王 凡，馬雪連，孫亞偉，陳 卓，吾買爾江·牙合甫，陳玉珠，馮夢(mèng)迪，吳 靜，易鵬飛，楊朝輝，夏利寧，鐘 旗，姚 剛

（1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，新疆烏魯木齊 830052；2.新疆畜牧科學(xué)院畜牧研究所，新疆烏魯木齊 830000）

畜禽養(yǎng)殖場(chǎng)生物安全是指為防止引起疾病的物質(zhì)進(jìn)入畜群或限制疾病在牧場(chǎng)傳播而采取的一系列措施，包括保障外部生物安全（防止病原體進(jìn)入）和內(nèi)部生物安全（在畜禽群體內(nèi)部傳播）的所有措施[1-3]。業(yè)已證明，畜禽養(yǎng)殖場(chǎng)生物安全計(jì)劃的制定與各項(xiàng)措施的貫徹實(shí)施是保障動(dòng)物健康與福利，提高生產(chǎn)率，減少治療藥物使用，控制疫病發(fā)生與傳播的最重要系統(tǒng)工程[4-7]。然而，受環(huán)境、養(yǎng)殖技術(shù)水平等客觀因素影響，預(yù)期所需的勞動(dòng)力、時(shí)間和經(jīng)費(fèi)投入較高；受主客觀因素影響，采取的生物安全措施在不同畜群養(yǎng)殖場(chǎng)的實(shí)施水平與效果也大不相同[8]。因此，不同類型和不同功能的畜禽養(yǎng)殖場(chǎng)，基于較常流行或影響較大的疾病，制定針對(duì)性的，符合基本情況的生物安全計(jì)劃，可最大程度地防止疾病發(fā)生，降低疾病危害，顯著提高養(yǎng)殖效益，保障養(yǎng)殖健康和可持續(xù)發(fā)展[9-12]。近幾年新疆南疆地區(qū)安格斯肉牛養(yǎng)殖發(fā)展迅速，已成為當(dāng)?shù)剞r(nóng)牧民脫貧致富、鄉(xiāng)村振興的重要產(chǎn)業(yè)之一。但由于養(yǎng)殖歷史較短，安格斯肉牛養(yǎng)殖技術(shù)水平有限，動(dòng)物疾病問題日益凸顯，嚴(yán)重制約了安格斯肉牛養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。因此，本研究針對(duì)新疆南疆地區(qū)部分集約化安格斯肉牛繁育場(chǎng)常見疾病發(fā)生現(xiàn)狀和主要生物安全問題開展調(diào)查，以期為該地區(qū)集約化肉牛養(yǎng)殖場(chǎng)制定科學(xué)合理的生物安全防控措施提供依據(jù)，從而保障養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展。

1 調(diào)查時(shí)間、地點(diǎn)及對(duì)象

2021 年對(duì)新疆南疆喀什地區(qū)4 個(gè)集約化安格斯肉牛繁育場(chǎng)開展調(diào)查。

2 調(diào)查方法及內(nèi)容

2.1 調(diào)查

采用現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查、問卷調(diào)查和牧場(chǎng)疾病診療記錄查閱相結(jié)合的方法，對(duì)牧場(chǎng)肉牛主要疾病臨床癥狀、防疫軟硬件建設(shè)、人流物流管控、獸醫(yī)技術(shù)力量，以及牧工家庭養(yǎng)殖背景、飼養(yǎng)管理、鼠害蠅害防控、無(wú)害化處理等進(jìn)行調(diào)查。

2.2 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

2.2.1 樣品采集 分別于2021 年1、5、7 月，采集4 個(gè)牛場(chǎng)1 月齡患病犢牛肛拭子和鼻拭子，參考動(dòng)物流行病學(xué)調(diào)查相關(guān)規(guī)程和方法[13-14]，按每場(chǎng)出現(xiàn)臨床癥狀犢牛5%以上的比例采樣進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷。

2.2.2 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè) 采用PCR 方法，對(duì)采集的296 份肛拭子樣品，檢測(cè)4 種腹瀉相關(guān)病毒——牛諾如病毒（bovine norovirus，BNoV）、牛病毒性腹瀉病毒（bovine viral diarrhea virus，BVDV）、牛冠狀病毒（bovine coronavirus，BCV）和牛輪狀病毒（bovine rotavirus，BRV）；對(duì)采集的170 份鼻拭子樣品，檢測(cè)4 種肺炎相關(guān)病毒——牛傳染性鼻氣管炎病毒（infectious bovine rhinotracheitis，IBRV）、牛病毒性腹瀉病毒（bovine viral diarrhea virus，BVDV）、牛腺病毒3 型（bovine adenovirus 3，BAV-3）和牛副流感病毒3 型（bovine parainfluenza virus type 3，BPIV-3）。病毒基因組DNA 快速提取試劑盒，購(gòu)自O(shè)mega Bio-Tek 公司；DL 2000 DNA Marker、2×TaqPCR Master Mix 瓊脂糖，均購(gòu)自天根生物有限公司；反轉(zhuǎn)錄試劑盒（prime script RT reagent kit），購(gòu)自大連寶生物工程有限公司；Trizol，購(gòu) 自Invitrogen；Hifair?III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（gDNA digester plus），購(gòu)自翌圣生物科技（上海）有限公司。

2.3 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)

運(yùn)用Excel 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，對(duì)主要疾病臨床癥狀、病原檢測(cè)以及牧工家庭養(yǎng)殖背景調(diào)查結(jié)果進(jìn)行定量（百分比）統(tǒng)計(jì)分析，對(duì)其他調(diào)查結(jié)果進(jìn)行定性描述。

3 調(diào)查結(jié)果

3.1 主要疾病臨床癥狀

從4 個(gè)牧場(chǎng)的疾病記錄來(lái)看，各場(chǎng)的總患病頭數(shù)分別為1 533、1 667、1 647 和970 頭，平均患病率分別為66.36%、74.39%、81.69%和30.68%；出現(xiàn)的癥狀主要有腹瀉、肺炎、眼疾、弱犢、營(yíng)養(yǎng)不良、腹痛，其中前5 種癥狀占總臨床癥狀的95%以上（表1）。在有疾病臨床癥狀的犢牛群中，腹瀉癥狀在各繁育場(chǎng)占比均較高，其次是肺炎，其他癥狀占比均較低。

3.2 主要病原檢測(cè)

檢測(cè)結(jié)果（表2）顯示，BCV、BNoV、BVDV 和BRV 的陽(yáng)性檢出率分別為19.93%、15.20%、0.03% 和0.01%，IBRV、BAV-3、BVDV和BPIV-3 的陽(yáng)性檢出率分別為28.24%、14.12%、7.06%和5.88%。結(jié)果表明，BCV 和BNoV 是引起犢牛腹瀉的主要病原，IBRV 和BAV-3 是引起犢牛肺炎的主要病原。

3.3 生物安全調(diào)查

3.3.1 消毒防疫硬件建設(shè) 在消毒防疫硬件建設(shè)方面，各牧場(chǎng)均存在基礎(chǔ)設(shè)施設(shè)備不齊全，未嚴(yán)格區(qū)分凈道和污道，獸醫(yī)診療室配置不完整等問題。其中：4 個(gè)牧場(chǎng)的正門均缺少車輛消毒池和高壓水槍，車輛進(jìn)出時(shí)只能進(jìn)行噴霧消毒；部分場(chǎng)區(qū)缺乏消毒間及紫外線更衣室，人員消毒通道深度過淺，長(zhǎng)度較短；消毒通道內(nèi)噴霧裝置運(yùn)行不暢，冬季寒冷時(shí)易結(jié)冰；各牧場(chǎng)均未嚴(yán)格設(shè)定凈道和污道。各牧場(chǎng)消毒設(shè)施設(shè)備配備情況見表3。各牧場(chǎng)獸醫(yī)診療室基礎(chǔ)配置不完整，基本的疾病診療、消毒防疫設(shè)施設(shè)備匱乏，無(wú)法開展免疫效果檢測(cè)、藥物敏感性試驗(yàn)等。缺乏高壓滅菌設(shè)備，無(wú)法對(duì)有害物、手術(shù)器械等實(shí)施高壓滅菌處理。圖1 為部分缺乏的設(shè)施設(shè)備。

表3 各牧場(chǎng)消毒設(shè)施設(shè)備配備情況

3.3.2 人流、物流消毒情況 牧場(chǎng)環(huán)境及圈舍的消毒程序不規(guī)范，缺乏相應(yīng)的檢查制度，存在消毒隨意性大、消毒藥物單一和消毒前圈舍清潔不徹底等問題。生產(chǎn)區(qū)內(nèi)有飼養(yǎng)人員串圈舍行為，且進(jìn)出圈舍未經(jīng)嚴(yán)格消毒。另外，門衛(wèi)的消毒程序流于形式，外來(lái)人員和返場(chǎng)牧工以及外來(lái)車輛進(jìn)入場(chǎng)區(qū)時(shí)，未嚴(yán)格消毒，甚至未消毒就進(jìn)入場(chǎng)區(qū)。

3.3.3 牧工家庭畜禽養(yǎng)殖背景 對(duì)牧場(chǎng)169 名牧工的家庭畜禽養(yǎng)殖背景以問卷形式進(jìn)行調(diào)查。結(jié)果（表4）顯示：接近半數(shù)的牧工家庭中飼養(yǎng)畜禽，其中飼養(yǎng)牛、羊的接近90%，62.67%牧工對(duì)存在的動(dòng)物疫病不了解，54.67%的牧工回家后直接接觸畜禽，還有部分牧工回家和返場(chǎng)后不嚴(yán)格消毒，不洗澡更換衣物。

表4 牧工家庭畜禽養(yǎng)殖背景調(diào)查結(jié)果

3.3.4 獸醫(yī)技術(shù)人員 牧場(chǎng)獸醫(yī)技術(shù)人員數(shù)量不足，各獸醫(yī)人員對(duì)應(yīng)預(yù)防和治療的牛只數(shù)量較多，人均超過600 頭，且技術(shù)人員的獸醫(yī)專業(yè)知識(shí)水平參差不齊。各牧場(chǎng)獸醫(yī)人員配備情況見表5。

表5 各牧場(chǎng)獸醫(yī)技術(shù)人員配備情況

3.3.5 牧工生物安全意識(shí) 牧場(chǎng)牧工大多數(shù)為當(dāng)?shù)剞r(nóng)民，文化程度較低，專業(yè)知識(shí)匱乏，對(duì)規(guī)模化養(yǎng)殖場(chǎng)的操作規(guī)范熟練程度較低，消毒防疫意識(shí)淡薄，很多牧工家中飼養(yǎng)畜禽或有飼養(yǎng)畜禽的經(jīng)歷，習(xí)慣于自家散養(yǎng)方式，主動(dòng)嚴(yán)格執(zhí)行消毒程序的意識(shí)不高。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，大多數(shù)牧工對(duì)消毒不重視，消毒程序不規(guī)范。場(chǎng)區(qū)工作人員進(jìn)出生產(chǎn)區(qū)時(shí)，不執(zhí)行嚴(yán)格消毒程序，有些為了方便甚至繞過消毒通道直接進(jìn)入生產(chǎn)區(qū)，部分牧工從生產(chǎn)區(qū)返回到生活區(qū)時(shí)不更換衣服、鞋帽。

3.3.6 飼養(yǎng)與管理情況 （1）規(guī)章制度建設(shè)。牧場(chǎng)的人員管理、車輛管理、消毒管理、飼養(yǎng)管理、防鼠防蟲管理、用藥管理、檔案管理等各項(xiàng)管理制度普遍不健全，并且存在制度措施落實(shí)不到位問題。（2）飼料及衛(wèi)生清理。部分青貯窖頂層存在約15 cm 厚的青貯飼料霉變現(xiàn)象（圖2-A），飼喂時(shí)不清理干凈，就與正常青貯飼料混合飼喂；圈舍清理不及時(shí)、不徹底，可見死亡、流產(chǎn)胎兒，胎衣隨意丟棄（圖2-B），圈舍水槽沒有定期清洗、換水。（3）犢牛初乳管理。對(duì)安格斯初產(chǎn)母牛初乳產(chǎn)量進(jìn)行抽樣測(cè)定評(píng)估（n=20）發(fā)現(xiàn)，初產(chǎn)母牛初乳平均產(chǎn)量為731 mL，但個(gè)體差異變化范圍較大，為160～4 050 mL（圖3），提示部分安格斯母牛初乳產(chǎn)量不高，導(dǎo)致新生犢牛初乳攝入不足，而牧場(chǎng)又缺乏相應(yīng)的犢牛初乳補(bǔ)飼管理技術(shù)措施。

3.3.7 鼠害蠅害情況 調(diào)查發(fā)現(xiàn)，牧場(chǎng)存在老鼠、蚊蠅以及鳥類等有害生物入侵現(xiàn)象。在生活區(qū)、精料庫(kù)和圈舍內(nèi)均有老鼠出沒的蹤跡，精料庫(kù)內(nèi)可見部分精料袋被老鼠咬破（圖4-A）。夏、秋季節(jié)，在生活區(qū)、圈舍、獸醫(yī)室等場(chǎng)所蚊蠅較多（圖4-B）。牧場(chǎng)缺少防鳥設(shè)施設(shè)備，鳥類可自由出入牧場(chǎng)，在生活區(qū)、生產(chǎn)區(qū)和牛舍運(yùn)動(dòng)區(qū)自由飛行。

3.3.8 糞污清理及無(wú)害化處理情況 調(diào)查發(fā)現(xiàn)，場(chǎng)內(nèi)工作人員忽視對(duì)養(yǎng)殖環(huán)境衛(wèi)生的控制和改善，對(duì)圈舍及運(yùn)動(dòng)場(chǎng)清理不充分，對(duì)糞尿混合物清理不及時(shí)，導(dǎo)致圈舍、活動(dòng)場(chǎng)內(nèi)的糞便堆積嚴(yán)重，衛(wèi)生環(huán)境較差，存在疫病傳播風(fēng)險(xiǎn)。各牧場(chǎng)的無(wú)害化處理方式均為直接深埋，處理方式單一；牧場(chǎng)對(duì)病死牛尸體處理不規(guī)范，病死牛隨意放置（圖5）；掩埋點(diǎn)距離場(chǎng)區(qū)較近且處理區(qū)域無(wú)標(biāo)識(shí)；病死牛無(wú)害化處理過程中，操作人員未做好防護(hù)措施。

4 討論

4.1 引發(fā)腹瀉、肺炎的主要病毒流行情況

BCV、BNoV、BVDV 等是導(dǎo)致犢牛腹瀉的主要病毒，感染程度因國(guó)家、區(qū)域、牛種類（奶?；蛉馀＃┮约霸\斷技術(shù)不同而異。Lorenzetti 等[15]調(diào)查發(fā)現(xiàn)，巴西肉牛BCV 牛群感染率達(dá)61.5%；劉蓉菁等[16]研究發(fā)現(xiàn)，我國(guó)新疆、青海、西藏等地區(qū)牛群BCV 感染率普遍較高，平均血清抗體陽(yáng)性率達(dá)80%以上。2003 年以來(lái)，相繼被證實(shí)BNoV是美洲、非洲和亞洲地區(qū)導(dǎo)致犢牛腹瀉的重要病毒[17]。Guo 等[18]2018 年首次報(bào)道在我國(guó)牛群中檢測(cè)出BNoV。BVDV 在世界范圍內(nèi)均有分布，牛群感染風(fēng)險(xiǎn)較高，自20 世紀(jì)90 年代以來(lái)，歐洲許多國(guó)家的BVDV 陽(yáng)性率平均在50%以上[19]。王新平等[20]對(duì)國(guó)內(nèi)不同地區(qū)的牛群糞樣進(jìn)行BVDV 檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)感染率為16.5%～89.0%，表明我國(guó)某些地區(qū)BVDV 感染率較高。BVDV 不僅引起犢牛腹瀉，還與牛呼吸道和生殖疾病相關(guān)[21]。引發(fā)牛呼吸道疾病綜合癥（bovine respiratory disease complex，BRDC）的病毒性病原包括IBRV、BAV-3 和BPIV-3 等[22-23]。BRDC 常導(dǎo)致奶牛產(chǎn)奶量降低，肉牛胴體品質(zhì)下降，犢牛肺炎發(fā)病率和死亡率上升，治療成本增加，給全球養(yǎng)牛業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失[24]。本研究所調(diào)查的喀什地區(qū)4 個(gè)牧場(chǎng)為2018年新建的安格斯肉牛繁育場(chǎng)，當(dāng)年開始從澳大利亞引進(jìn)安格斯牛，所有引進(jìn)的肉牛均經(jīng)過嚴(yán)格的海關(guān)檢疫和隔離檢疫，為無(wú)疫牛群。而本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)，牧場(chǎng)均有腹瀉、肺炎等臨床癥狀的犢牛出現(xiàn)，且引起腹瀉的病毒以BCV 和BNoV 為主，引起肺炎的以IBRV 和BAV-3 為主。無(wú)疫牛群引入國(guó)內(nèi)后發(fā)生腹瀉和肺炎疾病，可能與國(guó)內(nèi)相關(guān)病原流行率較高，牧場(chǎng)基礎(chǔ)設(shè)施不完善，消毒防疫不到位，人員、物流管控不嚴(yán)等相關(guān)。

4.2 防控建議

4.2.1 完善牧場(chǎng)基礎(chǔ)設(shè)施 調(diào)查發(fā)現(xiàn)，部分牧場(chǎng)缺少消毒池，消毒設(shè)備不完善，消毒更衣室配置不完整，缺少捕鼠、防鳥裝置等。由于當(dāng)?shù)貤l件所限，牧場(chǎng)在建設(shè)時(shí)許多基礎(chǔ)設(shè)施尚未完善，這可能是導(dǎo)致牧場(chǎng)出現(xiàn)各種疾病的重要因素。建議牧場(chǎng)根據(jù)自身基礎(chǔ)設(shè)施建設(shè)情況，完善基礎(chǔ)設(shè)施配置。

4.2.2 加強(qiáng)管理和人員培訓(xùn)，提高生物安全意識(shí)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，牧場(chǎng)的牧工多為當(dāng)?shù)剞r(nóng)民，文化程度和專業(yè)知識(shí)水平較低，主動(dòng)消毒防疫意識(shí)不高，同時(shí)牧場(chǎng)管理制度不健全，對(duì)牧工缺少培訓(xùn)。牧工家庭畜禽養(yǎng)殖背景調(diào)查發(fā)現(xiàn)，近一半牧工家庭飼養(yǎng)牛、羊等家畜，其中一半以上牧工對(duì)自家飼養(yǎng)畜禽的健康狀況不了解，且在歸家后直接接觸畜禽，而且還存在部分牧工歸家返場(chǎng)不消毒、不更換衣物等行為。這些行為都可能是牧場(chǎng)疾病引入的原因。建議各牧場(chǎng)加強(qiáng)管理制度建設(shè)，定期進(jìn)行人員培訓(xùn)，嚴(yán)格落實(shí)安全防護(hù)措施，定期抽檢各牧場(chǎng)生物安全措施關(guān)鍵點(diǎn)的落實(shí)情況，查漏補(bǔ)缺，保護(hù)動(dòng)物、環(huán)境和牧工自身的安全。

4.2.3 加強(qiáng)人流、物流管控與消毒 調(diào)查發(fā)現(xiàn)，牧場(chǎng)均存在人員、車輛、投入品進(jìn)出消毒隱患。牧場(chǎng)正門的消毒流于形式，來(lái)訪人員及外來(lái)車輛未經(jīng)消毒即可出入牧場(chǎng)，牧工進(jìn)出生產(chǎn)區(qū)不消毒或消毒不嚴(yán)格，在生產(chǎn)區(qū)內(nèi)頻繁串圈。這些行為都可能造成病原在牧場(chǎng)內(nèi)傳播。建議牧場(chǎng)加強(qiáng)牧工及外來(lái)人員管控，對(duì)人員、進(jìn)出場(chǎng)車輛及投入品嚴(yán)格執(zhí)行消毒程序。

4.2.4 規(guī)范消毒和無(wú)害化處理程序 調(diào)查發(fā)現(xiàn)，各牧場(chǎng)均缺乏規(guī)范的消毒程序，人員及車輛物流的消毒存在較大漏洞，這會(huì)對(duì)病原的引入或病原在牧場(chǎng)間的傳播帶來(lái)風(fēng)險(xiǎn)，也是導(dǎo)致犢牛腹瀉和肺炎等的重要因素。建議各牧場(chǎng)根據(jù)自身情況，制定適合本牧場(chǎng)的消毒程序和管理制度，確保牧場(chǎng)工作人員認(rèn)真遵守并執(zhí)行到位。另外，各牧場(chǎng)存在處理方式單一、掩埋點(diǎn)距離場(chǎng)區(qū)較近、處理區(qū)域無(wú)標(biāo)識(shí)等諸多無(wú)害化處理不規(guī)范問題，導(dǎo)致病原傳入風(fēng)險(xiǎn)較高。建議各牧場(chǎng)嚴(yán)格按照相關(guān)規(guī)程進(jìn)行無(wú)害化處理。

4.2.5 建立合理的免疫方案 牧場(chǎng)在引入安格斯肉牛時(shí)，雖然進(jìn)行了IBRV 免疫，但本次調(diào)查對(duì)有肺炎癥狀的犢牛進(jìn)行病原檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，IBRV 感染率較高，其他病原如BNoV、BCV、BAV-3 也存在較高的感染率。牧場(chǎng)未建立合理的免疫方案，可能是導(dǎo)致疫病發(fā)生的潛在原因。因此，各牧場(chǎng)應(yīng)建立合理規(guī)范的免疫程序，加強(qiáng)疫病防控，降低疫病發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。

4.3 局限性

生物安全風(fēng)險(xiǎn)因子與動(dòng)物患病或檢測(cè)結(jié)果之間存在一定關(guān)聯(lián)，但本研究未進(jìn)行此方面的定量統(tǒng)計(jì)分析。下一步，需要對(duì)每個(gè)場(chǎng)的患病與健康動(dòng)物群體進(jìn)行單因素或多因素風(fēng)險(xiǎn)分析，找出生物安全的高風(fēng)險(xiǎn)環(huán)節(jié)和因素，“一場(chǎng)一策”制定對(duì)應(yīng)的生物安全控制措施。同時(shí)，結(jié)合病原檢測(cè)結(jié)果，開展科學(xué)防治。

5 結(jié)論

新疆南疆地區(qū)安格斯肉牛繁育場(chǎng)的腹瀉和肺炎發(fā)病率較高，主要由BNoV、BCV、IBRV、BAV-3 等病原引發(fā)，其原因是牧場(chǎng)在防疫設(shè)施設(shè)備建設(shè)、消毒制度落實(shí)、人流物流管控、規(guī)章制度建設(shè)以及飼養(yǎng)管理、鼠害蠅害防控、無(wú)害化處理等生物安全控制方面存在隱患。因此，各牧場(chǎng)應(yīng)針對(duì)病原流行情況和存在的生物安全問題，制定并實(shí)施合理的控制方案和確實(shí)可行的生物安全措施，控制腹瀉、肺炎等疾病的發(fā)生和流行，提高經(jīng)濟(jì)效益。