李雨濃，韋偉，周音頻

急性心肌梗死（AMI）是心肌組織急性缺血缺氧導致的心肌壞死性疾病，長期供氧不足與耗氧增加導致氧供需失衡[1]，臨床表現(xiàn)多為嚴重的心絞痛癥狀，口服硝酸酯類藥物不能緩解[2]。冠狀動脈（冠脈）粥樣斑塊的形成被認為是AMI病變形成的基礎，在AMI發(fā)生前多經歷心肌缺血缺氧的病理改變及血栓形成，最終形成冠脈完全阻塞，出現(xiàn)心肌壞死癥狀[3]。目前臨床評估AMI的實驗室指標多為心肌損傷的血清標記物，如肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、心肌肌鈣蛋白（cTn）和乳酸脫氫酶（LDH）等，其中cTn是人體心肌收縮時重要的血清調節(jié)蛋白復合物，已成為診斷心肌損傷的金標準[4,5]。在慢性心力衰竭、慢性腎病、手術、高強度運動后均可引發(fā)心臟損傷，進而表現(xiàn)出較高水平血清標記物異常，導致其特異性較低，因此需具有較高診斷特異性與靈敏度的生物標記物進行補充[6]。有研究發(fā)現(xiàn)，miR-542-5p在體內通過cAMP通路影響心肌肌絲蛋白進而調節(jié)心肌收縮功能，miR-542-5p異常增高表明患者體內存在較多活性氧，加劇細胞損傷，因此miR-542-5p的異常表達水平可能影響了心肌細胞纖維化與心肌損傷過程[7]。因此，本研究選取我院收治的108例AMI患者為研究對象，探討AMI患者的miR-542-5p表達水平與心肌損傷的相關性，以期為AMI患者的預防、診治提供補充依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 研究對象選取重慶大學附屬涪陵醫(yī)院心血管內科于2019年5月至2021年5月收治的診斷為AMI患者108例為研究對象。根據(jù)Killip分級進行分組：1級：無明確心力衰竭（心衰）現(xiàn)象；2級：有左心衰癥狀，肺部有啰音，肺野＜50%；3級：發(fā)生急性肺水腫，全肺有大小干、濕啰音；4級：發(fā)生心源性休克，同時患者出現(xiàn)肺水腫；患者的一般資料見表1，患者及家屬均知情同意，本研究經我院倫理委員會審批通過。

1.2 診斷標準觀察組患者符合AMI相應診斷標準[8]，臨床表現(xiàn)為原有心絞痛癥狀復發(fā)且加劇，即突然性劇烈持久的胸骨后或心前區(qū)壓榨性疼痛，有瀕死感，對硝酸甘油的作用效果變差或無效。影像學改變主要為新出現(xiàn)Q波、ST段抬高以及ST-T動態(tài)演變。

1.3 納入與排除標準納入標準：①符合上述AMI相應診斷標準并行冠脈造影；②既往無慢性心力衰竭、慢性腎病、心肌炎、高血壓性心臟病等器質性疾?。虎刍颊咧橥獠⒆栽竻⑴c本研究。排除標準：①合并慢性腎功能不全；②近期有外傷及重大手術史；③合并肝癌、胃癌、肺癌等惡性腫瘤患者；④入院2 d內放棄治療的患者。

1.4 觀察指標血漿樣本的采集與保存：所有納入受試者均于入院次日靜脈采血5 ml至EDTA抗凝試管中，以3000轉/min轉速離心10 min，取上層血漿至3 ml EP管中，密封存于-20℃環(huán)境保存。心肌損傷標志物含量測定：嚴格按照試劑盒說明操作，采用ELIISA法檢測CK、CK-MB、LDH水平，免疫比濁法測定高敏肌鈣蛋白I（hs-cTnI）水平。miR-542-5p表達水平測定：取250 ul血漿加入750 μl TRIzol，混勻后加入50 pm線蟲celmir-39充分振蕩，至蛋白復合物解離。繼續(xù)加入200 μl氯仿，充分振蕩后常溫下靜置10 min，以12 000轉/min，4℃下離心10 min，取上清液置于試管中，依次加入2 μl糖原、600 μl異丙醇，混勻后密封存于-20 ℃環(huán)境過夜。以12 000轉/min，4℃下離心10 min，棄上清，對沉淀物用95%酒精溶液反復清洗，加入10 μl DEPC混勻得到RNA樣本。采用實時聚合酶鏈反應儀對逆轉錄后的樣本測定miR-542-5p相對表達水平。

1.5 統(tǒng)計學分析本研究數(shù)據(jù)均采用SPSS 22.0進行統(tǒng)計分析，其中計量資料采用（均值±標準差）的形式呈現(xiàn)，統(tǒng)計分析采用t檢驗進行分析；計數(shù)資料采用頻數(shù)（%）形式呈現(xiàn)，采取χ2檢驗進行統(tǒng)計分析，相關性分析采用Spearman相關性分析方法進行統(tǒng)計分析。制作ROC曲線進行指標預測效能評價。

2 結果

2.1 四組患者臨床資料對比根據(jù)AMI嚴重程度分級，將患者分為四組，分別為35例、33例、26例和14例，對比四組受試者的一般資料，四組在性別、年齡及合并癥方面無明顯差異（P＞0.05），具有可比性，表1。

2.2 四組血清CK、CK-MB、LDH及hs-cTnI水平對比四組受試者血清學指標CK、CK-MB、LDH及hs-cTnI檢測對比發(fā)現(xiàn)，患者各指標水平均隨著Killip分級等級的增加而逐漸升高，且數(shù)據(jù)差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），提示心肌損傷越嚴重，上述血清學指標增高越顯著；反之，CK、CK-MB、LDH及hs-cTnI水平越高，AMI患者心肌損傷程度越嚴重，表2。

表2 四組血清CK、CK-MB、LDH及hs-cTnI水平對比

2.3 四組患者的外周血漿miR-542-5p表達水平對比對四組患者的外周血漿中miR-542-5p表達水平進行測定，結果顯示，隨著Killip分級的增加，miR-542-5p表達水平均不斷增加，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），圖1。

圖1 四組患者的外周血漿miR-542-5p表達水平比較

2.4 miR-542-5p表達與CK、CK-MB、LDH及hs-cTnI水平相關性分析將外周血漿中miR-542-5p表達水平與血清中CK、CK-MB、LDH及hs-cTnI水平進行相關性分析，miR-542-5p表達水平與四項血清學指標水平均呈顯著性正相關，其中CK（r=0.508）、CK-MB（r=0.507）、LDH（r=0.501）、hs-cTnI（r=0.493），具有統(tǒng)計學意義（P＜0.001），圖2。

圖2 相關性分析

2.5 效能評價分析利用外周血漿中miR-542-5p表達水平預測評估AMI的發(fā)生，可見曲線下面積為0.656（95%CI：0.604～0.712，P＜0.001），約登指數(shù)最大值為0.196，對應最佳截斷值為2.026，靈敏度0.592，特異度為0.604，圖3。

圖3 miR-542-5p表達水平預測AMI發(fā)生的關系

3 討論

AMI是目前心血管疾病死亡率與發(fā)病率較高的主要原因，其發(fā)生時可引起患者心衰及缺血癥狀的發(fā)生[9,10]。缺血再灌注是目前臨床治療AMI較有效的方法之一，可一定程度上改善患者預后。早期的突發(fā)性血運重建會導致血流的突發(fā)性損傷，引起缺血再灌注損傷[11]。目前對于AMI及缺血再灌注對心肌的損傷具體機制仍不清晰，因此，通過進一步了解AMI心肌損傷的機制對認識及早期診斷心肌損傷對AMI的臨床治療具有重要意義。

既往研究報道，當心肌缺血缺氧發(fā)生時，與心肌損傷相關的酶分子釋放入血液循環(huán)，引發(fā)心肌損傷相關酶的異常的高水平[12]。CK、CKMB、hs-cTnI是目前臨床用于評估心肌損傷的重要實驗室標記物，CK-MB主要參與心肌細胞的能量代謝，hs-cTnI對保持心肌細胞的完整性具有重要的意義，然而CK-MB在AMI診斷方面缺陷較為明顯[13,14]。AMI患者發(fā)生胸痛的4 h內cTnT在的診斷敏感性僅50%，有較低的早期診斷特異性[15]，因此阻礙了CK-MB的進一步應用。

miRNA是一類單鏈非編碼RNA，在心肌細胞凋亡、壞死、自噬等過程中參與了重要的調控作用[16]。大量研究顯示，miRNA通過活化調控血管內皮細胞參與心肌細胞損傷，miR-138可通過JNK/c-jun細胞信號通路對缺氧導致的凋亡具有顯著的保護作用，抑制miR-92a的表達對損傷的心肌細胞具有一定的保護作用[17,18]。有資料顯示，miR-145-5p可通過負性調控CD40產生對心肌細胞的凋亡與炎癥反應的作用，進而保護缺血損傷的心肌組織[19,20]。本研究初步探討了miR-542-5p在AMI患者中的表達，結果提示miR-542-5p在AMI患者體內存在較高的表達水平。因此，本研究比較AMI患者miR-542-5p表達與CK、CKMB、LDH及hs-cTnI水平相關性，制作ROC曲線對其預測AMI的發(fā)生的效能進行評價。結果顯示，miR-542-5p表達水平均與四項血清學指標水平呈顯著性正相關，同時ROC曲線提示預測較為準確，曲線下面積0.656，95%CI：0.604～0.712，P＜0.001，約登指數(shù)最大值為0.196，對應最佳截斷值為2.026，靈敏度0.592，特異度為0.604，提示AMI患者miR-542-5p表達水平與心肌損傷程度密切相關，原因可能為心肌缺血缺氧時，增高的miR-542-5p水平抑制了心肌細胞的線粒體功能，導致心肌萎縮，心臟預后變差。另有文獻報道，miR-542-5p可能是通過抑制心肌細胞的自噬相關機制進而影響心肌細胞功能；因本研究仍處于研究初步階段，且樣本量較少，更深層次的發(fā)生機制需進一步研究明確。

綜上所述，AMI患者血清學指標CK、CKMB、LDH及hs-cTnI水平隨心肌損傷加重而增加，同時血漿中miR-542-5p水平也增加，提示miR-542-5p可作為診斷AMI患者心肌損傷程度的標志物，為臨床AMI患者的預防、診治提供補充依據(jù)。