呂敏 劉卓 李德川 鄭林峰 韓哲 朱玉萍

結(jié)直腸癌是臨床上常見惡性腫瘤之一，其中直腸癌發(fā)病率高于結(jié)腸癌，且以中低位直腸癌較為常見[1]。近年來，隨著RNA測(cè)序和生物信息學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，長(zhǎng)鏈非編碼RNA（long non-coding RNA，lncRNA）受到越來越多學(xué)者的關(guān)注。lncRNA是一類長(zhǎng)度＞200 nt的非編碼RNA，參與腫瘤增殖、轉(zhuǎn)移以及化療耐藥等過程，同時(shí)發(fā)揮轉(zhuǎn)錄后調(diào)控和其他表觀遺傳學(xué)的修飾作用[2-3]。lncRNA PANDAR位于6p21.2，前期研究已證實(shí)其能促進(jìn)結(jié)直腸癌增殖和轉(zhuǎn)移[4-5]，但其與直腸癌MRI、組織病理分化及預(yù)后等關(guān)系的研究不多。因此，本研究對(duì)直腸癌患者PANDAR mRNA表達(dá)與臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系作一探討，以期為臨床診治提供參考。

1 對(duì)象和方法

1.1 對(duì)象 選取2015年1月—2016年12月在中國(guó)科學(xué)院大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院接受直腸癌根治術(shù)（包括前切除術(shù)、經(jīng)腹會(huì)陰聯(lián)合切除術(shù)、經(jīng)腹直腸癌切除+近端造口+遠(yuǎn)端閉合術(shù)）的120例患者為研究對(duì)象，收集患者術(shù)中切除的直腸癌組織及癌旁正常組織標(biāo)本。其中男 77例，女43例；年齡30～80（58.03±17.46）歲；腫瘤直徑＜5 cm 74例，≥5 cm 46例；腫瘤組織高分化32例，中分化47例，低分化41例；遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移36例，未轉(zhuǎn)移84例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移63例，未轉(zhuǎn)移57例；腫瘤浸潤(rùn)深度為T1～277例，T3～443例；MRI-T分期：T142例，T239例，T327例，T412例；MRI-N分期：N041例，N164例，N215例；MRI-環(huán)周切緣陽性32例，陰性88例。本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審查通過，所有患者均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 資料收集 收集患者性別、年齡、腫瘤直徑、腫瘤組織分化、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤浸潤(rùn)深度、MRI-T分期、MRI-N分期、MRI-環(huán)周切緣狀態(tài)、4年總體生存率等臨床資料，其中MRI-T分期、MRI-N分期、MRI-環(huán)周切緣狀態(tài)根據(jù)患者M(jìn)RI影像學(xué)資料分析獲得。MRI-T分期標(biāo)準(zhǔn)：無原發(fā)腫瘤為T0；腫瘤侵犯黏膜下層，未侵及肌層為T1；腫瘤侵及肌層，未突破漿膜層為T2；腫瘤突破漿膜層且侵及系膜脂肪為T3；腫瘤侵犯周圍器官為T4。MRI-N分期標(biāo)準(zhǔn)：無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移為N0；1～3個(gè)可疑淋巴結(jié)為N1；≥4個(gè)可疑淋巴結(jié)為N2。MRI-環(huán)周切緣陽性標(biāo)準(zhǔn)：腫瘤浸潤(rùn)最深處與直腸系膜切除邊界間的最短距離＜1 mm。

1.2.2 PANDAR mRNA表達(dá)水平檢測(cè) 采用RT-PCR法。使用液氮碾碎直腸癌組織及癌旁正常組織，采用Trizol法提取RNA；使用RNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA，使用SYBR熒光定量試劑盒在PCR儀器上進(jìn)行定量檢測(cè)。所有引物購(gòu)自杭州維辰生物科技有限公司，PANDAR引物序列：正義5′-CTGTTAAGGTGGTGGCATTG-3′，反義 5′-GGAGGCTCATACTGGCTGAT-3′；GAPDH 引物序列：正義 5′-CGCTCTCTGCTCCTCCTGTTC-3′，反義5′-ATCCGTTGACTCCGACCTTCAC-3′。以甘油醛-3-磷酸脫氫酶為內(nèi)參，采用2-ΔΔCt法計(jì)算PANDAR mRNA表達(dá)水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以表示，組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)。采用ROC曲線分析計(jì)算PANDAR mRNA表達(dá)水平的截?cái)嘀?。繪制Kaplan-Meier生存曲線，采用log-rank法比較直腸癌組織PANDAR mRNA高、低表達(dá)患者4年總體生存率。采用多因素logistic回歸分析直腸癌患者PANDAR mRNA表達(dá)的影響因素。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 直腸癌組織與癌旁正常組織中PANDAR mRNA表達(dá)水平比較 直腸癌組織中PANDAR mRNA表達(dá)水平為9.21±3.03，明顯高于癌旁正常組織的3.17±1.82，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見圖1。

圖1 直腸癌組織與癌旁正常組織中PANDAR mRNA表達(dá)水平比較

2.2 直腸癌組織PANDAR mRNA高、低表達(dá)患者臨床病理特征比較 根據(jù)ROC曲線分析獲得PANDAR mRNA表達(dá)水平的截?cái)嘀禐?.25，本研究以＞5.25為高表達(dá)，有65例；≤5.25為低表達(dá)，有55例。直腸癌組織PANDAR mRNA高、低表達(dá)患者在遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤浸潤(rùn)深度、MRI-T分期、MRI-N分期等方面比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）；在性別、年齡、腫瘤直徑、腫瘤組織分化、MRI-環(huán)周切緣狀態(tài)等方面比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），見表1。

表1 直腸癌組織PANDAR mRNA高、低表達(dá)患者臨床病理特征比較[例（%）]

2.3 直腸癌患者PANDAR mRNA表達(dá)的影響因素分析 以上述P＜0.05的5個(gè)因素（遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤浸潤(rùn)深度、MRI-T分期、MRI-N分期）為自變量，PANDAR mRNA高、低表達(dá)為因變量進(jìn)行多因素logistic回歸分析，結(jié)果顯示MRI-T分期、MRI-N分期是直腸癌患者PANDAR mRNA表達(dá)的獨(dú)立影響因素（均P＜0.05），見表2。

表2 直腸癌患者PANDAR mRNA表達(dá)的影響因素分析

2.4 直腸癌組織PANDAR mRNA高、低表達(dá)患者預(yù)后比較 術(shù)后隨訪48個(gè)月，PANDAR mRNA高、低表達(dá)患者的中位生存期分別為31、38個(gè)月；PANDAR mRNA低表達(dá)患者4年總體生存率為39.2%，明顯高于PANDAR mRNA高表達(dá)者的19.8%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見圖2。

圖2 直腸癌組織PANDAR mRNA高、低表達(dá)患者的Kaplan-Meier生存曲線

3 討論

從調(diào)控腫瘤增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移以及化療耐藥等方面入手，目前臨床上已證實(shí)許多LncRNA具有促癌作用[6-7]，LncRNA PANDAR就是其中之一。研究表明，PANDAR在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)明顯高于癌旁正常組織，且高表達(dá)患者的預(yù)后較差[5]。另有研究表明，PANDAR在肝癌及胃癌組織中呈高表達(dá)，且與患者不良預(yù)后密切相關(guān)[8-9]。此外，PANDAR又能通過抑制p16（INK4A）來調(diào)控乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)周期，進(jìn)而促進(jìn)分化[10]。然而，目前關(guān)于PANDAR與直腸癌MRI、組織病理分化及預(yù)后等關(guān)系仍處于探索階段。因此，本研究對(duì)直腸癌患者PANDAR mRNA表達(dá)與臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系作一探討。

本研究首先證實(shí)PANDAR在直腸癌組織中呈高表達(dá)，然后以120例患者直腸癌組織中PANDAR表達(dá)水平的截?cái)嘀禐榻缰祫澐諴ANDAR高、低表達(dá)組，進(jìn)而比較直腸癌組織PANDAR mRNA高、低表達(dá)患者臨床病理特征及預(yù)后。本研究結(jié)果顯示，直腸癌組織PANDAR mRNA高、低表達(dá)患者在遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤浸潤(rùn)深度、MRI-T分期、MRI-N分期等方面比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；在性別、年齡、腫瘤直徑、腫瘤組織分化、MRI-環(huán)周切緣狀態(tài)等方面比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。前期已有不少研究從臨床差異表達(dá)入手來探索PANDAR的促癌功能[11-12]，與本研究結(jié)果一致。值得一提的是，本研究探索了PANDAR mRNA表達(dá)水平與影像組學(xué)的關(guān)系，進(jìn)一步對(duì)直腸癌患者PANDAR mRNA表達(dá)的影響因素進(jìn)行分析，結(jié)果顯示MRI-T分期、MRI-N分期是直腸癌患者PANDAR mRNA表達(dá)的獨(dú)立影響因素。目前尚無相關(guān)研究報(bào)道，這為今后深入研究LncRNA PANDAR與影像組學(xué)的相關(guān)性提供了參考。所有患者術(shù)后隨訪48個(gè)月，筆者發(fā)現(xiàn)PANDAR mRNA低表達(dá)患者4年總體生存率明顯高于PANDAR mRNA高表達(dá)者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

綜上所述，PANDAR在直腸癌組織中呈高表達(dá)，與MRI-T分期、MRI-N分期等臨床病理特征及預(yù)后相關(guān)。