崔瀟婷，洪偉鳴，王 榕，許 瑞

（江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院動物藥學(xué)院，江蘇 泰州 225300）

白頭翁湯作為傳統(tǒng)的治痢疾方劑，具有抗菌、消炎、增強(qiáng)免疫力等多種功能，且有利于患者的病后恢復(fù)，故在臨床上應(yīng)用較多[1]。根據(jù)中獸醫(yī)辨證論治的原則，復(fù)方白黃散膠囊以白頭翁湯為基礎(chǔ)，進(jìn)行科學(xué)組方及處方篩選，以清熱解毒、涼血止痢作為立方依據(jù)，可主治犬濕熱瀉痢型腹瀉[2-4]。鑒于中藥復(fù)方是一個比較復(fù)雜的系統(tǒng)，為進(jìn)一步提供臨床應(yīng)用依據(jù)，本試驗從抗炎和抗腹瀉這兩個方面對其藥效學(xué)展開初步研究，為復(fù)方白黃散膠囊的大規(guī)模生產(chǎn)、最終的藥效學(xué)評價和臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 主要試劑

復(fù)方白黃散膠囊，自制；甲醛（AR）、乙醚（AR），購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；氫化可的松片，購自北京雙鶴藥業(yè)股份有限公司；氯化鈉注射溶液，購自南京小營藥業(yè)集團(tuán)有限公司；蓖麻油，購自鄒平卓濤生物科技有限公司；番瀉葉提取物，購自陜西寶禾生物科技有限公司。

1.2 主要儀器

XS105電子分析天平 （瑞士梅特勒-托利多有限公司）；DST673電子秤 （蘇州市蘇杭科技器材有限公司）；YLS-25A電動耳腫打孔器（濟(jì)南益延科技發(fā)展有限公司）；PV-200大鼠足趾容積測定儀 （成都泰盟科技有限公司）。

1.3 實驗動物

純昆明種小鼠[體重（20±2）g 左右]和健康 Wistar大鼠[體重（200±20）g]，由江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院實驗動物中心提供，雌雄各一半，統(tǒng)一喂養(yǎng)。大鼠和小鼠分開飼養(yǎng)，同時根據(jù)性別分籠飼養(yǎng)。動物房日常溫度為（20±2）℃，濕度為（60±5）%，環(huán)境保持安靜無噪音。

1.4 抗炎試驗

1.4.1 耳郭腫脹試驗。取健康無傷的昆明種小白鼠50只，雌雄各半。分為5組，分別是復(fù)方白黃散膠囊高劑量組（20 g/kg·BW）、中劑量組（15 g/kg·BW）、低劑量組（10 g/kg·BW）、陽性對照組（氫化可的松）和空白對照組（生理鹽水）。每組隨機(jī)選取10只小鼠，雌雄各半。其中，復(fù)方白黃散膠囊組采用灌胃給藥法，藥物等體積但濃度不同。每次給藥0.4 mL，每天1次，持續(xù)5 d。陽性對照組（氫化可的松）采用腹腔注射給藥法，按 0.01 g/kg·BW 的劑量注射，每天1次，持續(xù)5 d。空白對照組每天1次灌胃，灌入0.4 mL生理鹽水，持續(xù)5 d。

每組在最后一次給藥30 min后，于小鼠左耳用移液槍滴灑20 μL的二甲苯，并均勻地涂抹在耳朵的兩面。對右耳不做任何處理，只作為空白對照。致炎30 min后，利用頸脫臼法處死所有小鼠，用手術(shù)剪沿耳根基線把左右兩耳都剪下來。在同一部位用直徑6 mm的打孔器獲得圓耳片，分別稱重，兩耳的重量差即是其腫脹度（衡量炎癥的一項指標(biāo)）[5]。計算出腫脹抑制率，比較復(fù)方白黃散膠囊不同濃度的抑菌效果。計算公式如下：

1.4.2 足趾腫脹試驗。取雄性SD大鼠50只，隨機(jī)分為5組（同1.4.1）。試驗開始前對大鼠禁食不禁水。每組每天給藥2次，連續(xù)給藥1周。第7天時在大鼠的踝關(guān)節(jié)處劃線標(biāo)記，用足趾容積測定儀測定其后腿的左足趾和右足趾的體積，計為足正常體積。最后一次給藥30 min后分別在各組大鼠后腿的左右足趾腱膜下注射0.05 mL新鮮的10%蛋清致大鼠腫脹發(fā)炎。注射后0.5、1、1.5和2 h，測量大鼠后腿的左右足體積，共測量3次，取平均值，與給藥前足趾體積進(jìn)行比較，其腫脹的體積即被作為試驗考核的指標(biāo)。其后進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，比較各組間差異的顯著性。

1.4.3 棉球肉芽腫試驗。實驗動物的選取、分組及給予劑量參照1.4.1。用乙醚麻醉小鼠后，再用碘伏對其背部進(jìn)行消毒。在無菌條件下于其背部切一個0.5 cm的小口，向兩側(cè)腋下各植入1個備用的無菌棉球（5 mg），縫合后對各組依次給藥，每天給藥1次，連續(xù)8 d。最后一次給藥1 h后處死小鼠，將棉球取出，剝離附著在棉球上的結(jié)締組織并放入烘箱中存留2 h，減去原棉球的重量，計算肉芽凈重[6]。以其作為考核指標(biāo)，比較各組間差異的顯著性。

1.5 抗腹瀉試驗

1.5.1 蓖麻油致腹瀉試驗。取健康無傷的昆明種小白鼠30只，雌雄各一半。分為3組，分別為復(fù)方白黃散膠囊高劑量組（2 g/kg·BW）、復(fù)方白黃散膠囊低劑量組（0.5 g/kg·BW）、空白對照組（生理鹽水）。 每組隨機(jī)選取10只小鼠，雌雄各半。對每組小鼠按每只0.4 mL的固定標(biāo)準(zhǔn)灌胃給藥，每天灌胃1次，持續(xù)1周。給藥期間正常提供食物和水。第7天最后一次灌胃0.5 h后，給每只小鼠灌入0.2 mL蓖麻油。將小鼠分別關(guān)在不同的鼠籠里，每只籠子均提前鋪好白紙。給予蓖麻油后對小鼠斷食斷水，觀察8 h，每隔1 h換紙1次。糞便外形不正常，或者表現(xiàn)為水樣、血樣，都被視為腹瀉糞便[7]。根據(jù)紙上的便灘數(shù)量記錄腹瀉次數(shù)。其后進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。

1.5.2 番瀉葉致腹瀉試驗。實驗動物的選取、分組及飼養(yǎng)管理參照1.5.1。第7天最后一次灌胃1 h后，給每只小鼠由胃灌入0.5 mL的番瀉葉煎劑。將小鼠分別關(guān)在不同的鼠籠里，每只籠子均提前鋪好紙張。觀察8 h內(nèi)小鼠的活動情況，在此過程中斷食斷水，并每隔1 h換紙1次。根據(jù)紙上的便灘數(shù)量記錄腹瀉次數(shù)并進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。

1.6 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)通過SPSS 18.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 復(fù)方白黃散膠囊的抗炎作用

2.1.1 耳郭腫脹試驗。由表1可知，與空白對照組相比，試驗組和陽性對照組的腫脹度均減小，且復(fù)方白黃散膠囊的高、中兩個劑量組和陽性對照組小鼠的腫脹度均極顯著地降低（P＜0.01）。復(fù)方白黃散膠囊高、中、低3個劑量組對小鼠耳朵腫脹的抑制率分別是50.22%、31.52%和12.34%。其中高劑量組的抑菌效果優(yōu)于陽性對照組，說明復(fù)方白黃散膠囊對二甲苯導(dǎo)致的小鼠耳朵炎癥有一定的抑制效果。

表1 對二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響

2.1.2 足趾腫脹試驗。由表2可知，注射蛋清0.5 h后大鼠足趾腫脹較為明顯，隨著炎性物質(zhì)滲出厚度的增加，試驗組和陽性對照組對炎癥反應(yīng)都呈現(xiàn)出較強(qiáng)的抑制作用，給藥后腫脹逐漸消退。與空白對照組相比，給藥后高劑量組和陽性對照組及中劑量組給藥2 h后大鼠足趾腫脹程度極顯著地降低（P＜0.01），而中劑量組在給藥 0.5～1.5 h后、低劑量組在給藥2 h后也顯著降低了足趾腫脹（P＜0.05）。故復(fù)方白黃散膠囊對蛋清導(dǎo)致的大鼠足趾炎癥有一定的抑制效果。

表2 對蛋清所致大鼠足趾腫脹的影響

2.1.3 棉球肉芽腫試驗。由表3可知，與空白對照組相比，陽性對照組極顯著地降低了小鼠炎癥水平（P＜0.01），復(fù)方白黃散膠囊的高、中、低劑量組與空白對照組相比顯示出一定的抑制作用，但是差異不顯著（P＞0.05）。說明復(fù)方白黃散膠囊對棉球?qū)е碌娜庋磕[抗炎效果不強(qiáng)。

表3 棉球肉芽腫試驗結(jié)果

2.2 復(fù)方白黃散膠囊的抗腹瀉作用

2.2.1 蓖麻油致腹瀉試驗。由表4可知，與空白對照組相比，復(fù)方白黃散膠囊高、低劑量組極顯著地降低了由蓖麻油導(dǎo)致的小鼠腹瀉（P＜0.01）?？梢姀?fù)方白黃散膠囊高、低劑量組對蓖麻油導(dǎo)致的小鼠腹瀉均有較好的抑制效果。

表4 復(fù)方白黃散膠囊對蓖麻油所致小鼠腹瀉的影響

2.2.2 番瀉葉致腹瀉試驗。由表5可知，與空白對照組相比，復(fù)方白黃散膠囊高、低劑量組極顯著地降低了由番瀉葉導(dǎo)致的小鼠腹瀉（P＜0.01）?？梢姀?fù)方白黃散膠囊高、低劑量組對番瀉葉導(dǎo)致的小鼠腹瀉均有較好的抑制效果。

表5 復(fù)方白黃散膠囊對番瀉葉所致小鼠腹瀉的影響

3 討論

3.1 對復(fù)方白黃散膠囊抗炎作用的討論

小鼠耳郭腫脹和大鼠足趾腫脹炎癥模型是實驗室常用的炎癥模型，采用的致炎佐劑分別是二甲苯和蛋清，這兩者所致的腫脹都屬急性炎癥。在小鼠體內(nèi)植入棉球是常用的肉芽腫形成模型，其與臨床上的慢性炎癥相似，故為慢性炎癥試驗。通過試驗結(jié)果可以看出，復(fù)方白黃散膠囊對急性炎癥呈現(xiàn)出明顯的抑制作用，有較好的抗炎效果，但對于慢性炎癥效果并不明顯。炎癥反應(yīng)與動物體內(nèi)釋放的致炎介質(zhì)有關(guān)，比如前列腺素、緩激肽等，故本研究認(rèn)為復(fù)方白黃散膠囊有可能抑制了這些物質(zhì)的釋放，從而在小鼠體內(nèi)發(fā)揮出較強(qiáng)的抗炎作用。

3.2 對復(fù)方白黃散膠囊抗腹瀉作用的討論

本研究采用蓖麻油和番瀉葉這兩種刺激性物質(zhì)為誘導(dǎo)劑，建立不同的小鼠腹瀉模型，然后通過觀察稀便次數(shù)計算腹瀉指數(shù)，以此對藥物抗腹瀉的效果進(jìn)行評價。結(jié)果表明，復(fù)方白黃散膠囊抗腹瀉的作用機(jī)制廣泛，對蓖麻油引起的小腸性腹瀉和番瀉葉引起的大腸性腹瀉都有顯著的抑制效果，說明其對刺激性腹瀉有一定的抑制效果，是較好的抗腹瀉藥物。