王利，李艷華，杜輝*

(1.南通江山農(nóng)藥化工股份有限公司，江蘇 南通 226017；2.哈爾濱利民農(nóng)化技術(shù)有限公司，黑龍江 哈爾濱 150025)

60%乙·嗪·滴辛酯乳油是由乙草胺、嗪草酮、2，4-滴異辛酯三種有效成分復(fù)配而成的旱田除草劑，在大豆、玉米播種后出苗前進(jìn)行土壤封閉處理，可一次性防除大豆田、玉米田等旱田多種雜草，除草譜廣、防效穩(wěn)定[1]。

本文采用高效液相色譜法[2]，在同一色譜條件下，實(shí)現(xiàn)了乙草胺、嗪草酮、2，4-滴異辛酯的有效分離。該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，精密度和準(zhǔn)確度均能達(dá)到定量分析的要求，適用于產(chǎn)品質(zhì)量的檢測(cè)分析。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器和試劑 日本島津LC-10A液相色譜儀(帶紫外檢測(cè)器)；色譜工作站；超聲波清洗器；分析天平；微量注射器50μL；甲醇(色譜純)；乙腈(色譜純)；磷酸(色譜純)(均為美國(guó)天地公司)；超純水(電阻率：25℃，18.2MΩ·cm)；乙草胺標(biāo)準(zhǔn)品(質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.5%)；嗪草酮標(biāo)準(zhǔn)品(質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.5%)；2，4-滴異辛酯標(biāo)準(zhǔn)品(質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.4%)，國(guó)家農(nóng)藥質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心(沈陽(yáng))提供。

1.2 色譜條件 色譜柱：200mm×4.6mm(i.d.)不銹鋼柱，內(nèi)裝C18填充物，粒徑為5μm；流動(dòng)相：A泵：乙腈，B泵：酸水(磷酸調(diào)pH值=2.5)；按時(shí)間程序運(yùn)行：0～7min時(shí)，A：B=50：50，7～19min時(shí)，A：B=75：25， 19～20min時(shí)，A：B=85：15，35min停止。流速1.0mL/min；柱溫：室溫；檢測(cè)波長(zhǎng)：236nm；進(jìn)樣量5μL。保留時(shí)間： 嗪草酮5.2min；乙草胺13.4min；2，4-滴異辛酯30.4min。色譜圖(圖1、圖2)。

圖1 標(biāo)樣溶液高效液相色譜圖

圖2 60%乙·嗪·滴辛酯乳油高效液相色譜圖

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 準(zhǔn)確稱取乙草胺標(biāo)準(zhǔn)品0.20g(精確至0.02mg)、嗪草酮標(biāo)準(zhǔn)品0.03g(精確至0.02mg)、2，4-滴異辛酯標(biāo)準(zhǔn)品0.09g(精確至0.02mg)于50mL容量瓶中，加入約45mL甲醇溶解，在超聲波上脫氣5min，使樣品全部溶解，冷卻至室溫，定容，搖勻。

1.3.2 試樣溶液的配制 準(zhǔn)確稱取試樣0.5g(精確至0.02mg)于50mL容量瓶中，加入約45mL甲醇溶解，在超聲波上脫氣5min，使樣品全部溶解，冷卻至室溫，定容，搖勻。

1.4 測(cè)定 在上述操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，待相鄰2針響應(yīng)值變化<1.5%后，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測(cè)定。

1.5 計(jì)算 乙草胺(或嗪草酮、2，4-滴異辛酯)質(zhì)量分?jǐn)?shù)按下式計(jì)算：

式中A1：標(biāo)準(zhǔn)品溶液中，乙草胺(或嗪草酮、2，4-滴異辛酯)峰面積的平均值；A2：試樣溶液中，乙草胺(或嗪草酮、2，4-滴異辛酯)峰面積的平均值；m1：乙草胺(或嗪草酮、2，4-滴異辛酯)標(biāo)準(zhǔn)品稱樣量(g)；m2：試樣的質(zhì)量(g)；ω：標(biāo)準(zhǔn)品中乙草胺(或嗪草酮、2，4-滴異辛酯)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)(%)。

2 結(jié)果與討論

2.1 有效成分的特異性 液相色譜操作條件：

檢測(cè)器：二極管陣列檢測(cè)器；

色譜柱：250mm×4.6mm(i.d)不銹鋼柱，內(nèi)裝C18填充物，粒徑為5μm；

流動(dòng)相：A泵：乙腈，B泵：酸水(磷酸調(diào)pH值=2.5)；按時(shí)間程序運(yùn)行：0～7min時(shí)，A：B=50：50，7～19min時(shí)，A：B=75：25， 19～20min時(shí)，A：B=85：15，35min停止。

稱取適量乙草胺、嗪草酮、2，4-滴異辛酯標(biāo)準(zhǔn)品置于一個(gè)50mL容量瓶中，取試樣置于另一個(gè)50mL容量瓶中，使用甲醇溶解，過濾，作為特異性溶液。

待儀器穩(wěn)定后進(jìn)樣，進(jìn)行特異性測(cè)定。結(jié)果顯示未檢測(cè)到不純物，峰純度指數(shù)>0.99，表明特異性符合要求。

2.2 流動(dòng)相的選擇 以常規(guī)的甲醇+水為流動(dòng)相，2，4-滴異辛酯出峰時(shí)間太慢，效率太低，最終確定乙腈+水為流動(dòng)相，按時(shí)間程序運(yùn)行，樣品中各組分能很好分離，保留時(shí)間適中。

2.3 波長(zhǎng)的選擇 考查不同波長(zhǎng)下乙草胺、嗪草酮和2，4-滴異辛酯的響應(yīng)值，在236nm處各組分均有較大吸收，響應(yīng)值比例適當(dāng)且無(wú)雜質(zhì)干擾，最終選擇檢測(cè)波長(zhǎng)236nm。

2.4 方法線性相關(guān)性試驗(yàn) 準(zhǔn)確配制5個(gè)不同濃度的乙·嗪·異辛酯標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別進(jìn)樣分析，得到響應(yīng)值(表1、表2、表3)。以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，與其相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制線性關(guān)系曲線(圖3、圖4、圖5)。得到乙草胺線性回歸方程為y=0.793 7x+0.017 9，相關(guān)系數(shù)為0.999 7(n=5)、嗪草酮線性回歸方程為y=5.089 5x-0.008 7，相關(guān)系數(shù)為0.999 9(n=5)、2，4-滴異辛酯線性回歸方程為y=2.274 6x+0.064，相關(guān)系數(shù)為0.999 9(n=5)，說(shuō)明在選定的條件下，各有效成分的響應(yīng)值與其質(zhì)量濃度有良好的線性相關(guān)性。

圖3 乙草胺線性關(guān)系曲線圖

圖4 嗪草酮線性關(guān)系曲線

圖5 2，4-滴異辛酯線性關(guān)系曲線

表1 乙草胺線性關(guān)系試驗(yàn)結(jié)果

表2 嗪草酮線性關(guān)系試驗(yàn)結(jié)果

表3 2，4-滴異辛酯線性關(guān)系試驗(yàn)結(jié)果

2.5 方法精密度的測(cè)定 在選定的色譜操作條件下，對(duì)同一樣品重復(fù)測(cè)定5次，結(jié)果乙草胺、嗪草酮、2，4-滴異辛酯的標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.085、0.032、0.077，變異系數(shù)分別為0.23%、0.63%、0.42%。表明該方法的精密度較高(表4)。

表4 精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.6 方法準(zhǔn)確度的測(cè)定[3]為了證明方法的準(zhǔn)確度，做產(chǎn)品回收率試驗(yàn)。方法是在定量的60%乙·嗪·滴辛酯乳油中加入已知含量的乙草胺、嗪草酮和2，4-滴異辛酯標(biāo)準(zhǔn)品，分析其含量，計(jì)算回收率，結(jié)果(表5)。乙草胺的回收率在98.65%～99.97%之間、嗪草酮的回收率在99.06%～99.69%之間、2，4-滴異辛酯的回收率在98.83%～99.95%之間，說(shuō)明該測(cè)定方法具有較好的準(zhǔn)確度。

表5 60%乙·嗪·滴辛酯乳油準(zhǔn)確度測(cè)定表

3 結(jié)論

試驗(yàn)結(jié)果表明，在本文建立的分析條件下，60%乙·嗪·滴辛酯乳油的各有效成分分離效果好，雜質(zhì)干擾少，方法具有很好的精密度和準(zhǔn)確度，分析速度較快、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，適合工業(yè)化生產(chǎn)控制分析，是較為理想的分析方法。