吳濤宇 ,逄博 ,馮海燕 ,王顯軍, ,李 浩 ,陳守義 ,張齊光,丁淑軍,馬 偉,楊麗萍

鼠形動(dòng)物是重要的醫(yī)學(xué)研究對(duì)象,主要包括嚙齒目和食蟲目動(dòng)物。目前我國已知的鼠形動(dòng)物有200多種[1],鼠形動(dòng)物可攜帶并傳播伯氏疏螺旋體、恙蟲病東方體、鉤端螺旋體、漢坦病毒、新型布尼亞病毒和埃立克體等多種自然疫源性疾病的病原體,對(duì)人類健康造成一定威脅。為了解廣州增江沿岸地區(qū)鼠形動(dòng)物種屬及病原體攜帶情況,我們于2020年11月在當(dāng)?shù)亻_展了鼠形動(dòng)物現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本采集 2020年11月在廣州市增城區(qū)(水東村、霞余村、黃草潭村、蕉石嶺森林公園、江坳村)采用籠夜法捕獲鼠形動(dòng)物,以烤鴨碎肉為誘餌,傍晚時(shí)布置鼠籠,次日清晨回收。鑒定種屬,無菌解剖,取心、肝、脾、肺、腎等臟器,－80 ℃保存。

1.2 臟器研磨及核酸提取 在生物安全柜中操作,取適量臟器組織于研磨管中,加入1 mL PBS緩沖液(索萊寶P1020)及1顆5 mm 研磨鋼珠。將研磨管置于研磨儀(Micro SashTMMS-100,Active DNATM)中,設(shè)置轉(zhuǎn)速為4 000 r/min,研磨60 s。使用碩世核酸快速提取試劑盒(磁珠法)和全自動(dòng)核酸提取儀提取包括DNA 和RNA 的總核酸,轉(zhuǎn)移至1.5 mL EP管中,40 ℃保存。

1.3 病原體檢測(cè) 采用熒光定量PCR 法分別從腎臟中檢測(cè)鉤端螺旋體,肺臟中檢測(cè)漢坦病毒,脾臟中檢測(cè)恙蟲病東方體、埃立克體和新型布尼亞病毒,心、肝、脾、肺、腎等臟器中檢測(cè)伯氏疏螺旋體。按試劑盒說明書配置反應(yīng)體系,同時(shí)設(shè)置陰性、陽性對(duì)照,根據(jù)曲線是否呈S型及CT 值大小,判定陰、陽性。試劑盒購于江蘇碩世生物科技股份有限公司和深圳生科原生物有限公司。

1.4 數(shù)據(jù)分析 使用Excel 2016整理數(shù)據(jù),R 軟件4.0.3版本進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)數(shù)資料使用χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法進(jìn)行比較,檢驗(yàn)水準(zhǔn)α＝0.05。

2 結(jié)果

2.1 鼠形動(dòng)物捕獲情況 本調(diào)查共布放鼠籠519個(gè),捕獲嚙齒目和食蟲目動(dòng)物2科2屬2種,共69只,鼠形動(dòng)物密度為13.29%。臭鼩鼱、褐家鼠分別占72.46%、27.54%;雌、雄分別占66.67%、33.33%。鼠形動(dòng)物在水東村、黃草潭村、霞余村、蕉石嶺森林公園的密度分別是24.84%、21.05%、13.01%和0.79%,江坳村未捕獲到。

2.2 鼠形動(dòng)物感染病原體情況 共計(jì)16只鼠形動(dòng)物檢出病原體的感染,總感染率為23.19%。各病原體在鼠形動(dòng)物中的感染率存在差異(χ2＝8.490,P＜0.05)。新型布尼亞病毒和埃立克體均未檢出。鼠形動(dòng)物不同種屬、雌雄及調(diào)查地點(diǎn)病原體感染情況見表1。

表1 鼠形動(dòng)物不同種屬、雌雄及調(diào)查點(diǎn)的病原體感染情況Tab.1 Infection of mouse-like animals of different species,sex and surveillance points

從鼠形動(dòng)物種屬上看,褐家鼠中檢出鉤端螺旋體、恙蟲病東方體、漢坦病毒和伯氏疏螺旋體的感染,而臭鼩鼱中僅檢出伯氏疏螺旋體,褐家鼠總感染率(78.95%)高于臭鼩鼱(2.00%)(Fisher確切概率法,P＜0.001)。雄性鼠形動(dòng)物病原體總感染率(43.48%)高于雌性(13.04%)(χ2＝6.357,P＜0.05)。霞余村鼠形動(dòng)物總感染率(50.00%)高于水東村(20.00%)(Fisher確切概率法,P＜0.05),其余調(diào)查點(diǎn)均未檢出。

伯氏疏螺旋體在水東村捕獲的雌性褐家鼠心、肝及臭鼩鼱的脾中有檢出,但在腎、肺中未檢出。鉤端螺旋體在水東村和霞余村捕獲的褐家鼠中均有檢出。恙蟲病東方體在水東村和霞余村捕獲的褐家鼠中有檢出且雄性感染率高于雌性(Fisher確切概率法,P＜0.05)。此外,霞余村褐家鼠中恙蟲病東方體感染率高于水東村(Fisher 確切概率法,P＜0.05),qPCR 檢測(cè)結(jié)果見圖1。漢坦病毒在水東村和霞余村捕獲的褐家鼠中有檢出,雌雄和調(diào)查點(diǎn)間感染率差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Fisher確切概率法,P＞0.05),漢坦病毒qPCR 檢測(cè)結(jié)果見圖2。

圖1 qPCR 檢測(cè)褐家鼠的恙蟲病東方體感染情況Fig.1 The qPCR results of Orientia tsutsugamushi in Rattus norvegicus

圖2 qPCR 檢測(cè)褐家鼠的漢坦病毒感染情況Fig.2 The qPCR results of hantavirus in Rattus norvegicus

2.3 鼠形動(dòng)物復(fù)合感染病原體情況 7只褐家鼠中檢出2種病原體復(fù)合感染的情況,褐家鼠雙重感染率為36.84%;未檢測(cè)出3種或3種以上病原體的復(fù)合感染。雙重感染情況有:鉤端螺旋體＋伯氏疏螺旋體、鉤端螺旋體＋漢坦病毒、鉤端螺旋體＋恙蟲病東方體、漢坦病毒＋恙蟲病東方體。臭鼩鼱中未檢出病原體的復(fù)合感染。褐家鼠體內(nèi)病原體的復(fù)合感染情況見表2。

表2 褐家鼠體內(nèi)病原體的復(fù)合感染情況Tab.2 Coinfection in Rattus norvegicus

3 討論

本調(diào)查顯示廣州增江沿岸地區(qū)鼠形動(dòng)物密度是13.29%,高于全國平均水平0.78%[2],可見該地鼠形動(dòng)物密度較高。qPCR 檢測(cè)發(fā)現(xiàn)當(dāng)?shù)厥笮蝿?dòng)物尤其是褐家鼠體內(nèi)可攜帶伯氏疏螺旋體、鉤端螺旋體、恙蟲病東方體、漢坦病毒等多種自然疫源性疾病的病原體,對(duì)當(dāng)?shù)厝巳航】禈?gòu)成潛在威脅。

自1996年陳戊申等[3]在廣東省河源市連平縣發(fā)現(xiàn)伯氏疏螺旋體疫源地以來,2009年謝霖崇等[4]在廣東省梅州市鼠形動(dòng)物中分離得到了伯氏疏螺旋體,但在增江沿岸地區(qū)未有伯氏疏螺旋體的報(bào)道。本調(diào)查發(fā)現(xiàn)鼠形動(dòng)物中伯氏疏螺旋體總感染率為2.90%,與梅州地區(qū)鼠形動(dòng)物感染率3.00%[4]相近,推測(cè)增江沿岸地區(qū)可能是伯氏疏螺旋體的自然疫源地。本調(diào)查發(fā)現(xiàn)褐家鼠中鉤端螺旋體感染率為57.89%,高于中山地區(qū)黃胸鼠(4.35%)[5]和福州地區(qū)褐家鼠(6.00%)[6],提示褐家鼠可作為該地區(qū)鉤端螺旋體的儲(chǔ)存宿主及鉤體病的傳染源,當(dāng)?shù)赜秀^體病流行風(fēng)險(xiǎn),要加強(qiáng)人間病例監(jiān)測(cè)。褐家鼠中恙蟲病東方體感染率為31.58%,高于江西地區(qū)黑線姬鼠(0.64%)[7]和山東省泰安地區(qū)褐家鼠(2.60%)[8]。馬蒙蒙等[9]的研究發(fā)現(xiàn)廣州市恙蟲病年均發(fā)病率為5.58/10 萬,且增城區(qū)是主要聚集區(qū)之一。本次調(diào)查點(diǎn)均位于增城區(qū)內(nèi)且褐家鼠感染率也較高,提示當(dāng)?shù)貞?yīng)加強(qiáng)恙蟲病相關(guān)的防控工作。褐家鼠中漢坦病毒感染率為21.05%,高于廣東各口岸褐家鼠(3.94%)[10]。胡文穗等[11]研究顯示2010—2019年來廣州市腎綜合征出血熱疫情比較穩(wěn)定,年均發(fā)病率為0.99/10 萬,且存在季節(jié)性,春季(2—4 月)最高、其次是冬季(11月至次年1月)。調(diào)查期間正值該地發(fā)病高峰月份,反映了此時(shí)宿主動(dòng)物中漢坦病毒的感染情況,在一定程度上豐富了該地腎綜合征出血熱的研究。

本研究發(fā)現(xiàn)褐家鼠中存在4種病原體的雙重感染,雙重感染率為36.84%,高于云南西部地區(qū)褐家鼠中鼠疫、巴爾通體、伯氏疏螺旋體、巴貝西原蟲、人粒細(xì)胞無形體、埃立克體、漢坦病毒的復(fù)合感染率(0.25%)[12],也高于內(nèi)蒙古西部地區(qū)子午沙鼠中伯氏疏螺旋體、斑點(diǎn)熱群立克次體、巴爾通體和無形體的復(fù)合感染率(6.18%)[13]。從調(diào)查地點(diǎn)看,水東村不僅鼠形動(dòng)物密度最高(24.84%),而且褐家鼠雙重感染率也最高(50.00%)?？梢?該村出現(xiàn)多種自然疫源性疾病暴發(fā)的可能性較高。此外,因當(dāng)?shù)厥笮蝿?dòng)物中存在多種病原體的雙重感染,人群間也可能出現(xiàn)病原體的雙重或多重感染問題,可能會(huì)給疾病的早期發(fā)現(xiàn)、正確診斷及臨床治療等帶來一系列困難。1988 年廣州曾暴發(fā)犬埃立克體感染,PAN等[14]也于2003年在廣州部分地區(qū)的鼠形動(dòng)物中檢測(cè)到埃立克體。新型布尼亞病毒是布尼亞病毒科白蛉病毒屬的負(fù)鏈RNA 病毒,感染人體后能引起發(fā)熱伴血小板減少綜合征。2013年王慶奎等[15]證明鼠形動(dòng)物可以作為新型布尼亞病毒的宿主動(dòng)物,但本次調(diào)查未在鼠形動(dòng)物中檢測(cè)到埃立克體及新型布尼亞病毒,推測(cè)增江沿岸地區(qū)可能不是這2種病原體的自然疫源地。

綜上,廣州增江沿岸地區(qū)鼠形動(dòng)物主要是臭鼩鼱和褐家鼠且密度較高;褐家鼠中病原體感染率高于臭鼩鼱且存在多種病原體的復(fù)合感染。當(dāng)?shù)貞?yīng)繼續(xù)加強(qiáng)對(duì)鼠形動(dòng)物尤其是褐家鼠的監(jiān)測(cè)和控制,降低鼠密度,有針對(duì)性地開展相關(guān)宣教工作,減少人-鼠接觸機(jī)會(huì)。

利益沖突:無

引用本文格式:吳濤宇,逄博,馮海燕,等.廣州增江沿岸地區(qū)鼠形動(dòng)物及攜帶病原體調(diào)查[J].中國人獸共患病學(xué)報(bào),2022,38(6):486-489,495.DOI:10.3969/j.issn.1002－2694.2022.00.064