彭東輝 ，張志宏 ，王洋洋 ，孫延平，曾元寧 ，，王秋紅 ，匡海學(xué)

（1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)/教育部北藥基礎(chǔ)與應(yīng)用研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，黑龍江 哈爾濱 150040；2.廣東藥科大學(xué)中藥學(xué)院，廣東 廣州 510006）

車(chē)前子為車(chē)前科車(chē)前PlantagoasiaticaL.或平車(chē)前PlantagodepressaWilld.的干燥成熟種子[1]，主要含有苯乙醇苷、黃酮、環(huán)烯醚萜和多糖等成分，具有清熱、利尿、通淋、明目的功效[2]。現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)車(chē)前子提取物對(duì)痛風(fēng)有一定的治療效果，能夠顯著降低患者的血尿酸（UA）水平，同時(shí)抑制炎癥因子的分泌[3-5]。車(chē)前子炮制方法歷史悠久，如《幼幼集成》中“青鹽水炒七次”?，F(xiàn)代炮制規(guī)范和藥典中，關(guān)于車(chē)前子炮制方法的一般有3種，即凈制、炒制和鹽炙。車(chē)前子鹽炙后，能引藥下行而入腎經(jīng)，泄熱利尿而不傷陰，增強(qiáng)車(chē)前子的泄熱利尿作用[1，6-7]。

痛風(fēng)性腎病是由于體內(nèi)UA產(chǎn)生過(guò)多或排泄減少，血UA水平長(zhǎng)期處于過(guò)飽和狀態(tài)，尿酸結(jié)晶沉積于腎臟的腎髓質(zhì)、間質(zhì)以及遠(yuǎn)端集合管，最終導(dǎo)致腎實(shí)質(zhì)性病變，臨床主要表現(xiàn)有水腫、尿結(jié)石、多尿、夜尿、血、尿UA升高、高血壓及腎小管的功能性損害等[8]。車(chē)前子多糖具有免疫調(diào)節(jié)功能，抗氧化和降尿酸作用[9-11]，但目前關(guān)于鹽炙車(chē)前子多糖的研究很少。因此，本研究采用水提醇沉法提取鹽炙車(chē)前子多糖，并采用苯酚-硫酸法、硫酸-咔唑法、考馬斯亮藍(lán)法和PMP衍生化法，對(duì)多糖進(jìn)行初步研究；采用腺嘌呤和酵母聯(lián)用的方法制備痛風(fēng)性腎病模型大鼠，來(lái)研究鹽炙車(chē)前子多糖的抗痛風(fēng)性腎病作用，為開(kāi)發(fā)治療痛風(fēng)的新型、有效、低毒藥物提供依據(jù)[12]。

1 材料與儀器

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

5～6周齡SPF級(jí)SD雄性大鼠60只，購(gòu)于廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（粵）2018-0002，體質(zhì)量（200±20）g，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后開(kāi)展實(shí)驗(yàn)。

1.2 藥物與試劑

藥材：車(chē)前子藥材產(chǎn)地江西（批號(hào)YCB0F000 1），經(jīng)中藥學(xué)院李書(shū)淵教授鑒定為車(chē)前科車(chē)前PlantagoasiaticaL.的干燥成熟種子。

試劑：牛血清白蛋白（批號(hào)224V055），北京博奧拓達(dá)科技有限公司；考馬斯亮藍(lán)G-250（批號(hào)626M035），天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所；咔唑（批號(hào)C10196252），美國(guó) Sigma公司；葡萄糖（Glc批號(hào)CHB180929）、巖藻糖（Fuc批號(hào)CHB1800602）、阿拉伯糖（Ara批號(hào) CHB180206）、半乳糖（Gal批號(hào)CHB180227）、鼠李糖（Rha批號(hào)CHB190217）、木糖（Xyl批號(hào)CHB180301）、甘露糖（Man批號(hào)CHB180615）等單糖標(biāo)準(zhǔn)品均購(gòu)自成都克洛瑪生物科技有限公司，純度均不低于98%；1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）（批號(hào)C10661531），上海麥克林生化科技有限公司；三氟乙酸（批號(hào)76-05-1），上海阿拉丁生化科技有限公司；腺嘌呤（批號(hào)A6279），Macklin公司；酵母干粉（批號(hào)050090），廣東環(huán)凱微生物科技有限公司；別嘌醇片（國(guó)藥準(zhǔn)字H34021248），合肥久聯(lián)制藥有限公司；尿蛋白定量試劑盒（批號(hào)C035-2-1）、尿素氮（BUN）測(cè)試盒（批號(hào)C013-2）、UA檢測(cè)試劑盒（批號(hào)C012-2）、肌酐（CRE）測(cè)定試劑盒（批號(hào)C011-2-1），南京建成生物工程研究所；濃硫酸、苯酚、95%乙醇等試劑均為分析純，水為超純水。

1.3 主要儀器

UV-1800紫外可見(jiàn)分光光度儀（日本島津公司）；N1300旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（東京理化株式會(huì)社）；98-1-B調(diào)溫電熱套（天津泰斯特儀器有限公司）；H1750R高速臺(tái)式離心機(jī)（湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開(kāi)發(fā)有限公司）；ME104電子分析天平（梅特勒-托利多國(guó)際貿(mào)易有限公司）；X-15R臺(tái)式離心機(jī)（美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特有限公司）；Epoch-2酶標(biāo)儀（美國(guó)Bio-Rad公司）；ACQUITYArc超高效液相色譜儀、2489 UV紫外檢測(cè)器、SunFire 5 μm 4.6×250 mm C18反向柱（美國(guó)Waters公司）。

2 方法

2.1 鹽炙車(chē)前子多糖的提取

取鹽炙車(chē)前子500 g，先醇提3次，將醇提后的車(chē)前子按照料液比（g∶mL）1∶10，熱水回流提取3次，每次2 h，過(guò)濾，合并提取液，減壓濃縮，4℃條件下醇沉過(guò)夜，連續(xù)醇沉3次，將所得醇沉部分，無(wú)水乙醇和丙酮交替洗3次，低溫烘干，即得鹽炙車(chē)前子多糖。

2.2 鹽炙車(chē)前子多糖總糖、糖醛酸、蛋白含量測(cè)定

采用苯酚-硫酸法[13]、硫酸-咔唑法[14]、考馬斯亮藍(lán)法[15]，測(cè)定車(chē)前子多糖中總糖、糖醛酸、蛋白的含量。

定量稱(chēng)取105℃干燥1 h的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品，配制成質(zhì)量濃度為0.04 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。精密量取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.4，1.6及1.8 mL分別置于10 mL具塞試管中，加雙餾水補(bǔ)充至2.0 mL，再分別加入6%苯酚試劑1.0 mL，濃硫酸5.0 mL，搖勻后常溫放置5 min，水浴加熱15 min，取出，冷卻至室溫（25℃）。另取蒸餾水2.0 mL，作空白對(duì)照，在490 nm處測(cè)定吸光度值（A）。同法操作3次，以Glc含量（μg）為橫坐標(biāo)，以吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。精確定量稱(chēng)取鹽炙車(chē)前子多糖，配制成濃度為0.08 mg/mL的樣品溶液，按上述測(cè)定方法操作，平行測(cè)量3次，通過(guò)回歸方程計(jì)算多糖的葡萄糖含量。

精密定量稱(chēng)取半乳糖醛酸對(duì)照品，配制成質(zhì)量濃度為0.2 mg/mL的半乳糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液。精密吸取半乳糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.15、0.30、0.45、0.60、0.75 mL，置于10 mL具塞刻度試管中，加水至1.00 mL，另取1.00 mL水作為空白對(duì)照，每管中加入濃硫酸5.00 mL，搖勻后，水浴加熱25 min，取出，冷卻到室溫。再加0.1%咔唑乙醇溶液0.20 mL，搖勻，于沸水條件下水浴加熱10 min，取出，冷卻至室溫，加入濃硫酸至10.00 mL，搖勻，在530 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值。同法操作3次，以半乳糖醛酸含量（μg）為橫坐標(biāo)，吸光度（A）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。精確定量稱(chēng)取鹽炙車(chē)前子多糖，配制成2.0 mg/mL的鹽炙車(chē)前子多糖樣品溶液，按上述步驟操作，平行測(cè)量3次，依據(jù)回歸方程計(jì)算多糖的糖醛酸含量。

精密定量稱(chēng)取牛血清白蛋白BSA-Ⅴ，配制成質(zhì)量濃度為0.1 mg/mL的牛血清白蛋白BSA-Ⅴ溶液。精密吸取 BSA-Ⅴ溶液 0.10、0.20、0.30、0.40、0.50、0.60 mL，加入到10 mL具塞刻度試管中，補(bǔ)充水至1.00 mL，另取1.00 mL水作為空白對(duì)照，每管加入5 mL考馬斯亮藍(lán)染液，30℃恒溫條件下水浴5 min，取出冷卻，在595 nm處測(cè)定各管的吸光度。同法操作3次，以牛血清白蛋白BSA-Ⅴ（μg）為橫坐標(biāo)，吸光度（A）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。精確稱(chēng)取鹽炙車(chē)前子多糖，配制成2.0 mg/mL的鹽炙車(chē)前子多糖樣品溶液。按上述步驟操作，平行測(cè)量3次，依據(jù)回歸方程計(jì)算多糖的蛋白含量。

2.3 鹽炙車(chē)前子多糖單糖組成分析

采用PMP柱前衍生超高效液相色譜法對(duì)鹽炙車(chē)前子多糖進(jìn)行單糖組成分析[16]。

2.3.1 多糖水解 取多糖樣品10 mg，置于10 mL具塞試管中，加入2 mol/L三氟乙酸（TFA）溶液2 mL，加蓋密封，于120°C水解160 min，取出放置室溫，減壓蒸餾除去TFA，期間加入甲醇，反復(fù)蒸餾3～4次至無(wú)酸味，加入雙蒸水2.0 mL溶解。

2.3.2 多糖衍生化 取配置好的標(biāo)準(zhǔn)單糖對(duì)照品，混合單糖對(duì)照品1.0 mL，分別置于5.0 mL離心管中，依次加入 500 μL 0.5 mol/L PMP 甲醇溶液和 500 μL 0.3 mol/L NaOH溶液，70°C水浴加熱60 min，室溫放置10 min；再加入500 μL 0.3 mol/L HCl溶液中和，混勻后加入等體積的乙酸異戊酯萃取2次，氯仿萃取1次，取上層（甲醇-水相）過(guò)有機(jī)濾膜，供UPLC進(jìn)樣分析。液相方法：0～10～25～30 min，B相：20%～23%～24%～30%乙腈，D相：0.1%甲酸水，柱溫35℃，檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm。

2.4 痛風(fēng)性腎病大鼠模型的建立、給藥及取材

痛風(fēng)性腎病模型建立[4,12,17]：大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)后，隨機(jī)挑選10只作為空白組，其余大鼠分為模型組、陽(yáng)性藥組、鹽炙車(chē)前子多糖低、中、高劑量組，每組10只，建立痛風(fēng)性腎病大鼠模型，采用酵母和腺嘌呤聯(lián)用的方法，給藥劑量分別為腺嘌呤100 mg/(kg·d)、酵母10 g/(kg·d)，給藥體積為10 mL/kg；連續(xù)造模給藥28 d。

給藥：實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后，除空白組外，各組大鼠上午灌胃給予腺嘌呤和酵母混懸液，下午灌胃給予陽(yáng)性藥（別嘌醇）和鹽炙車(chē)前子多糖，給藥劑量參考2020年版《中國(guó)藥典》，結(jié)合人與大鼠給藥折算比例換算，確定車(chē)前子多糖低、中、高劑量組分別為0.135 g/(kg·d)、0.270 g/(kg·d)、0.540 g/(kg·d)，陽(yáng)性藥組別嘌醇的給藥劑量為50 mg/(kg·d)，其余兩組給予相同體積蒸餾水，連續(xù)給藥28 d。

取材：分別于實(shí)驗(yàn)正式前、實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后的第7天、14天、21天、28天，收集大鼠24 h尿液，4℃，3 000 r/min離心10 min去除沉淀，取上清分裝于ep管中。實(shí)驗(yàn)進(jìn)行28 d后，各組大鼠麻醉后，腹主動(dòng)脈取血，快速取大鼠雙腎拍照并稱(chēng)質(zhì)量。取右腎置于組織固定液中固定。大鼠血液在4℃，3 000 r/min的條件下，離心15 min，取上清液（血清），分裝于不同規(guī)格的ep管中，尿液和血清均置于-80℃冰箱中保存。

2.5 腎表觀特征

28 d后，麻醉取血，快速取大鼠雙腎，觀察表觀特征并取雙腎置于白紙上拍照記錄。稱(chēng)重，計(jì)算腎質(zhì)量指數(shù)。

大鼠的腎質(zhì)量指數(shù)=（雙腎質(zhì)量/大鼠體質(zhì)量）×100%。

2.6 腎組織病理學(xué)

固定液中的腎組織，石蠟包埋并切片，蘇木素-伊紅（HE）染色，光學(xué)顯微鏡（×100）下觀察腎組織病理變化。

2.7 24 h尿蛋白及血生化檢測(cè)

取離心后的各組血清，按照UA、CRE、BUN這3種試劑盒說(shuō)明書(shū)的具體操作步驟，來(lái)檢測(cè)其含量。將各組大鼠的24 h尿液，按尿蛋白定量試劑盒說(shuō)明書(shū)的步驟方法，檢測(cè)各個(gè)時(shí)間段各組大鼠尿液的24 h尿蛋白水平。

2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以xˉ±s表示，采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。組間比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 鹽炙車(chē)前子多糖的提取

按上述方法提取得到鹽炙車(chē)前子多糖，其中多糖得率為10.90%。

3.2 鹽炙車(chē)前子多糖總糖、糖醛酸、蛋白含量測(cè)定結(jié)果

采用苯酚-硫酸法、硫酸-咔唑法、考馬斯亮藍(lán)法，測(cè)定車(chē)前子多糖中總糖、糖醛酸、蛋白的含量，得到葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為Y=0.007 2x+0.030 5（R2=0.999 3）、半乳糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為Y=0.002x+0.032 2（R2=0.999 5）、蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為Y=0.004 7x-0.0075（R2=0.999 7）；經(jīng)過(guò)計(jì)算，鹽炙車(chē)前子多糖中總糖含量為32.27%，糖醛酸含量為30.71%，蛋白質(zhì)的含量為3.46%。

3.3 鹽炙車(chē)前子多糖單糖組成分析結(jié)果

采用PMP柱前衍生化法，測(cè)得7種單糖標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)曲線分別是：Rha：Y=5E+08x+205 889（R2=0.999 5）、Gal：Y=5E+08x+249 206（R2=0.999 8）、Glc：Y=5E+08x+252 490（R2=0.999 8）、Ara：Y=6E+08x-139 516（R2=0.999 9）、Xyl：Y=6E+08x+212 922（R2=0.9997）、Fuc：Y=5E+08x+107768（R2=0.9999）、Man：Y=5E+08x+3E+06（R2=0.999 0）。鹽炙車(chē)前子多糖主要由 Man、Rha、Gal、Glc、Ara、Xyl、Fuc組成，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算可知其摩爾比為Man∶Rha∶Gal∶Glc∶Ara∶Xyl∶Fuc=1.07∶1.49∶5.46∶14.94∶14.34∶42.86∶3.63，由此可知，鹽炙車(chē)前子多糖主要由Glc、Ara和Xyl組成，是阿拉伯木聚糖，與文獻(xiàn)報(bào)道[18-20]一致。

3.4 腎表觀特征

如圖1所示，空白組大鼠雙腎腎臟組織體積正常，表面呈紅褐色，雙腎表皮平滑，未見(jiàn)任何異常（圖1-A）。模型組大鼠腎臟體積顯著增大，表面可見(jiàn)十分密集的小白點(diǎn)，呈石斑樣，伴有充血和水腫（圖1-B）。陽(yáng)性藥組大鼠腎臟體積增大，表面充血，出現(xiàn)水腫，偶見(jiàn)小白點(diǎn)（圖1-C）。多糖低劑量組大鼠腎臟體積增大，表面可見(jiàn)小白點(diǎn)，有水腫和充血（圖1-D）。多糖中劑量組大鼠腎臟體積增大不明顯，表面可見(jiàn)稀疏小白點(diǎn)，有輕微充血（圖1-E）。多糖高劑量組大鼠腎臟體積基本無(wú)增大，表面呈紅褐色，偶爾可見(jiàn)小白點(diǎn)，基本無(wú)水腫和充血（圖1-F）。

圖1 鹽炙車(chē)前子多糖對(duì)痛風(fēng)性腎病大鼠雙腎表觀特征的影響Figure 1 Effect of salt-processed Plantain seeds polysaccharides on the apparent characteristics of both kidneys in gouty nephropathy rats

3.5 腎質(zhì)量指數(shù)

由表1可知，與空白組比較，模型組腎質(zhì)量指數(shù)明顯增大，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與模型組比較，多糖高劑量組腎質(zhì)量指數(shù)降低十分明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），陽(yáng)性藥組和多糖中劑量組腎重指數(shù)降低明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)果提示陽(yáng)性藥別嘌醇、多糖中、高劑量均能降低痛風(fēng)性腎病模型大鼠的腎質(zhì)量指數(shù)。

表1 鹽炙車(chē)前子多糖對(duì)痛風(fēng)性腎病大鼠腎質(zhì)量指數(shù)的影響Table 1 Effect of salt-processed Plantain seeds polysaccharides on renal weight index in rats with gouty nephropathy(±s,n=10)

表1 鹽炙車(chē)前子多糖對(duì)痛風(fēng)性腎病大鼠腎質(zhì)量指數(shù)的影響Table 1 Effect of salt-processed Plantain seeds polysaccharides on renal weight index in rats with gouty nephropathy(±s,n=10)

與空白組比較：**P＜0.01；與模型組比較：#P＜0.05，##P＜0.01。

組別空白組模型組陽(yáng)性藥組多糖低劑量組中劑量組高劑量組劑量/（mg·kg-1）--5 0 135 270 540腎質(zhì)量指數(shù)/%0.70±0.03 1.67±0.20**1.44±0.09#1.54±0.19 1.48±0.07#1.33±0.18##

3.6 腎組織病理學(xué)

如圖2所示，空白組大鼠右腎腎組織結(jié)構(gòu)正常，腎小球形態(tài)正常，腎小管上皮細(xì)胞排列較為整齊，無(wú)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)現(xiàn)象（圖2-A）。模型組大鼠右腎腎組織產(chǎn)生顯著病變，腎小球數(shù)目減少，腎小管上皮細(xì)胞有水腫現(xiàn)象，腎組織中隨處可見(jiàn)大量尿酸鹽結(jié)晶，炎癥細(xì)胞大量浸潤(rùn)，并伴有腎間質(zhì)纖維化（圖2-B）。陽(yáng)性藥別嘌醇給藥組與空白組比較，有較輕程度的腎組織病變，尿酸鹽結(jié)晶減少，有一定程度的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，伴有輕微的腎間質(zhì)纖維化（圖2-C）。多糖低劑量組呈現(xiàn)稍微有點(diǎn)明顯的腎組織病變，有較多尿酸鹽結(jié)晶，有一定程度的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，伴有腎間質(zhì)纖維化（見(jiàn)圖2-D）。多糖中劑量組呈現(xiàn)一定程度的腎組織病變，有一定量的尿酸鹽結(jié)晶，有一定程度的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，伴有一定程度的腎間質(zhì)纖維化（圖2-E）。多糖高劑量組呈現(xiàn)輕微程度的腎組織病變，偶見(jiàn)少量的尿酸鹽結(jié)晶，有輕微的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，基本無(wú)腎間質(zhì)纖維化現(xiàn)象（圖2-F）。

圖2 鹽炙車(chē)前子多糖對(duì)痛風(fēng)性腎病大鼠腎組織病理結(jié)構(gòu)的影響Figure 2 Effect of salt-processed Plantain seeds polysaccharides on renal pathological structure of gouty nephropathy rats

3.7 24 h尿蛋白及血生化檢測(cè)

由表2可知，實(shí)驗(yàn)前，各組大鼠24 h尿蛋白水平差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。造模7 d后，與空白組比較，模型組的尿蛋白水平有一定的升高趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；造模14 d后，模型組的尿蛋白水平顯著升高，與空白組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；造模21 d后，與空白組比較，模型組24 h尿蛋白水平，持續(xù)升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；陽(yáng)性藥組、多糖高劑量組與模型組比較，24 h尿蛋白含量有所降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；造模28 d后，模型組24 h尿蛋白水平與空白對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；陽(yáng)性藥組、多糖中、高劑量組24 h尿蛋白水平顯著降低，與模型組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。見(jiàn)表2。

表2 鹽炙車(chē)前子多糖對(duì)痛風(fēng)性腎病大鼠24 h尿蛋白水平的影響Table 2 Effect of salt-processed Plantain seeds polysaccharides on 24-hour urinary protein level in rats with gouty nephropathy(±s,n=10)

表2 鹽炙車(chē)前子多糖對(duì)痛風(fēng)性腎病大鼠24 h尿蛋白水平的影響Table 2 Effect of salt-processed Plantain seeds polysaccharides on 24-hour urinary protein level in rats with gouty nephropathy(±s,n=10)

與空白組比較：**P＜0.01；與模型組比較：#P＜0.05，##P＜0.01。

組別空白組模型組陽(yáng)性藥組多糖低劑量組中劑量組高劑量組劑量/（mg·kg-1）24 h尿蛋白/（mg·L-1）--5 0 135 270 540 0 d 27.50±6.44 26.13±3.46 26.10±4.09 25.73±6.98 26.46±3.50 24.09±6.17 7 d 24.77±8.59 41.54±11.76 34.68±8.47 39.26±8.89 36.87±7.62 33.25±8.07 14 d 24.97±7.06 63.55±5.88**54.53±6.98 56.53±6.76 54.84±7.49 49.66±11.15 21 d 29.08±4.37 90.34±10.02**74.09±6.09#84.39±11.50 76.25±11.38 72.86±8.97#28 d 27.48±5.65 122.94±14.94**84.47±6.00##102.90±8.68 78.40±10.53##68.60±10.56##

由表3可知，模型組血清中UA、CRE、BUN水平顯著升高，與空白組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；陽(yáng)性藥組、多糖中、高劑量組血清中UA、CRE、BUN水平降低，與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）。見(jiàn)表3。

表3 鹽炙車(chē)前子多糖對(duì)痛風(fēng)性腎病大鼠血清中UA、CRE和BUN水平影響Table 3 Effect of salt-processed Plantain seeds polysaccharides on the levels of UA,CRE and BUN in serum of gouty nephropathy rats(±s,n=10) c/(μmol·L-1)

表3 鹽炙車(chē)前子多糖對(duì)痛風(fēng)性腎病大鼠血清中UA、CRE和BUN水平影響Table 3 Effect of salt-processed Plantain seeds polysaccharides on the levels of UA,CRE and BUN in serum of gouty nephropathy rats(±s,n=10) c/(μmol·L-1)

與空白組比較：**P＜0.01；與模型組比較：#P＜0.05，##P＜0.01。

組別空白組模型組陽(yáng)性藥組多糖低劑量組中劑量組高劑量組劑量--5 0 135 270 540 UA 74.52±11.30 142.42±31.54**93.94±20.58##115.15±24.16 87.88±20.77##82.83±30.70##CRE 56.05±10.58 106.59±26.58**80.82±13.88#85.75±25.43 80.58±6.97#71.58±7.84##BUN 18.27±3.01 47.75±6.44**35.90±4.91##38.98±7.48#33.62±5.61##26.36±7.14##

4 討論

在本研究中，通過(guò)水提醇沉法，提取得到鹽炙車(chē)前子多糖，多糖得率為10.90%。采用苯酚-硫酸法、硫酸-咔唑法、考馬斯亮藍(lán)法，測(cè)得鹽炙車(chē)前子多糖中總糖含量為32.27%、糖醛酸含量為30.71%、蛋白質(zhì)的含量為3.46%。采用PMP衍生化法對(duì)多糖進(jìn)行單糖組成分析，測(cè)得鹽炙車(chē)前子多糖主要由Glc、Ara和Xyl組成，其摩爾比為Man∶Rha∶Gal∶Glc∶Ara∶Xyl∶Fuc=1.07∶1.49∶5.46∶14.94∶14.34∶42.86∶3.63，是一種阿拉伯木聚糖。

痛風(fēng)性腎病是由于嘌呤代謝紊亂，體內(nèi)血UA水平過(guò)高，UA結(jié)晶沉積于腎臟的腎髓質(zhì)、間質(zhì)以及遠(yuǎn)端集合管，引發(fā)腎實(shí)質(zhì)性病變。目前臨床上治療痛風(fēng)性腎病的主要藥物也多為降UA或抑制UA生成的藥物，來(lái)控制血UA的水平，進(jìn)而緩解癥狀[21-23]。本研究結(jié)果顯示，與模型組比較，陽(yáng)性藥組、鹽炙多糖中、高劑量組血UA的水平均顯著降低。

多種腎臟損傷疾病可表現(xiàn)為尿蛋白陽(yáng)性，而尿蛋白本身又能加重腎小球硬化和腎間質(zhì)纖維化的進(jìn)程，進(jìn)一步誘導(dǎo)腎臟損傷。因此常用尿蛋白的水平來(lái)判斷腎臟是否有病變[24]。血清中的BUN和CRE是考察腎功能是否正常的重要指標(biāo)。BUN是人體蛋白代謝的重要產(chǎn)物，腎臟是其主要的排泄器官，當(dāng)腎功能受損時(shí)，BUN的濃度會(huì)升高。CRE是肌肉代謝的最終產(chǎn)物，可通過(guò)腎小球?yàn)V過(guò)排出體外，人體每日體內(nèi)產(chǎn)生的肌酐，一般不受尿量影響可全部隨尿排出。當(dāng)腎功能衰退時(shí)，血清中CRE含量升高。因此，如果BUN和CRE二者同時(shí)升高，說(shuō)明腎臟有嚴(yán)重?fù)p害[25-26]。本研究結(jié)果顯示，模型組大鼠24 h尿蛋白水平，隨造模時(shí)間的延長(zhǎng)不斷升高，血清中BUN和CRE的水平顯著升高，與空白組比較，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與模型組比較，陽(yáng)性藥組、鹽炙車(chē)前子多糖中、高劑量組大鼠24 h尿蛋白水平，血BUN和CRE的水平均有所降低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。綜上所述，結(jié)合腎臟組織表觀特征和腎組織病理變化觀察結(jié)果表明，陽(yáng)性藥別嘌醇、鹽炙車(chē)前子多糖可以改善腎小球?yàn)V過(guò)功能，降低痛風(fēng)性腎病模型大鼠的血UA、BUN和CRE的水平，改善腎功能。提示鹽炙車(chē)前子多糖對(duì)痛風(fēng)性腎病大鼠具有預(yù)防作用，為鹽炙車(chē)前子多糖用于治療痛風(fēng)性腎病奠定了基礎(chǔ)。