李永盛 凌益平 許平翠 祝麗欣 俞忠明#

1 浙江省立同德醫(yī)院 浙江杭州 310012

2 浙江省中醫(yī)藥研究院 浙江杭州 310007

中藥知母為百合科植物知母Anemarrhena asphodeloidesBge.的干燥根莖，具有清熱瀉火，滋陰潤燥的功效[1，2]。知母的藥理活性明確，尤其是知母皂苷元成分，研究表明其具有明顯的抗炎、抗腫瘤、抗衰老、抗阿爾茲海默病等作用。知母皂苷元主要為菝葜皂苷元（SAR），其水溶性小，口服吸收差，生物利用度低[3]。固體分散體載體的性質(zhì)和制備工藝在很大程度上決定了固體分散體的溶出速度和穩(wěn)定性，從而可以增加藥物的溶解度和溶出度，提高生物利用度[4]。本實(shí)驗(yàn)采用不同工藝技術(shù)分別制備了知母皂苷元固體分散體顆粒。結(jié)果表明固體分散體技術(shù)可顯著提高知母皂苷元在水中的溶出度，能一定程度上改善知母皂苷元在水中溶解度差、口服后生物利用度低的問題，可為其相關(guān)制劑的開發(fā)提供思路。

1 儀器與材料

1.1 儀器：Agilent 1100 高效色譜液相（安捷倫）；SEDEX75 型ELSD 檢測器（迪馬公司）；HLSH2-6 型濕法混合制粒機(jī)（北京航空制造工程研究所）；WBF-Ⅱ多功能流化床（重慶英格）；BS224S 電子分析天平（賽多利斯）；RCZ-8M 溶出試驗(yàn)儀/RZQ-8D 取樣收集系統(tǒng)（天大天發(fā)）；HC103型鹵素水分測定儀（METTLER TOLEDO）。

1.2 藥品、試劑與藥材：知母飲片（杭州中藥飲片廠）；PVP-K30（BASF）；菝葜皂苷元對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：110744-200509）；大孔樹脂（D101，天津南開化工廠）；無水乙醇、95%乙醇、HCL、NaOH均為分析純；甲醇為色譜；純水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 知母皂苷元的制備：稱取知母飲片50kg，水提3次，1h/次。第一次加400L水，第二、第三次加水300L。水提液合并，離心，取上清液，上清液上D101 大孔樹脂柱（徑高比1∶10，150L），流速200L/h，依次用水洗450L，0.5%NaOH 洗150L，水洗450L，30%乙醇洗400L，60%乙醇洗400L，95%乙醇洗200L。收集60%乙醇洗脫液，用單效濃縮器濃縮，回收至無醇味，加水定容至25L，加鹽酸2.5L，置壓力反應(yīng)鍋內(nèi)120℃加熱水解2.5h，放冷，濾取水解析出物，用純化水洗滌至pH 呈中性，經(jīng)干燥粉碎后，用3L 無水乙醇于水浴上回流提取2 次，提取液回收無水乙醇，干燥，得知母皂苷元粗品約300g。取知母皂苷元粗品，加8倍量95%乙醇，加熱使其溶解，加入2%活性炭攪拌均勻，趁熱過濾，濾液放冷，即析出白色針狀結(jié)晶，抽濾，并用少量70%乙醇洗滌，干燥。得知母皂苷元精制品約160g，含量＞92%。

2.2 固體分散體顆粒的制備：分述如下。

2.2.1 溶劑法-流化床一步制粒：按藥載比[m（知母皂苷元）∶m（PVP-K30）]為1∶3、1∶6、1∶9分別稱取知母皂苷元10g 和PVP-K30 30、60、90g，分別置于燒杯中，加入200g 無水乙醇，60℃超聲使之完全溶解，放置于磁力攪拌器上，攪拌、保溫備用。使用流化床一步制粒，以500g糊精為底料，設(shè)定流化床進(jìn)風(fēng)溫度60℃，風(fēng)量60m3/h，霧化壓力1.2bar，將上述溶液（磁力攪拌器一直攪拌、保溫）以噴液速度10g/min 噴入流化床后，顆粒繼續(xù)干燥至干燥失重為2%～5%。關(guān)閉加熱，待顆粒物料溫度降至40℃以下，出料。篩取能通過10目篩與不能通過80目篩顆粒，即得流化床一步制粒制備的知母皂苷元固體分散體顆粒（標(biāo)為1號、2號、3號）。

2.2.2 溶劑法-高速攪拌濕法制粒：按藥載比[m（知母皂苷元）∶m（PVP-K30）]為1∶3、1∶6、1∶9分別稱取知母皂苷元10g和PVP-K30 30、60、90g，分別置于燒杯中，加入200g 無水乙醇，60℃超聲使之完全溶解，保溫備用。使用高速濕法制粒機(jī)，以500g糊精為底料，設(shè)置攪拌速度為350r/min，切割速度為700r/min，將上述溶液緩緩加入后，設(shè)置攪拌速度為500r/min，切割速度為1000r/min，繼續(xù)高速制粒60s，出料。濕顆粒置于流化床干燥，設(shè)置流化床進(jìn)風(fēng)溫度60℃，風(fēng)量60m3/h。顆粒干燥至干燥失重為2%～5%。關(guān)閉加熱，待物料溫度降至40℃以下，出料。篩取能通過10 目篩與不能通過80 目篩顆粒，即得高速攪拌濕法制粒制備的知母皂苷元固體分散體顆粒（標(biāo)為4號、5號、6號）。

2.3 機(jī)械混合物的制備：稱取知母皂苷元10g 和PVPK30 60g，將知母皂苷元與PVP-K30 混合研磨，再加入500g糊精，混勻。即得機(jī)械混合物（標(biāo)為7號）。

2.4 固體分散體顆粒的溶出曲線測定：具體如下。

2.4.1 知母皂苷元液相測定方法：色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水（95∶5）為流動相；蒸發(fā)光散射檢測器檢測[5]。①對照品溶液的制備：精密稱取菝葜皂苷元對照品適量，加甲醇制成0.08mg/ml 的溶液即得。②測定法：分別精密吸取對照品溶液5μl、10μl，供試品溶液10μl，注入液相色譜儀，測定，用外標(biāo)兩點(diǎn)法對數(shù)方程計算即得。

2.4.2 知母皂苷元顆粒溶出度測定：按照中國藥典2020 版四部溶出度測定第二法-槳法[6]。溶出介質(zhì)為水600ml，溫度為37±0.5℃，轉(zhuǎn)速75±1r/min。取知母皂苷元顆粒6份（每份含知母皂苷元100mg）分別投放于溶出杯中，于5、10、15、30、45 和60min 時取樣，測定溶出率，并繪制溶出曲線。每次取樣10ml，立即趁熱過濾，取續(xù)濾液5ml，精密加入甲醇5ml，混勻，采用高效液相色譜法測定峰面積，外標(biāo)兩點(diǎn)法對數(shù)方程計算，并換算成累計溶出度。

2.4.3 溶出曲線比較：溶劑法-流化床一步制粒[m（知母皂苷元）：∶m（PVP-K30）=1∶3、1∶6、1∶9]、溶劑法-高速攪拌濕法制粒[m（知母皂苷元）∶m（PVP-K30）=1∶3、1∶6、1∶9]、機(jī)械混合物顆粒[m（知母皂苷元）∶m（PVP-K30）=1∶6] 的體外溶出度情況如圖1 所示：結(jié)果知母皂苷元從固體分散體中的溶出程度明顯隨著載體比例增大而增大，說明PVP-K30 可以增加知母皂苷元的體外溶出，具有增溶作用；知母皂苷元從固體分散體中的溶出速率和程度明顯大于其機(jī)械混合物。綜合結(jié)果可以看出流化床一步制粒的固體分散體的溶出效果較好，高速攪拌濕法制粒的固體分散體次之，機(jī)械混合物的溶出效果最差。當(dāng)[m（知母皂苷元）∶m（PVP-K30）]=1∶9 時，知母皂苷元在介質(zhì)中的最高溶出度達(dá)80%以上，這說明制備的固體分散體起到了提高知母皂苷元體外溶出度的作用。

3 討論

知母皂苷元水溶性差，溶出度不高，采用固體分散體技術(shù)增加其體外溶解度及溶出速度，可以達(dá)到提高知母皂苷元口服生物利用度的目的。本試驗(yàn)將藥物制成固體分散體顆粒，增加了知母皂苷元的體外溶出度。固體分散體顆粒測定體外溶出度時，溶出液處于過飽和狀態(tài)，易析出知母皂苷元，取液濾過后加入適量有機(jī)溶劑使其穩(wěn)定，能有效減少析出，使檢測結(jié)果更準(zhǔn)確。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用固體分散技術(shù)制備知母皂苷元固體分散體顆粒，為改善知母皂苷元在水中溶解度差、生物利用度低的技術(shù)性難題提供了思路，為知母皂苷元相關(guān)制劑的開發(fā)提供了試驗(yàn)依據(jù)，也對今后溶解性差的天然藥物成分開發(fā)成新藥具有一定的理論和實(shí)踐指導(dǎo)意義。