蔡振輝

(寧德市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗檢測中心，福建 寧德 352100)

有機磷農(nóng)藥具有高效、廣譜、降解快、價格低等特點，被廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)[1]，但其殘留問題也日益凸顯，嚴重影響生態(tài)環(huán)境，甚至危害人體健康。目前，世界各國通過制定農(nóng)產(chǎn)品中有機磷農(nóng)藥的最大殘留限量加以監(jiān)督，我國頒布的《食品安全國家標準食品中農(nóng)藥最大殘留限量：GB 2763—2021》[2]也規(guī)定了農(nóng)產(chǎn)品中有機磷農(nóng)藥的最大殘留限量。當前，對有機磷農(nóng)藥殘留的檢測主要有氣相色譜法[3]、氣相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法(gas chromatography-tandem mass spectrometry, GC-MS/MS)[4]和液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法[5]等。其中，GC-MS/MS相比氣相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用法(GC-MS)優(yōu)勢明顯，可通過監(jiān)測多個離子，有效排除假陽性干擾，提高分析的選擇性和靈敏度[6-7]。

基質(zhì)效應(yīng)指樣品中其他成分對待測物測定造成干擾，導致測定時無法對目標組分進行準確定量[8]?；|(zhì)匹配校準法是目前農(nóng)藥殘留檢測領(lǐng)域降低基質(zhì)效應(yīng)的常用方法，但現(xiàn)實中待測樣品種類繁多，難以對不同樣品一一配制基質(zhì)標準曲線[9]。因此，尋找代表性的樣品基質(zhì)并配制標準曲線進行定量分析，成為提高檢測效率及準確性的有效手段[10-12]。QuEChERS法是一種方便快捷、經(jīng)濟實用、安全可靠的樣品前處理技術(shù)，常用于農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥的檢測[13]。目前，有關(guān)食用菌中有機磷農(nóng)藥的基質(zhì)效應(yīng)報道不多，且涉及的食用菌種類較少[14-16]。因此，本研究采用QuEChERS結(jié)合GC-MS/MS法探討20種有機磷農(nóng)藥在10種常見食用菌中的基質(zhì)效應(yīng)，以期為食用菌中有機磷農(nóng)藥的檢測提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 材料 試材分別為香菇(Lentinulaedodes)、秀珍菇(Pleurotusgeesteranus)、蟹味菇(Hypsizygusmarmoreus)、杏鮑菇(Pleurotuseryngii)、鹿茸菇(Lyophyllumdecastes)、金針菇(Flammulinavelutipes)、平菇(Pleurotusostreatus)、雙孢菇(Agaricusbisporus)、黑木耳(Auriculariaheimuer)和銀耳(Tremellafuciformis)等10種常見食用菌，均為市售。試驗前對所有試材進行檢測，均未發(fā)現(xiàn)待測農(nóng)藥。

1.1.2 試劑 20種有機磷農(nóng)藥標準樣品由農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護科研監(jiān)測所提供，質(zhì)量濃度均為100 μg·mL-1。丙酮、乙腈、正己烷均為色譜純，上海安譜公司；5982-5056分散固相萃取試劑盒，美國Agilent公司。

1.2 儀器與設(shè)備

GCMS-TQ8040三重四極桿氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀，日本島津制作所；3-18KS高速冷凍離心機，德國Sigma公司；EVAP-111氮吹儀，美國Organomation公司；FP3010料理機，德國Braun公司；移液槍(10～100 0 μL)，德國VITILAB公司；PL602E電子天平，METTLER TOLEDO科技有限公司。

1.3 試驗方法

1.3.1 樣品前處理 參照文獻[17]中有關(guān)農(nóng)藥殘留檢測的方法進行樣品前處理。分別將10種食用菌樣品充分攪碎、混勻，準確稱取10.0 g樣品于50 mL離心管，加入20.0 mL乙腈、5.0 g NaCl，充分震蕩混勻后超聲提取15 min，5 000 r·min-1離心3 min。吸取8.0 mL上清液置于分散固相萃取凈化管，振蕩1 min后5 000 r·min-1離心3 min，吸取1.0 mL上清液于10.0 mL試管，40 ℃氮吹至近干，加入1.0 mL丙酮與正己烷混合液復溶，收集凈化后的空白基質(zhì)液備用。

1.3.2 GC-MS/MS條件 (1)色譜條件。色譜柱：Aglient DB-5 MS (30 m×0.25 mm，0.25 μm)；梯度升溫設(shè)置：起始溫度50 ℃，保持1 min，以25 ℃·min-1升溫至125 ℃，再以10 ℃·min-1升溫至290 ℃。(2)質(zhì)譜條件。EI離子源溫度：200 ℃，接口溫度：250 ℃，溶劑延遲時間：3.0 min；多反應(yīng)監(jiān)測(multiple reaction monitoring, MRM)檢測。

1.3.3 標準曲線的繪制 分別使用10種食用菌基質(zhì)液和丙酮正己烷(體積比為1∶1)將標準物質(zhì)稀釋為25、50、100、200、300、400 μg·L-1的標準曲線工作液，上機進樣，以外標法繪制基質(zhì)標準曲線和溶劑標準曲線。

2 結(jié)果與分析

2.1 GC-MS/MS質(zhì)譜條件的優(yōu)化

通過GC-MS/MS對20種農(nóng)藥的混合標準溶液(1 μg·mL-1)進行全掃描，掃描范圍設(shè)置為50～500 amu。依據(jù)相對豐度、質(zhì)荷比等因素確定1～3個離子，并將其作為母離子進行產(chǎn)物離子掃描，獲得最佳子離子和優(yōu)化電壓，確定最優(yōu)MRM掃描質(zhì)譜條件。經(jīng)過質(zhì)譜優(yōu)化后獲得20種農(nóng)藥組分的母離子、子離子和碰撞能量(表1)。

2.2 線性關(guān)系與線性范圍

分別將25、50、100、200、300、400 μg·L-1供試農(nóng)藥的標準溶液進行GC-MS/MS檢測，可獲得各標準溶液在設(shè)定條件下的總離子流圖(total ion chromatogram, TIC)(圖1)。對分離的色譜峰進行積分，并以質(zhì)量濃度為橫坐標、定量離子對的峰面積為縱坐標，通過外標法繪制標準曲線。結(jié)果顯示，20種農(nóng)藥在25～400 μg·L-1范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)(R2)范圍為0.998～0.999。

A.辛硫磷；B.敵敵畏；C.滅線磷；D.甲拌磷；E.特丁硫磷；F.二嗪磷；G.氯唑磷；H.甲基對硫磷；I.殺螟硫磷；J.馬拉硫磷；K.毒死蜱；L.甲拌磷砜；M.甲拌磷亞砜；N.對硫磷；O.水胺硫磷；P.甲基異柳磷；Q.丙溴磷；R.三唑磷；S.亞胺硫磷；T.伏殺硫磷。

2.3 有機磷農(nóng)藥在不同食用菌中的基質(zhì)效應(yīng)比較

20種農(nóng)藥在10種食用菌中的基質(zhì)效應(yīng)見表2。由表2可知，供試農(nóng)藥總體上表現(xiàn)為基質(zhì)增強效應(yīng)，僅特丁硫磷、氯唑磷、甲拌磷亞砜、甲拌磷砜、甲基異柳磷在個別食用菌中表現(xiàn)為基質(zhì)抑制效應(yīng)。其中，甲基對硫磷在杏鮑菇、銀耳、平菇中表現(xiàn)出強基質(zhì)效應(yīng)，基質(zhì)效應(yīng)范圍在51.54%～62.39%之間；殺螟硫磷在杏鮑菇、銀耳中表現(xiàn)強基質(zhì)效應(yīng)，分別為55.64%、50.81%；伏殺硫磷在鹿茸菇中表現(xiàn)為強基質(zhì)效應(yīng)(50.92%)；亞胺硫磷在10種食用菌中均表現(xiàn)出強基質(zhì)效應(yīng)，范圍在78.20%～209.12%之間。除亞胺硫磷外，其他農(nóng)藥對10種食用菌基質(zhì)效應(yīng)的相對標準偏差(relative standard deviation， RSD)均<10%，表明不同食用菌對供試有機磷農(nóng)藥具有相似的基質(zhì)效應(yīng)。

表2 20種有機磷農(nóng)藥在不同食用菌中的基質(zhì)效應(yīng)Table 2 Matrix effects of 20 types of organophosphorus pesticides in different edible fungi

由表2還可知，除亞胺硫磷、甲基對硫磷外其他農(nóng)藥的基質(zhì)效應(yīng)RSD均<8%。通過考察多種食用菌中亞胺硫磷的基質(zhì)效應(yīng)均值與單種食用菌基質(zhì)效應(yīng)的關(guān)系，同時以RSD值較大的甲基對硫磷為參考篩選代表基質(zhì)。亞胺硫磷、甲基對硫磷在10種食用菌基質(zhì)中的平均基質(zhì)效應(yīng)值分別為143.16%、43.91%，比對表2中各種食用菌的基質(zhì)效應(yīng)，選擇雙孢菇作為代表基質(zhì)。

2.4 以雙孢菇為代表基質(zhì)時有機磷農(nóng)藥的基質(zhì)效應(yīng)比較

如表3所示，以雙孢菇作為代表基質(zhì)配制標準曲線，有效校正辛硫磷、對硫磷、甲基對硫磷、殺螟硫磷、三唑磷、亞胺硫磷、伏殺硫磷等農(nóng)藥的強基質(zhì)效應(yīng)，除甲基對硫磷、亞胺硫磷在個別食用菌中表現(xiàn)為中等基質(zhì)效應(yīng)外，其他農(nóng)藥均表現(xiàn)為弱基質(zhì)效應(yīng)。以溶劑和雙孢菇為參比，比較其他供試基質(zhì)的強、中、弱基質(zhì)效應(yīng)所占比例(圖2)。其中，強基質(zhì)效應(yīng)由8.0%下降為0，中等基質(zhì)效應(yīng)由36.5%降低為2.0%，弱基質(zhì)效應(yīng)由55.5%提升為98.0%。由此可知，利用GC-MS/MS檢測食用菌中有機磷農(nóng)藥時，將雙孢菇作為代表基質(zhì)配置標準曲線能夠有效提高定量分析的準確性。

表3 以雙孢菇為代表基質(zhì)時有機磷農(nóng)藥在不同食用菌中的基質(zhì)效應(yīng)Table 3 Matrix effects of organophosphorus pesticides in different edible fungi with Agaricus bisporus being typical matrix solution

A.以溶劑為參比；B.以雙孢菇為參比。

3 小結(jié)

基質(zhì)效應(yīng)是農(nóng)藥定量檢測中常見的問題，受多種因素影響。有機磷農(nóng)藥具有P=O或P=S等極性基團，這些基團極易被進樣口活性位點吸附，從而加強基質(zhì)效應(yīng)[18]。此外，農(nóng)藥化合物的空間結(jié)構(gòu)以及基質(zhì)中糖類、油脂、蛋白質(zhì)等含量的不同也會影響基質(zhì)效應(yīng)[15]。本研究采用QuEChERS結(jié)合GC-MS/MS法探討20種有機磷農(nóng)藥在10種常見食用菌中的基質(zhì)效應(yīng)，結(jié)果顯示，不同食用菌基質(zhì)對有機磷農(nóng)藥的基質(zhì)效應(yīng)相似，且使用雙孢菇作為代表基質(zhì)配制標準曲線進行定量分析，既保證準確率又可提高效率。