張　杰　李軍生　覃　懿　黃國(guó)霞　閻柳娟　馬　紀(jì)

散射共振光譜法優(yōu)化DNA去除溴化乙錠污染物

張杰1,2李軍生1,2覃懿3黃國(guó)霞1,2閻柳娟1,2馬紀(jì)1,2

（1.廣西科技大學(xué)，廣西 柳州 545006；2.廣西糖資源綠色加工重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西 柳州 545006；3.中國(guó)科技開發(fā)院廣西分院，廣西 南寧 530022）

文章利用紫外吸收光譜研究了DNA與溴化乙錠 (EtBr)的相互作用、散射共振光譜研究了二者的相互作用強(qiáng)度及影響因素，最后通過磁珠分離EtBr-DNA復(fù)合物以去除EtBr污染物。紫外可見吸收光譜結(jié)果表明DNA與EtBr的結(jié)合模式為嵌插結(jié)合。散射共振光譜和EtBr去除實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，CaCl2、SDS、CTAB、葡萄糖和尿素能夠促進(jìn)二者的結(jié)合，使DNA結(jié)合飽和值變大，提高EtBr的去除效率；NaCl抑制二者的結(jié)合，使DNA結(jié)合飽和值變小，降低EtBr的去除效率。研究為高效去除EtBr污染物提供新見解。

溴化乙錠；DNA；去除

引言

溴化乙錠（ethidium bromide，EtBr）具有抗病毒功能，為獸醫(yī)領(lǐng)域中一種抗錐蟲的藥物，可用于治療或預(yù)防由錐蟲亞目原生動(dòng)物引起的感染[1,2]。然而，自20世紀(jì)60年代Lepecq和Paoletti首次報(bào)道EtBr與DNA結(jié)合熒光顯著增強(qiáng)（約25倍）現(xiàn)象后，使其成為了一種不可替代的核酸染料，并廣泛應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)室核酸染色[3]。但是，越來越多的研究結(jié)果表明，EtBr可能是一種非常強(qiáng)的誘變劑、致癌物或致畸物，因?yàn)樗梢愿蓴_體內(nèi)核酸的合成[4]。盡管有這樣的潛在危害，EtBr仍舊大范圍地在實(shí)驗(yàn)室中使用。水溶性極強(qiáng)且在自然環(huán)境中較穩(wěn)定的EtBr不經(jīng)過特殊處理直接排放至下水道，無疑會(huì)給環(huán)境帶來巨大威脅。到目前為止，去除EtBr的常用方法是吸附和降解，但這些常規(guī)處理方法產(chǎn)成的復(fù)合物可能會(huì)給污染物的處理帶來更大的負(fù)擔(dān)，因此亟需探索一種簡(jiǎn)單高效環(huán)保的去除EtBr污染物的方法。

DNA是具有高度特異性功能的生物聚合物，已在環(huán)境保護(hù)領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。有學(xué)者提出基于嵌入原理，利用DNA俘獲消除黃曲霉毒素、吖啶、多環(huán)芳烴等有害物質(zhì)。這些已有的研究成果為構(gòu)建選擇性消除EtBr污染物提供了新見解。已有大量實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明EtBr是經(jīng)典的DNA嵌入[5,6]，但研究其相互作用的強(qiáng)度及其影響因素的報(bào)道很少見。因此，探究DNA與EtBr的結(jié)合強(qiáng)度可為基于嵌插原理消除EtBr提供理論基礎(chǔ)。

紫外-可見光譜法是探究小分子與DNA相互作用模式的常用方法。此前，小分子與DNA的紫外-可見光譜中可觀察到紅移和減色現(xiàn)象，以確定兩者的相互作用模式。共振光散射（RLS）分析法能高靈敏度地檢測(cè)到核算、蛋白質(zhì)等生物大分子的結(jié)構(gòu)變化，已應(yīng)用于探究DNA和小分子體外相互作用的影響。磁珠表面豐富的活性基團(tuán)，可分離出溶液中的DNA。因此本文利用紫外-可見光譜法研究EtBr與DNA的相互作用模式，共振光散射法研究EtBr與DNA的相互作用強(qiáng)度，并計(jì)算EtBr的DNA結(jié)合飽和值反映其結(jié)合DNA能力的大小，最后通過磁珠分離出EtBr-DNA復(fù)合物，為選擇性去除EtBr污染物構(gòu)建一種高效環(huán)保的新途徑。

1　實(shí)驗(yàn)部分

1.1　儀器及試劑

Gary-60紫外可見分光光度計(jì)（安捷倫科技公司）；RF-5301PC熒光分光光度計(jì)（日本島津）；pH計(jì)（PHS-25CW，上海思龍科學(xué)儀器有限公司）；數(shù)控水浴鍋（HH-4，國(guó)華電器有限公司）。

EtBr（上海源葉，10 mg/mL，純度＞99.9%），用pH 7.40的Tris-HCl緩沖溶液稀釋成所需濃度。DNA參照劉潤(rùn)芝[7]的方法從鯉魚魚白中提取，提取得到的DNA在紫外分光光度計(jì)中測(cè)量其在230 nm（A230）、260 nm（A260）和280 nm（A280）處的吸光度值，當(dāng)A230/A280＞2.0且A260/A280=1.8時(shí)表明DNA純度達(dá)標(biāo)，方可用二次水配置成相應(yīng)濃度用于實(shí)驗(yàn)。DNA綁定液（2 M KCl，0.01 M Tris，pH 6.3）用超純水配制；Tris-HCl緩沖溶液的配制方法參照生化試劑指導(dǎo)手冊(cè)。

1.2　方法

1.2.1EtBr與DNA相互作用的紫外可見吸收光譜

在1.0 cm×1.0 cm的石英比色皿中加入2 mL EtBr溶液（3.0×10-5mol/L）。接著逐次往EtBr溶液中滴加10 μL DNA溶液（1.0×10-3mol/L），混合均勻后靜置15 min，掃描其在350 nm～600 nm范圍內(nèi)的紫外吸收光譜。

1.2.2EtBr與DNA相互作用的散射共振光譜

在1.0 cm×1.0 cm的石英比色皿中加入3 mL EtBr溶液 (1.138×10-5mol/L)，設(shè)定熒光分光光度計(jì)λem=λex進(jìn)行同步掃描。接著逐次往EtBr溶液中滴加10 μL DNA溶液（3.6×10-5mol/L），混合均勻后靜置15 min，進(jìn)行同步掃描并記錄。取362 nm處的共振峰值記為RLS強(qiáng)度值。

1.2.3EtBr與DNA的結(jié)合飽和值

在掃描散射共振光譜時(shí)，當(dāng)EtBr溶液中加入DNA，其RLS強(qiáng)度值會(huì)不斷增大；當(dāng)兩者結(jié)合達(dá)到飽和時(shí)，隨著DNA的繼續(xù)加入RLS強(qiáng)度值開始減小。EtBr的RLS強(qiáng)度值最大時(shí)對(duì)應(yīng)的DNA濃度即為飽和DNA濃度，因此DNA結(jié)合飽和值可由以式（1）計(jì)算：

1.2.4EtBr去除實(shí)驗(yàn)

將1.0 mL EtBr溶液（0.5 μg/mL）和0.1 mL DNA溶液（0.2 mg/mL）轉(zhuǎn)移到EP管中，于35 ℃的搖床中反應(yīng)15 min，然后加入磁珠（5.0 mg）和DNA綁定液（1 mL），在搖床中繼續(xù)反應(yīng)45 min。反應(yīng)結(jié)束后，將EP管放入磁力分離器中靜置5 min，轉(zhuǎn)移上清液至新的EP管中，于紫外分光光度計(jì)中測(cè)定其在480 nm處的吸光度，根據(jù)濃度和吸光度換算出樣品的EtBr殘留濃度。根據(jù)以式（2）、式（3）計(jì)算EtBr去除效率（R，%）和DNA吸附量（q，mg/g）。

式中C0是EtBr的初始濃度（μg/mL)，Cf是EtBr的殘留濃度（μg/mL），V是溶液的體積（mL），W是DNA的重量（μg）。

2　結(jié)果與討論

2.1　EtBr與DNA相互作用的紫外可見吸收光譜

如圖1所示，EtBr溶液中不含DNA時(shí)，在480 nm出現(xiàn)明顯的紫外吸收峰，然而隨著DNA濃度的增加，EtBr溶液的紫外-可見光譜觀察到明顯的紅移，特征峰的位置從480 nm移動(dòng)到495 nm（Δλmax = 15 nm），吸光度從0.34減小為0.19（H = 44.12%）。這可以解釋為EtBr分子中的稠環(huán)結(jié)構(gòu)與DNA發(fā)生相互作用[8]，其π*軌道與DNA堿基對(duì)的π電子軌道耦合，產(chǎn)生π-π疊加效應(yīng)，導(dǎo)致π→π*的躍遷能量和躍遷概率降低，從而使吸收光譜出現(xiàn)減色效應(yīng)。因此，EtBr與DNA之間發(fā)生了嵌插相互作用，形成復(fù)合物。

圖1　EtBr分別在有和沒有DNA情況下的紫外吸收光譜變化（室溫，pH7.4）. a-h: [EtBr]= 1.9009×10-5 mol/L, [DNA]= 0, 0.39, 0.72, 1.04, 1.37, 1.70, 2.02,2.41×10-4 mol/L.

2.2　EtBr與DNA相互作用的散射共振光譜

2.2.1溫度對(duì)EtBr與DNA相互作用的影響

如圖2所示，EtBr-DNA復(fù)合物的RLS強(qiáng)度在35 ℃達(dá)到最大。當(dāng)體系溫度低于35 ℃時(shí)，分子熱運(yùn)動(dòng)速度變慢導(dǎo)致EtBr與DNA的碰撞機(jī)會(huì)減少，不利于兩者的結(jié)合；當(dāng)溫度高于35 ℃時(shí)，DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)受到輕微的影響，導(dǎo)致兩者的結(jié)合強(qiáng)度受到影響，使RLS強(qiáng)度下降。因此，EtBr與DNA相互作用的最佳溫度35 ℃。

圖2　不同溫度下EtBr-DNA的RLS強(qiáng)度變化（pH7.4），[EtBr]=1.138×10-5 mol/L，[DNA]=0.25×10-5 mol/L（P＜0.05）

2.2.2pH對(duì)EtBr與DNA相互作用的影響

從圖3可知，pH從5.8增加至7.4時(shí)，EtBr與DNA的RLS強(qiáng)度逐漸增大，pH在7.4～9.0范圍內(nèi)迅速減小。這是因?yàn)榈陀趐H為7.4時(shí)，溶液中的H+與帶正電荷的EtBr發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)作用，減弱了EtBr和帶負(fù)電荷的DNA之間的靜電相互作用[9]，不利于兩者結(jié)合，導(dǎo)致RLS強(qiáng)度減小。當(dāng)pH高于7.4時(shí)，溶液中的OH-削弱了DNA表面基團(tuán)的質(zhì)子化，干擾了DNA與非電離EtBr的結(jié)合。因此，當(dāng)pH為7.4時(shí)EtBr與DNA相互作用強(qiáng)度最大。

圖3　不同pH條件下EtBr-DNA的RLS強(qiáng)度變化（35 ℃），[EtBr]=1.138×10-5 mol/L，[DNA]=0.25×10-5 mol/L（P＜0.05）

2.2.3環(huán)境共存物對(duì)EtBr與DNA相互作用的影響

如圖4(A)所示，在溫度為35 ℃、溶液的pH 為7.4時(shí)，隨著NaCl濃度的增大，EtBr-DNA復(fù)合物的RLS強(qiáng)度逐漸減小。這可以解釋為EtBr與DNA之間存在靜電相互作用，體系中引入的Na+富集在DNA結(jié)構(gòu)附近對(duì)EtBr產(chǎn)生斥力，打破了電荷平衡[10]。因此，NaCl的加入，不利于EtBr與DNA的結(jié)合。

如圖4(B)所示，在溫度為35 ℃、溶液的pH 為7.4時(shí)，隨著CaCl2濃度的增加，EtBr-DNA復(fù)合物的RLS強(qiáng)度呈先增大后減小的趨勢(shì)，當(dāng)CaCl2濃度為0.03 mol/L時(shí)RLS強(qiáng)度達(dá)到最大。適量的Ca2+會(huì)增加DNA結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性，有利于EtBr與DNA的結(jié)合；而Ca2+過多時(shí)會(huì)產(chǎn)生與Na+同樣的作用，抑制兩者的結(jié)合。因此，體系中加入0.03 mol/L CaCl2會(huì)增強(qiáng)EtBr與DNA的結(jié)合。

如圖4(C)所示，在溫度為35 ℃、溶液的pH 為7.4的條件下，當(dāng)SDS濃度增加至0.6×10-3mol/L時(shí)，EtBr-DNA復(fù)合物的RLS強(qiáng)度急速增加；繼續(xù)加入SDS溶液時(shí)，體系的RLS強(qiáng)度出現(xiàn)降低的趨勢(shì)。SDS為陰離子表面活性劑，它的引入會(huì)減弱DNA的親水性，從而EtBr更容易與DNA相結(jié)合[11]；當(dāng)SDS濃度過大時(shí)則會(huì)增加DNA的疏水性，DNA結(jié)構(gòu)發(fā)生卷曲使得堿基對(duì)不能完全裸露，不利于EtBr與DNA結(jié)合。因此，體系中加入0.6×10-3mol/L SDS可以促進(jìn)EtBr與DNA的結(jié)合。

如圖4(D)所示，在溫度為35 ℃、溶液的pH 為7.4時(shí)，1.6×10-4mol/L CTAB能夠使EtBr-DNA復(fù)合物的RLS強(qiáng)度達(dá)到最大。CTAB是一種陽離子表面活性劑，少量的CTAB可以增加溶液的表面活性，使DNA雙鏈更好地完全展開，有助于EtBr與DNA的結(jié)合；而過多CTAB會(huì)沉淀DNA，使DNA成為高度卷曲狀態(tài)，阻礙其與EtBr的結(jié)合。因此，體系中加入1.6×10-4mol/L CTAB可以促進(jìn)EtBr與DNA的結(jié)合。

如圖4(E)所示，設(shè)定溫度為35 ℃、溶液的pH 為7.4，當(dāng)溶液中葡萄糖的濃度為0.0016 mol/L時(shí)，EtBr-DNA復(fù)合物的RLS強(qiáng)度達(dá)到峰值；繼續(xù)增大葡萄糖的濃度時(shí)，RLS強(qiáng)度逐漸下降。結(jié)果說明溶液中加入少量的葡萄糖會(huì)促進(jìn)EtBr與DNA的結(jié)合；當(dāng)葡萄糖濃度過高時(shí)，溶液的黏度增大，不利于分子間的運(yùn)動(dòng)，從而導(dǎo)致EtBr與DNA的結(jié)合強(qiáng)度下降[12]。因此，體系中加入0.0016 mol/L 葡萄糖可以促進(jìn)EtBr與DNA的結(jié)合。

如圖4(F)所示，設(shè)定溫度為35 ℃、溶液的pH 為7.4，當(dāng)溶液中尿素的濃度增加至0.013 mol/L時(shí)，EtBr-DNA復(fù)合物的RLS強(qiáng)度有所增強(qiáng)，而尿素的濃度超過0.013 mol/L時(shí)，RLS強(qiáng)度逐漸變低。這是因?yàn)闈舛冗^高的尿素誘導(dǎo)DNA變性后結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，EtBr與DNA的相互作用受到影響，從而出現(xiàn)RLS強(qiáng)度下降的情況。因此，體系中加入0.013 mol/L 尿素有利于EtBr與DNA的結(jié)合。

圖4　(A)、(B)、(C)、(D)、(E)、(F)分別為在不同NaCl、CaCl2、SDS、CTAB、葡萄糖、尿素濃度下，EtBr-DNA復(fù)合物RLS強(qiáng)度的變化，[EtBr]=1.138×10-5 mol/L，[DNA]=0.25×10-5 mol/L（P＜0.05）

2.3　EtBr與DNA的結(jié)合飽和值

常溫下DNA與EtBr的散射共振光譜如圖5所示。EtBr在362 nm出現(xiàn)穩(wěn)定且明顯的共振峰。隨著DNA的不斷加入，EtBr-DNA復(fù)合物的RLS強(qiáng)度不斷增大，直至DNA過量時(shí)，體系的RLS強(qiáng)度出現(xiàn)下降的趨勢(shì)。這是因?yàn)樯⑸涔舱窆庾V能靈敏地檢測(cè)到體系中粒子大小的變化[10]，當(dāng)EtBr溶液中加入DNA后，EtBr迅速地與DNA發(fā)生嵌插相互作用形成體積較大的EtBr-DNA復(fù)合物，使得EtBr-DNA的共振信號(hào)急劇增加。當(dāng)加入過量DNA時(shí)，由于溶液中EtBr分子與DNA的結(jié)合達(dá)到飽和而不再發(fā)生相互作用，此時(shí)的DNA相對(duì)EtBr-DNA復(fù)合物的體積明顯變小，導(dǎo)致共振信號(hào)強(qiáng)度下降。所以當(dāng)體系的共振強(qiáng)度出現(xiàn)下降的情況，即可視為DNA已經(jīng)達(dá)到飽和狀態(tài)。根據(jù)公式（1）可計(jì)算出常溫下EtBr的DNA結(jié)合飽和值為13.87。

圖5　EtBr在加入DNA前后的共振光散射光譜變化（室溫，pH 7.4），[EtBr]=1.138×10-5 mol/L, a-e:[DNA]= 0,0.12,0.24,0.36,0.49,0.61,0.73,0.97,0.82×10-6 mol/L

DNA結(jié)合飽和值能客觀地反映出EtBr與DNA結(jié)合能力的大小，將EtBr溶液處于散射共振光譜探索出來的最佳結(jié)合條件，探究各條件下的DNA結(jié)合飽和值，結(jié)果如表1所示。與溫度為30 ℃、pH為7.4時(shí)相比，NaCl（0.01 mol/L）的引入會(huì)使EtBr的DNA結(jié)合飽和值減小11%，而CaCl2（0.03 mol/L）的加入會(huì)使DNA結(jié)飽和值增11%。溶液體系中加入表面活性劑SDS（0.6×10-3mol/L）、CTAB（1.6×10-4mol/L）時(shí)，EtBr的DNA結(jié)合飽和值有所提高，其中CTAB增大DNA結(jié)合飽和值的幅度要大于SDS。葡萄糖（0.0016 mol/L）和尿素（0.013 mol/L）均能促進(jìn)EtBr與DNA的結(jié)合，DNA結(jié)合飽和值分別提高9%和20%。

表1　EtBr在各條件下的DNA結(jié)合飽和值

2.4　DNA去除EtBr

表2列出了DNA在散射共振光譜技術(shù)探究出來的最佳條件下對(duì)EtBr的去除效率及吸附能力。與EtBr-DNA體系相比，加入NaCl會(huì)降低DNA對(duì)EtBr的去除率，去除能力降低4.16%；加入0.03 mol/L CaCl2、0.6×10-3mol/L SDS、1.6×10-4mol/L CTAB、0.0016 mol/L葡萄糖和0.013 mol/L尿素時(shí)，能增強(qiáng)DNA對(duì)EtBr的去除率，去除能力分別增大4.16%、1.12%、5.04%、5.19%、2.39%和1.20%，這與之前計(jì)算得到的DNA結(jié)合飽和值的趨勢(shì)一致。以上結(jié)果表明，基于EtBr與DNA嵌插相互作用去除環(huán)境中的EtBr污染物時(shí)，溶液體系中應(yīng)避免NaCl，加入0.03 mol/L CaCl2、0.6×10-3mol/L SDS、1.6×10-4CTAB、0.0016 mol/L葡萄糖或者0.013 mol/L尿素可提高去除效率。

表2　不同體系下DNA對(duì)EtBr的去除能力

3　結(jié)論

本文通過光譜學(xué)實(shí)驗(yàn)研究了EtBr與DNA的相互作用模式、結(jié)合強(qiáng)度及影響因素，并通過磁珠分離EtBr-DNA復(fù)合物以去除EtBr污染物。紫外可見吸收光譜結(jié)果證實(shí)了EtBr與DNA發(fā)生嵌插相互作用，并形成穩(wěn)定的復(fù)合物。散射共振光譜結(jié)果表明35 ℃、pH7.4為EtBr與DNA結(jié)合的最條件，0.03 mol/L CaCl2、0.6×10-3mol/L SDS、1.6×10-4CTAB、0.0016 mol/L葡萄糖和0.013 mol/L尿素能使EtBr-DNA復(fù)合物的RLS強(qiáng)度增大，NaCl可降低EtBr-DNA復(fù)合物的RLS強(qiáng)度。此外，EtBr的DNA結(jié)合飽和值的計(jì)算結(jié)果表明，適宜濃度下的CaCl2、SDS、CTAB、葡萄糖和尿素對(duì)EtBr與DNA的結(jié)合有促進(jìn)作用，DNA結(jié)合飽和值分別提高了9%、9%、20%、9%和20%；NaCl對(duì)二者的結(jié)合起阻礙作用，DNA結(jié)合飽和值降低了11%。DNA去除EtBr實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明， NaCl可使DNA對(duì)EtBr的去除率降4.16%；當(dāng)體系中加入0.03 mol/L CaCl2、0.6×10-3mol/L SDS、1.6×10-4CTAB、0.0016 mol/L葡萄糖或0.013 mol/L尿素能使DNA對(duì)EtBr的去除率分別增強(qiáng)4.16%、1.12%、5.04%、5.19%、2.39%和1.20%。以上結(jié)果為基于DNA與EtBr的嵌插作用去除EtBr污染物提供一種新的方法。

[1] Woolfe, G. The Trypanocidal action of phenanthridine compounds[J]. Annals of Tropical Medicine and Parasitology, 1952, 46(4): 285-288.

[2] Woolfe G. Trypanocidal action of phenanthridine compounds: effect of changing the quaternary groups of known trypanocides[J]. British Journal of Pharmacology, 2012, 11(3): 330-333.

[3] Lepecq J B, Paoletti C C. A fluorescent complex between ethidium bromide and nucleic acids. Physical-Chemical characterization[J]. Journal of Molecular Biology, 1967, 27(1): 87-106.

[4] 石立杰. 金屬卟啉催化的致癌、致突變劑無害化處理技術(shù)研究－氯化血紅素對(duì)溴化乙錠的催化轉(zhuǎn)化[J]. 2007(8): 46915.

[5] 馬立波，石昕，牛淑妍，等. 溴化乙錠與DNA相互作用的電化學(xué)及紫外-可見光譜研究[J]. 青島科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2003，24(5): 398-400.

[6] Vardevanyan P O, Arakelyan V B, Parsadanyan M A, et al. Analysis of experimental binding curves of EtBr with single-and double-stranded DNA at small fillings[J]. Modern Physics Letters B, 2014, 28(22): 1450178.

[7] 劉潤(rùn)芝. 從鯉魚精巢中提取脫氧核糖核酸(DNA)的研究[J]. 湖南師范大學(xué)自然科學(xué)學(xué)報(bào), 1988(3): 95-98.

[8] Chilina A R, Ming C, Ives D H, et al. A new method for the isolation of eukaryotic nuclear proteins[J]. Analytical Biochemistry, 1976, 72(1-2): 552-565.

[9] Nguyen V T, Nguyen T B, Chen C W, et al. Influence of pyrolysis temperature on polycyclic aromatic hydrocarbons production and tetracycline adsorption behavior of biochar derived from spent coffee ground [J]. Bioresource technology, 2019, 284: 197-203.

[10] Rajabi H R, Razmpour S. Spectrochimica acta part A: molecular and biomolecular spectroscopy[J]. Spectrochimica Acta-Part A: Molecular and Biomolecular Spectroscopy, 2009, 115(1-2): 269-274.

[11] Dias R L, Basso B, Donadio M V F, et al. Leucine reduces the proliferation of MC3T3-E1 cells through DNA damage and cell senescence[J]. Toxicology in Vitro: An International Journal Published in Association with Bibra, 2018, 48: 1-10.

[12] 李蔚侖，李軍生，黃國(guó)霞，等. 乙酰紫草素的潛在毒性機(jī)理研究及毒性評(píng)價(jià)[J]. 食品工業(yè)，2015, 36(5): 174-178.

Optimization of DNA removal of ethidium bromide pollutants by scattering resonance spectroscopy

In this paper, the intercalation between DNA and ethidium bromide (EtBr) was studied by UV absorption spectroscopy, and the interaction intensity and influencing factors were studied by scattering resonance spectroscopy. Finally, the ETBR-DNA complex was separated by magnetic beads to remove EtBr contaminants. The UV-vis absorption spectroscopy results showed that the binding mode of DNA and EtBr was intercalation binding. The results of the resonance light scattering spectrometry and EtBr removal experiments showed that CaCl2, SDS, CTAB, glucose and urea can promote the combination of the two, increase the saturation value of DNA binding and improve the removal efficiency of EtBr; NaCl inhibits the combination of the two, reduces the saturation value of DNA binding and reduces the removal efficiency of EtBr. This study provides new insights for the efficient removal of EtBr pollutants.

ethidium bromide; DNA; removal

O65

A

1008-1151(2022)06-0042-05

2022-04-01

廣西自然科學(xué)基金項(xiàng)目（2018GxNsFDA281030，2020GXNSFAAl59021）；國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（21966008）。

張杰（1993－），廣西科技大學(xué)生物與化學(xué)工程學(xué)院研究生，研究方向?yàn)樯锓肿拥幕瘜W(xué)修飾與功能研究。

李軍生，廣西科技大學(xué)生物與化學(xué)工程學(xué)院教授，碩士研究生導(dǎo)師，研究方向?yàn)樯锓肿拥幕瘜W(xué)修飾與功能研究；覃懿，中國(guó)科技開發(fā)院廣西分院工程師，研究方向?yàn)橹扑幑こ萄芯俊?/p>