,clade7分支內(nèi)平均遺傳距離為0.003,最大的遺傳距離為0.007,該值高于clade 1與clade 4,clade 2與clade 4,clade 5與clade 6這3組分支間的遺傳距離,表明CS0801、CS2202和clade 7內(nèi)其他藻株序列差異較大(表3和表4)。綜合形態(tài)和序列數(shù)據(jù),本研究將CS0801、CS2202劃分至一個新clade,即clade10。

表3 淡水剛毛藻各支系間的遺傳距離(基于SSU+ITS+LSU)Tab. 3 Between clade of freshwater Cladophora mean distance(based on SSU+ITS+LSU)

表4 淡水剛毛藻各支系內(nèi)的遺傳距離(基于SSU+ITS+LSU)Tab. 4 Within clade of freshwater Cladophora distance (based on SSU+ITS+LSU)

盡管本研究未進(jìn)行詳細(xì)的形態(tài)學(xué)報(bào)道,該流域所采集的4株編號為CS0821、CS3001、CS3003和YN1901 (clade 9)的剛毛藻藻株仍具有不同于典型剛毛藻的一些形態(tài)特征,如: 藻體不分枝,細(xì)長、簇狀,手感較硬,細(xì)胞圓柱形,直徑較大(180—429 μm),長寬比較小(0.5—3.3),通過固著器或者基部假根著生于水中巖石表面,同時(shí)可以產(chǎn)生豐富的側(cè)生假根。基于該種獨(dú)特的形態(tài)特征及分子數(shù)據(jù)支持,前期研究將其確定為剛毛藻屬一新種: 硬剛毛藻C. rigida[17]。該種較為少見,目前僅在赤水河流域和湖北咸寧有報(bào)道。除了clade 9藻株具有典型形態(tài)外,clade 1和clade 8也具有較為典型的特征。clade 1藻絲分枝十分旺盛、藻絲多呈鮮綠色,具有顯著的頂端生長優(yōu)勢,將其確定為團(tuán)集剛毛藻C. glomerata。Clade 8藻株目前僅報(bào)道于西藏地區(qū),該支系位于淡水剛毛藻類群的基部,和青海剛毛藻(咸水種)有較近親緣關(guān)系[11,32]。Clade 8藻絲非常纖細(xì),頂端細(xì)胞直徑大小僅為19.8—30.5 μm,頂端細(xì)胞末端會呈現(xiàn)典型的錐狀或刺狀;分枝有時(shí)呈“Z”字形,與主枝夾角成鈍角[11]。當(dāng)前,一些典型剛毛藻種類如: 溪生剛毛藻C. rivularis、脆弱剛毛藻C. fracta和球剛毛藻C. globulina等,缺乏完整有效的分子數(shù)據(jù),并未加入到SSU+ITS+LSU聯(lián)合分析中。模式標(biāo)本缺乏有效的分子序列、不同支系間形態(tài)特征的重疊性及缺乏標(biāo)準(zhǔn)的診斷特征都使得當(dāng)前對各個clade給出確切種名較為困難。

值得注意的是,近年來隨著全球越來越多剛毛藻目樣品的獲取和分析,傳統(tǒng)依靠形態(tài)特征所定義的剛毛藻目內(nèi)各屬的界限正逐漸被打破: 如分枝根枝藻(R. ramosum)和厚壁根枝藻(R. pachydermum)具有類似剛毛藻的真正分枝;本研究采集的硬剛毛藻(C. rigida)展現(xiàn)的典型的不分枝形態(tài)、較大的細(xì)胞直徑和較小的細(xì)胞長寬比使其看起來更像硬毛藻;中國發(fā)現(xiàn)的10億年前的海藻化石Proterocladus antiquus,其形態(tài)則和擴(kuò)展剛毛藻C. herpestica、分枝根枝藻R. ramosum非常相似[17,33—35]。這種不同屬間形態(tài)特征的相似性和多樣性形成原因尚不清楚。有研究顯示,石莼綱是綠藻門中形態(tài)和細(xì)胞多樣性極其豐富的一個綱,剛毛藻目又是該綱代表性的一大類群,石莼綱內(nèi)藻類的多樣性可能與該綱分化自成冰紀(jì)(Cryogenian)或之前時(shí)期所處的特殊地球環(huán)境有關(guān)[35,36]。

本研究對赤水河流域剛毛藻多樣性開展了調(diào)查,采集生境以河流沿岸為主。實(shí)際上剛毛藻具有十分廣泛的地理分布,除河流沿岸帶以外，湖泊、水庫、池塘、溝渠、瀑布、潮濕地表甚至樹皮等亞氣生環(huán)境也適于其生長。更廣泛生境的樣品調(diào)查將是下一步研究的內(nèi)容,也將幫助我們進(jìn)一步理解剛毛藻目樣品的地理分布及其演化關(guān)系。