郭大偉，侯思魯，池宇佳，于非可，尉嘯涵，鄧 倩，肖傳明，劉曉曄*，董 虹*

(1. 北京農(nóng)學(xué)院 獸醫(yī)學(xué)(中醫(yī)藥)北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京102206； 2. 北京農(nóng)學(xué)院 北京市中獸藥工程技術(shù)研究中心，北京 102206；3. 北京康華遠(yuǎn)景股份有限公司，北京 101509)

母豬繁殖性能以及斷奶仔豬的生長性能與養(yǎng)殖效益密切相關(guān)，因此培育優(yōu)良的后備母豬以及預(yù)防斷奶仔豬腹瀉是提高養(yǎng)豬業(yè)利潤的重要策略。由于母豬產(chǎn)仔數(shù)量增多，導(dǎo)致產(chǎn)程和產(chǎn)后仔豬的死亡率增加。目前，我國集約化養(yǎng)殖母豬平均每只每胎產(chǎn)仔后存活數(shù)量在8～12頭，丹麥集約化養(yǎng)殖場母豬的產(chǎn)仔存活數(shù)能達(dá)到15頭以上，我國母豬健康水平未能達(dá)到高水平階段。斷奶仔豬通過母乳中免疫球蛋白獲得免疫力，并隨著時(shí)間呈下降趨勢，免疫球蛋白在仔豬出生后1周達(dá)到峰值，第3周降到最低值，而仔豬免疫系統(tǒng)發(fā)揮作用為出生后第4周。通常來說，仔豬哺乳期一般為3～5周，應(yīng)該控制在35 d，由于仔豬早期斷奶縮短母豬哺乳期一定程度提高母豬生產(chǎn)力，采取21～25 d斷奶，甚至在18～20 d斷奶手段，可能會(huì)引起仔豬腹瀉，嚴(yán)重造成仔豬死亡。

母豬繁殖性能低下以及斷奶仔豬腹瀉嚴(yán)重影響?zhàn)B豬業(yè)的發(fā)展。引起母豬產(chǎn)死胎的原因有多種，如繁殖障礙性疾病、氧化應(yīng)激狀況、母豬的年齡因素、營養(yǎng)狀況、新生仔豬體重、出生狀況以及飼喂管理以及環(huán)境因素等。母豬哺乳期結(jié)束后，對新生仔豬進(jìn)行斷奶，由于仔豬腸道等消化系統(tǒng)發(fā)育還不夠健全，加上仔豬斷奶為了適應(yīng)環(huán)境會(huì)出現(xiàn)氧化應(yīng)激造成腸道結(jié)構(gòu)功能以及腸道菌群改變等，表現(xiàn)為食欲降低、生長遲緩、抵抗免疫力下降、腹瀉以及水腫等癥狀，嚴(yán)重會(huì)導(dǎo)致仔豬死亡。由于抗生素的藥物殘留，目前，非特異性免疫刺激劑、天然植物以及植物提取物被作為飼料添加劑添加到基礎(chǔ)日糧中提高母豬繁殖性能以及斷奶仔豬生長性能。集約化養(yǎng)殖生產(chǎn)中，添加飼料添加劑后導(dǎo)致養(yǎng)殖成本升高，而中藥資源廣泛、價(jià)格低廉，并且根據(jù)中獸醫(yī)理論臨床辯證添加到基礎(chǔ)日糧當(dāng)中能夠極大降低飼喂成本，因此可以通過生產(chǎn)植物提取物飼料添加劑以減少病原微生物的侵入以及增強(qiáng)機(jī)體免疫，已然成為動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)研究的熱點(diǎn)。

芪英湯和子甘湯為中藥復(fù)方，因此本研究以芪英湯、子甘湯作為飼料添加劑探究對母豬生產(chǎn)性能的影響，為中草藥飼料添加劑的開發(fā)提供參考。

1 材料與方法

1.1 試劑

芪英湯中藥復(fù)方提取物粉劑(黃芪、蒲公英、金銀花、白術(shù)、知母、女貞子、甘草中藥提取物，北京康華遠(yuǎn)景科技股份有限公司)，子甘湯中藥復(fù)方提取物粉劑(苦木、訶子、甘草中藥提取物，北京康華遠(yuǎn)景科技股份有限公司)；基礎(chǔ)日糧購自北京正大飼料有限公司(表1、2)；豬IgA(貨號：MM-0905O1)IgM (MM-0402O1)、IgG (貨號：MM-0403O1)、IL-6(貨號：MM-0418O1)、IL-1β(貨號:MM-0422O1)、TNF-α(貨號：MM-0383O1) ELISA 試劑盒購自上海酶聯(lián)生物科技有限公司；豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體ELISA檢測試劑盒(生產(chǎn)批號：PRRSV20201021E)、豬圓環(huán)病毒Ⅱ型抗體酶免檢測試劑盒(生產(chǎn)批號：PCV20210517E)購自哈爾濱元亨生物藥業(yè)有限公司; IDEXX、IDEXX PRV/ADV gB抗體檢測試劑盒(貨號：99-09732)；IDEXX PRV/ADV gE 抗體檢測試劑盒(貨號：99-09836)

1.2 主要儀器

離心機(jī)(Sigma，型號: 6-16K)；酶聯(lián)免疫分析儀(杭州奧盛儀器有限公司，型號：AMR-100)；實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)(德國Roche公司，型號：LightCycler480II)

1.3 試驗(yàn)分組

采取隨機(jī)分組試驗(yàn)設(shè)計(jì)，選擇同期發(fā)情的大長及長大二元/三元母豬35頭，用同一頭公豬的精液人工授精，兩日內(nèi)間隔12 h重復(fù)3次。隨機(jī)分為兩個(gè)處理組，分別為芪英湯組(=16)和空白組(=19)，芪英湯組于母豬妊娠開始飼喂，分娩結(jié)束后完成飼喂。當(dāng)新生仔豬斷奶后，將飼喂芪英湯母豬組的斷奶仔豬作為子甘湯組，空白母豬組的斷奶仔豬為仔豬空白對照組，各組均分為7個(gè)平行重復(fù)組(=10)， 于新生仔豬斷奶后開始飼喂，試驗(yàn)周期為30 d?？瞻滋幚斫M飼喂母豬或斷奶仔豬基礎(chǔ)日糧，芪英湯組、子甘湯組分別以1.0、0.5 g·kg將芪英湯粉劑和子甘湯粉劑混入基礎(chǔ)日糧中。

表1 母豬日糧中營養(yǎng)成分

1.4 飼喂管理

試驗(yàn)開始之前對豬舍進(jìn)行清洗、消毒、空置，對母豬常規(guī)免疫以及驅(qū)蟲處理?？刂曝i舍不同圍欄內(nèi)的溫濕度、通風(fēng)狀況一致。根據(jù)豬場飼喂程序正常飼喂，母豬妊娠期前84 d，給料量為(2.0±0.5) kg·d；妊娠期85～112 d，給料量為 (3.5±0.5) kg·d；產(chǎn)前 2 d，給料量為 2.0 kg·d；產(chǎn)仔當(dāng)天，給料量為 1.0 kg；哺乳期1周內(nèi)，除第1天不給料外，其余每頭每天從1.0 kg 依次遞增，一周后恢復(fù)自由采食。每日4:30—5:00、16:20—16:50飼喂兩次，均為自由采食和飲水。將各組斷奶仔豬分于同一仔豬豬舍，并且各組重復(fù)分在同一欄。每天早上7:00—8:00、13:00—14:00、18：00—19:00以1.5 kg飼料·d飼喂仔豬3次，仔豬體重10 kg后更換基礎(chǔ)日糧(圖1)。

1.5 樣品采集與分析

母豬妊娠期全過程檢測豬舍溫度、濕度以及豬舍空氣的氨氣含量，維持試驗(yàn)過程中適宜的環(huán)境條件。每個(gè)處理組選取7頭母豬，在妊娠期30、60、90 d和分娩當(dāng)天進(jìn)行頸前腔靜脈采血，每頭次母豬采血5 mL， 于5 mL采血管中；每個(gè)處理組選取2頭斷奶仔豬，在10、20、30 d進(jìn)行頸前腔靜脈采血10 mL，分別于5 mL EDTA采血管和5 mL采血管， 4 ℃3 000 r·min離心10 min后，取上清分裝于1 mL離心管中，于-80 ℃保存。

表2 斷奶仔豬日糧中營養(yǎng)成分

圖1 芪英湯和子甘湯組試驗(yàn)流程Fig.1 Qiying decoction and Zigan decoction group test process

樣品用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定IgA、IgM、IgG、IL-6、IL-1β、TNF-α，各項(xiàng)操作均按照ELISA試劑盒說明書進(jìn)行；用qPCR方法檢測母豬圓環(huán)病毒2型、偽狂犬病病毒GB、偽狂犬病病毒GE、豬繁殖與呼吸綜合征病毒以及酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測病毒抗體，檢測時(shí)間為妊娠期90 d。

分娩過程中，詳細(xì)記錄好分娩參數(shù)，包括分娩持續(xù)時(shí)間、出生間隔、產(chǎn)仔數(shù)、新生仔豬重量、死胎數(shù)以及死胎出生順序、弱胎數(shù)等指標(biāo)。分別在仔豬斷奶前和仔豬斷奶后稱重，同時(shí)每天記錄各組動(dòng)物采食量、腹瀉率。

1.6 數(shù)據(jù)處理與分析

2 結(jié) 果

2.1 芪英湯作為飼料添加劑對妊娠母豬繁殖性能的影響

妊娠舍面積、空間大，保持豬舍內(nèi)的良好的通風(fēng)條件，溫度波動(dòng)較大，差異顯著，同時(shí)較大程度上受季節(jié)因素的影響，溫度保持在15～25 ℃水平。與妊娠舍相比，分娩舍面積、空間小且豬舍環(huán)境相對封閉，溫度則穩(wěn)定在10～24 ℃，較高于妊娠舍最低溫度(圖2A)。本試驗(yàn)?zāi)肛i整個(gè)妊娠期作為試驗(yàn)周期，貫穿夏、秋、冬3個(gè)季節(jié)，由于試驗(yàn)初期位于夏末，豬舍配有水簾，濕度相比其他時(shí)間段濕度較高，妊娠期20～60 d濕度變化顯著，60 d后濕度趨于穩(wěn)定，濕度相對較高，妊娠舍濕度穩(wěn)定在36%～82%；分娩舍濕度穩(wěn)定在57%～75%，整體濕度適中(圖2B)。豬舍空氣中的氨氣檢測值，妊娠舍氨氣值≤5×10，分娩舍氨氣值≥2×10且≤7×10。環(huán)境溫度、濕度適宜母豬生產(chǎn)，空白對照組和芪英湯處理組均在相同豬舍環(huán)境條件下開展試驗(yàn)，排除環(huán)境對母豬繁殖性能的影響。

仔豬出生順序顯著影響仔豬死亡率，試驗(yàn)中仔豬出生順序主要集中在25%之前以及90%之后，出生順序集中于50%的仔豬存活率高，與芪英湯處理組對比，空白對照組死胎出生順序比較集中，差異不顯著(圖2C)。芪英湯處理組死胎體重低于空白對照組，差異不顯著，并且兩種死胎性狀之間不存在差異(圖2D)。母豬妊娠周期長度平均為114 d，芪英湯處理組母豬的妊娠周期長度增加(圖2E))。低胎次母豬(2～6胎)，與對照組相比，芪英湯處理組仔豬出生均重增加0.02 kg，死胎率下降1.96%，弱仔率下降5.38%，仔豬死亡率下降8.25%，斷奶后仔豬均重增加0.37 kg。與對照組相比，高胎次母豬在窩均死胎數(shù)、死胎率結(jié)果剛好相反(表3)。

A. 母豬妊娠舍和分娩舍溫度曲線；B.母豬妊娠舍和分娩舍濕度曲線；C.母豬死胎出現(xiàn)順序；D. 新生仔豬死胎體重；E. 母豬妊娠周期A. Temperature curve of sow gestation house and farrowing house; B. Humidity curve of sow gestation house and farrowing house; C. The order of sow stillbirth; D.Stillbirth weight of newborn piglets; E. Sow gestation cycle length圖2 妊娠母豬繁殖性能Fig.2 Reproductive performance of pregnant sow

2.2 芪英湯對妊娠母豬炎性因子、免疫球蛋白、病毒性疾病抗體的影響

血清中TNF-α含量在芪英湯處理組和空白處理組之間，妊娠30 d差異不顯著，60、90 d、分娩當(dāng)天顯著低于空白處理組(圖3A)，血清中IL-6含量在妊娠期30、60 d顯著低于空白處理組，芪英湯處理組IL-6含量呈上升趨勢，且分娩當(dāng)天顯著低于空白處理組 (圖3B)，IL-1β含量在妊娠期30、90 d均顯著低于空白處理組，分娩當(dāng)天差異不顯著，低于空白處理組(圖3C)。不同階段妊娠母豬血清中，芪英湯處理組在整個(gè)妊娠周期母豬血清中的IgA含量呈下降趨勢，分娩當(dāng)天血清中IgA含量顯著低于空白處理組(圖3D)。芪英湯處理組與空白處理組血清中IgG含量均呈上升趨勢，妊娠期30、60 d、分娩當(dāng)天血清中IgG含量顯著低于空白對照組(圖3E)。IgM含量與空白處理組對比，在妊娠期30、60 d差異顯著，妊娠期90 d、分娩當(dāng)天差異不顯著，整體呈上升趨勢(圖3F)。

母豬血清中未檢出病毒陽性，但血清中檢測到病毒抗體，在正常免疫程序免疫后的病毒性疾病抗體水平表現(xiàn)為芪英湯處理后圓環(huán)病毒Ⅱ型抗體、偽狂犬病病毒GB 抗體、繁殖與呼吸綜合征抗體水平均呈現(xiàn)陽性，同時(shí)其中出現(xiàn)偽狂犬病病毒GE抗體陽性(表4)。

表3 妊娠母豬分娩數(shù)據(jù)

2.3 子甘湯對斷奶仔豬生長性能的影響

斷奶仔豬斷奶時(shí)體重和斷奶30 d后體重均差異不顯著(圖4A、4B)，與空白處理組對比，斷奶仔豬頭均增重、頭均采食量，子甘湯處理組分別下降6%、9%，差異不顯著(圖4C、D)。子甘湯處理組，料肉比顯著低于空白處理組(圖4E)，同時(shí)能夠預(yù)防斷奶仔豬腹瀉的發(fā)生，腹瀉率顯著低于空白處理組(圖4F)。

2.4 子甘湯對斷奶仔豬血常規(guī)、免疫球蛋白IgA的影響

空白處理組斷奶仔豬在斷奶30 d白細(xì)胞數(shù)量超過最高限水平，存在炎癥，子甘湯處理后，白細(xì)胞降到正常水平，炎癥消失(圖5A)?？瞻滋幚斫M和子甘湯處理組在斷奶10、20 d血液中紅細(xì)胞數(shù)量、血紅蛋白數(shù)量、紅細(xì)胞比積低于最低限，斷奶30 d，子甘湯處理組恢復(fù)到正常水平(圖5B～D)。血小板數(shù)量空白處理組與子甘湯處理組差異不顯著(圖5E)。另外斷奶仔豬血清中IgA含量30 d子甘湯處理組顯著高于空白處理組(圖5F)。

3 討 論

母豬繁殖性能和斷奶仔豬腹瀉嚴(yán)重影響著集約化養(yǎng)殖場利潤，目前，我國母豬產(chǎn)仔存活數(shù)以及仔豬斷奶后腹瀉仍然是有待解決的問題?？股氐乃幬餁埩袅看?，加上抗生素的禁用，動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)領(lǐng)域把特異性免疫刺激劑、天然植物以及植物提取物作為飼料添加劑研究熱點(diǎn)。李雁冰研究發(fā)現(xiàn)飼喂不同纖維素、蛋白質(zhì)能夠降低斷奶仔豬腹瀉。在研究高溫對母豬繁殖性能的研究中發(fā)現(xiàn)添加不同營養(yǎng)水平日糧能夠緩解高溫對母豬繁殖性能的影響。另外，陳敏霞等研究發(fā)現(xiàn)，在基礎(chǔ)日糧中添加淀粉、油脂能提高妊娠母豬糖代謝以及母豬繁殖性能。中醫(yī)辯證認(rèn)為“氣為血之帥，血為氣之母”，二者相輔相成，妊娠母豬由于氣血不足，陰陽失衡，免疫力低下，妊娠母豬自身氣虛導(dǎo)致母豬血液不能運(yùn)送至乳腺，影響乳腺的正常發(fā)育，最終導(dǎo)致產(chǎn)死胎、弱胎等繁殖性能問題。斷奶仔豬脾胃虛弱，脾陽不振，致使脾胃運(yùn)化失職，水谷不能腐熟，精微不能運(yùn)化，清濁不分，致成瀉癥。芪英湯中藥復(fù)方主要組成由黃芪、蒲公英、金銀花、白術(shù)、知母、女貞子、甘草等中藥，其中，黃芪、女貞子、甘草、白術(shù)為補(bǔ)中益氣類中藥，金銀花、蒲公英、知母為清熱解毒類中藥，芪英湯中藥復(fù)方具有補(bǔ)氣固表、益氣健脾、解毒清熱功效。子甘湯主要成分有訶子、苦木、甘草等中藥，具有澀腸止瀉、清熱解毒、健脾的功效。

A.不同階段妊娠母豬血清中TNF-α含量; B.不同階段妊娠母豬血清中IL-6含量；C.不同階段妊娠母豬血清中IL-1β含量；D.不同階段妊娠母豬血清中IgA含量; E.不同階段妊娠母豬血清中IgG含量；F.不同階段妊娠母豬血清中IgM含量A. TNF-αcontent in the serum of pregnant sows at different stages; B. IL-6 content in the serum of pregnant sows at different stages; C. IL-1β content in the serum of pregnant sows at different stages; D. IgA content in the serum of pregnant sows at different stages; E. IgG content in the serum of pregnant sows at different stages; F. IgM content in the serum of pregnant sows at different stages圖3 妊娠母豬血清中炎性因子、免疫球蛋白含量Fig.3 Sow pregnancy inflammatory cytokines, immunoglobulin content

本試驗(yàn)以芪英湯、子甘湯分別作為母豬妊娠期、仔豬斷奶期的飼料添加劑，在基礎(chǔ)日糧中添加芪英湯粉劑具有降低炎性因子的作用，提高母豬的繁殖性能以及對病毒疾病性抗體具有一定的保護(hù)作用；子甘湯能降低仔豬腹瀉率、料肉比，從而提高斷奶仔豬的生長性能，同時(shí)在斷奶后期增加IgA的含量提高仔豬免疫力水平。這與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果一致。

由于芪英湯和子甘湯都是復(fù)方制劑，成分多，對機(jī)體的作用靶點(diǎn)多，因此有關(guān)芪英湯降低炎性因子的機(jī)制以及子甘湯提高機(jī)體免疫力預(yù)防斷奶仔豬腹瀉和提高其生長性能的機(jī)制需要進(jìn)一步研究。

4 結(jié) 論

芪英湯能夠提高母豬繁殖性能，子甘湯能夠提高斷奶仔豬的生長性能，為生產(chǎn)應(yīng)用提供了依據(jù)。

表4 病毒性疾病抗體檢測結(jié)果

A.斷奶仔豬初重; B.斷奶仔豬末重；C.斷奶仔豬頭均增重;D. 斷奶仔豬頭均吃料；E.斷奶仔豬料肉比；F.斷奶仔豬腹瀉率A. Weaned piglet initial weight; B. Weaned piglet weight; C. Weaned piglet’s average daily weight gain; D. Weaned piglet’s head feed; E. Weaned piglet’s feed and meat ratio; F. Weaned piglet’s diarrhea rate圖4 斷奶仔豬生長性能Fig.4 Growth performance of weaned piglets

A. 斷奶仔豬血液中白細(xì)胞數(shù)量；B. 斷奶仔豬血液中紅細(xì)胞數(shù)量；C.斷奶仔豬血液中血紅蛋白數(shù)量;D. 斷奶仔豬血液中紅細(xì)胞比容；E.斷奶仔豬血液中血小板數(shù)量；F.斷奶仔豬血液中IgA的含量A. The number of WBC in the blood of weaned piglets; B. The number of RBC in the blood of weaned piglets; C. The number of HGB in the blood of weaned piglets; D. HTC in the blood of weaned piglets; E.PLT in the blood of weaned piglets;F. The content of IgA in the blood of weaned piglets圖5 斷奶仔豬血常規(guī)、IgAFig.5 Weaned piglet blood routine, IgA