武 麗 ,賀琪楠 ,劉思彤 ,洪汝丹 ,李 瑞 ,張 垚 ,羅云燕,黎文鴻,劉正祥,尹家祥

鼠疫是由鼠疫耶爾森氏菌(Yersiniapestis)所引起一種自然疫源性疾病,主要通過媒介蚤在嚙齒動(dòng)物間傳播,在一定條件下通過媒介蚤叮咬或者剝食患病動(dòng)物感染人類,造成人間鼠疫的流行。除嚙齒動(dòng)物外,犬、貓、豬、羊等動(dòng)物對(duì)鼠疫耶爾森氏菌具有低敏感高抗性,染疫后大多能自然痊愈并在體內(nèi)長時(shí)間保留鼠疫菌特異性抗體,常被視為鼠疫指示動(dòng)物,在我國指示動(dòng)物血清學(xué)調(diào)查已作為一種有效手段被納入鼠疫監(jiān)測(cè)工作中[1-2]。該研究選擇在云南省家鼠鼠疫流行曾經(jīng)較為嚴(yán)重的彌勒市、芒市、梁河縣3個(gè)地區(qū)采集人血清和指示動(dòng)物血清,檢測(cè)血清中鼠疫F1抗體,旨在了解云南省家鼠鼠疫疫源地靜息期人群和指示動(dòng)物中鼠疫F1抗體情況,分析鼠疫發(fā)生和流行的風(fēng)險(xiǎn)。

1 材料與方法

1.1 樣本來源 2019年7－8月,在云南省家鼠鼠疫疫源地選擇曾經(jīng)發(fā)生鼠疫疫情比較嚴(yán)重的彌勒市、芒市、梁河縣3個(gè)縣(市)作為研究區(qū)域,選擇8個(gè)發(fā)生過2次及以上鼠疫疫情的自然村為研究對(duì)象(疫村),同時(shí)在5～10 km 范圍選擇與發(fā)生過鼠疫的自然村具有相似特征(如戶數(shù)、民族等),但從未報(bào)告過鼠疫的8個(gè)自然村作為研究對(duì)照(對(duì)照村),共16個(gè)自然村。每個(gè)村采集人血清不低于20份,采集指示動(dòng)物血清不低于10份。人采集肘部靜脈血,動(dòng)物采集股動(dòng)脈血,采血量約5 m L,血液自然沉降后分離血清。采血過程和分離血清嚴(yán)格保持無菌操作,采血前均獲得了被采血者和動(dòng)物主人的同意。

1.2 檢測(cè)方法 采用間接血凝法(Indirect Heamagglutination Assay,IHA)對(duì)采集到的血清進(jìn)行鼠疫F1抗體檢測(cè),對(duì)IHA 判定的陽性樣本采用上轉(zhuǎn)發(fā)光法再次進(jìn)行檢測(cè)確認(rèn)。

1.3 檢測(cè)試劑 IHA 檢測(cè)試劑盒試劑批號(hào)20200201(蘭州生物制品研究所有限責(zé)任公司),上轉(zhuǎn)發(fā)光法檢測(cè)鼠疫F1 抗體試劑盒試劑批號(hào)20200701(北京熱景生物技術(shù)股份有限公司)。

1.4 判讀標(biāo)準(zhǔn)

1.4.1 IHA 法 空白對(duì)照、陰性對(duì)照孔不出現(xiàn)凝集現(xiàn)象,陽性對(duì)照成立。當(dāng)抑制列呈“＋＋”凝集的孔比試驗(yàn)列少2孔以上,判定為特異性凝集。陽性最終效價(jià)為凝集排呈現(xiàn)“＋＋”的最高稀釋度。

1.4.2 上轉(zhuǎn)發(fā)光法 MiniUPT 上轉(zhuǎn)發(fā)光微生物檢測(cè)儀與上轉(zhuǎn)發(fā)光法鼠疫F1抗體試劑盒配套使用,檢測(cè)完成后讀取MiniUPT 上轉(zhuǎn)發(fā)光微生物檢測(cè)儀上的數(shù)值,顯示大于0.00的數(shù)值即為陽性。

2 結(jié)果

2.1 人群血清和動(dòng)物血清樣本采樣分布情況 本次調(diào)查共采集人血清368份、指示動(dòng)物血清319份(犬血清307份和貓血清12份)。每個(gè)自然村所采集的血清樣本數(shù)和地區(qū)分布情況見表1。

表1 云南省3個(gè)縣(市)16個(gè)自然村血清樣本采樣分布情況Tab.1 Sampling distribution of serum samples in 16 natural villages of 3 counties(cities)in Yunnan Province

人血清中男性181人,女性187人;平均年齡為44.9歲,最小10歲,最大77歲;傣族185 人,漢族118人,其他少數(shù)民族65人(景頗族31人,苗族19人,僳僳族9人,彝族6人)。指示動(dòng)物中雄性197只,雌性122 只;馴養(yǎng)方式以拴養(yǎng)為主,占69.3%(221/319),散養(yǎng)(12只貓均為散養(yǎng))占30.7%(98/319)。

2.2 鼠疫F1抗體檢測(cè)結(jié)果 本次研究采用IHA對(duì)368份人血清進(jìn)行鼠疫F1抗體檢測(cè),在梁河縣對(duì)照組芒蒙村檢出1份鼠疫F1抗體陽性,滴度為1∶80。該份陽性樣本采用上轉(zhuǎn)發(fā)光法再次進(jìn)行檢測(cè)結(jié)果為261.788,確認(rèn)為陽性。2021年10月再次對(duì)該陽性者抽血檢測(cè)鼠疫F1抗體仍為陽性。對(duì)319份指示動(dòng)物血清進(jìn)行鼠疫F1抗體檢測(cè),檢測(cè)結(jié)果均為陰性。

3 討論

人群對(duì)鼠疫普遍易感,在感染鼠疫得到有效治療后,患者體內(nèi)可產(chǎn)生抗體,從被檢者體內(nèi)檢出鼠疫F1抗體說明被檢者曾被鼠疫菌感染,或者是鼠疫高危地區(qū)居民曾注射鼠疫疫苗,也有研究發(fā)現(xiàn)在鼠疫疫區(qū)未接種疫苗的人中檢出鼠疫F1抗體,被認(rèn)為是隱性感染[3]。指示動(dòng)物犬和貓捕食小型嚙齒動(dòng)物,感染鼠疫風(fēng)險(xiǎn)較高,與人類接觸密切,也增加了人感染鼠疫的風(fēng)險(xiǎn)[4]。若未曾有人間或動(dòng)物鼠疫報(bào)道的地區(qū)血清中檢測(cè)出鼠疫F1抗體,可能是病例并未出現(xiàn)明顯的癥狀而被忽略或者是該地區(qū)可能出現(xiàn)小范圍的鼠疫流行但未被監(jiān)測(cè)到。此次調(diào)查的人群和動(dòng)物來自于彌勒市,芒市和梁河縣。彌勒市在1999—2005年共發(fā)生鼠疫疫點(diǎn)96 個(gè),其中人間鼠疫疫點(diǎn)36 個(gè),發(fā)現(xiàn)鼠疫患者60 例,動(dòng)物鼠疫疫點(diǎn)60個(gè),從2006年至今鼠疫進(jìn)入靜息期[5]。1989年芒市就檢測(cè)出動(dòng)物鼠疫,2001—2002年在患者和貓血清中各檢出鼠疫F1抗體1份,并從芒海鎮(zhèn)確診腺鼠疫病人1例,檢測(cè)自斃鼠71只,檢出鼠疫菌8株,2003 年后鼠疫得到控制[6-7]。梁河縣1990—2007年鼠疫流行異?；钴S,2001年確診腺鼠疫病人1例,2003年發(fā)現(xiàn)7例腺鼠疫病人,2008年以后疫情得到了有效控制,鼠疫流行進(jìn)入靜息期[8]。本次調(diào)查獲得的319份指示動(dòng)物血清樣本均未檢測(cè)出鼠疫F1抗體,說明被調(diào)查的三縣(市)仍處于鼠疫靜息期,當(dāng)?shù)匕l(fā)生動(dòng)物鼠疫的風(fēng)險(xiǎn)不高。

本次研究采集的368份人血清里,僅在梁河縣芒蒙村1 份人血清樣本中檢測(cè)出鼠疫F1 抗體陽性,但該自然村從未報(bào)道過鼠疫病例。為了查找可能的原因,研究團(tuán)隊(duì)于2021年10月對(duì)該鼠疫F1抗體陽性者再次抽血檢測(cè)核實(shí)并做了深入的調(diào)查,發(fā)現(xiàn)其血清鼠疫F1抗體仍為陽性。流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示,該血清陽性者為梁河縣芒東鎮(zhèn)芒蒙村人,女,1961年出生,傣族,從小居住在該自然村(1984年嫁到本村),主要從事農(nóng)牧業(yè),周圍農(nóng)作物主要為水稻,家中未飼養(yǎng)犬和貓,未接種過鼠疫疫苗,也未出現(xiàn)過感染鼠疫的癥狀。在該自然村采集到的20份犬血清和1 份貓血清鼠疫F1 抗體檢測(cè)均為陰性。團(tuán)隊(duì)同時(shí)對(duì)在該村周圍捕獲的36只嚙齒動(dòng)物進(jìn)行反向間接血凝實(shí)驗(yàn)檢測(cè)鼠疫F1抗原,結(jié)果均為陰性(結(jié)果部分未展示該結(jié)果)。但調(diào)查發(fā)現(xiàn)與該自然村相鄰的新寨和金勐自然村曾經(jīng)發(fā)生過鼠疫流行,該血清鼠疫F1抗體陽性者可能的原因是在勞作過程中或走親戚時(shí)被跳蚤叮咬而感染鼠疫菌,因?yàn)榧沂笫笠咭咴吹厥笠呔甓玖^弱,感染后臨床癥狀不明顯未引起重視或者自行服藥后癥狀消失。目前,該村村民出現(xiàn)鼠疫F1抗體陽性的情況,尚不能確定確切的原因,但應(yīng)加強(qiáng)關(guān)注,一方面需要加強(qiáng)鼠疫監(jiān)測(cè),掌握鼠疫發(fā)生動(dòng)態(tài),另一方面可以擴(kuò)大范圍對(duì)人群、宿主動(dòng)物、指示動(dòng)物、媒介、周圍環(huán)境等進(jìn)行鼠疫相關(guān)的調(diào)查和研究。

(感謝彌勒市CDC、芒市CDC、梁河縣CDC 等單位的現(xiàn)場(chǎng)協(xié)助,感謝云南省地方病防治所洪梅老師和鐘佑宏老師在實(shí)驗(yàn)方面的指導(dǎo))

利益沖突:無

引用本文格式:武麗,賀琪楠,劉思彤,等.云南家鼠鼠疫疫源地人群和指示動(dòng)物血清鼠疫F1抗體調(diào)查[J].中國人獸共患病學(xué)報(bào),2022,38(6):553-555.DOI:10.3969/j.issn.1002－2694.2022.00.071