張 璇，王娜娜，馬瑞瑩，郭景明，常 宏

(山西省檢驗(yàn)檢測(cè)中心， 山西 太原 030025)

甲胺磷、乙酰甲胺磷、甲拌磷、甲拌磷砜、甲拌磷亞砜、氧樂(lè)果和樂(lè)果是廣譜類殺蟲(chóng)劑，雖然在食用菌的栽培種植過(guò)程中禁止使用，但作為廣譜殺蟲(chóng)劑，時(shí)有檢出。已有的氣相色譜檢測(cè)方法因其干擾強(qiáng)、前處理過(guò)程復(fù)雜，假陽(yáng)性結(jié)果時(shí)有發(fā)生，雖然氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀也可以檢測(cè)這類型農(nóng)藥，但是峰型拖尾嚴(yán)重，基質(zhì)干擾大，回收率相對(duì)比較差，所以本文采取QuECHERS萃取鹽包提取，EMR凈化包凈化，用液質(zhì)聯(lián)用儀檢測(cè)的方法，來(lái)大大降低了食用菌基質(zhì)的干擾性，縮短檢測(cè)時(shí)間，提高準(zhǔn)確率。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與材料

1.1.1 儀器 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀，Agilent 1290-6470，電子天平離心機(jī)，實(shí)驗(yàn)室常規(guī)玻璃儀器。

1.1.2 試劑與耗材 乙腈(色譜純)，PTFE濾膜(0.2 2μm)，QuECHERS萃取鹽包(安捷倫5982-5650CH)，EMR進(jìn)化鹽包(安捷倫5982-5056)。

1.1.3 標(biāo)準(zhǔn)品 甲胺磷、乙酰甲胺磷、甲拌磷、甲拌磷砜、甲拌磷亞砜、氧樂(lè)果和樂(lè)果(天津環(huán)境監(jiān)測(cè)中心)，濃度均為1 000μg/mL

1.2 實(shí)驗(yàn)步驟

1.2.1 樣品制備 將鮮食食用菌(整顆)放入破壁機(jī)中勻漿成漿狀后立刻放入樣品盒中，干制食用菌用研磨機(jī)研磨并過(guò)20目篩后放入樣品盒中。

1.2.2 提取 稱取10.00g試樣放入50ml離心管中，加入10.0mL乙腈和萃取鹽包和1顆陶瓷均質(zhì)子，蓋上離心蓋，劇烈振蕩1min后4 200r/min離心5min。

1.2.3 凈化 吸取6mL上清液加到內(nèi)含EMR凈化包的15mL離心管中，渦旋混勻1min。4 200r/min離心5min。吸取一定量的上清液后用0.22μm濾膜過(guò)濾，待測(cè)。

1.3 儀器條件

液相色譜條件：

色譜柱：C18柱 100×2.1mm，填料細(xì)度1.8μm，

柱溫：35℃

進(jìn)樣量：1.0μL

溶劑A：0.1%甲酸-5mmol/L乙酸銨的水溶液

溶劑B： 甲醇(表1)

表1

質(zhì)譜條件：

電離方式：電噴霧電離(ESI)

掃描方式：正離子掃描

檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)

離子源參數(shù)參考條件：毛細(xì)管電壓：3 500V，離子傳輸毛細(xì)管溫度：350℃，載氣溫度：280℃，載氣流量：8L/min，氮?dú)饬髁浚?0psi，鞘氣溫度：330℃，鞘氣流量：11L/min。(表2)

表2

2 結(jié)果與討論

2.1 方法線性范圍和檢出限 將甲胺磷、乙酰甲胺磷、甲拌磷、甲拌磷砜、甲拌磷亞砜、氧樂(lè)果和樂(lè)果標(biāo)準(zhǔn)溶液用甲醇+水逐級(jí)稀釋成由5、10、50、100、200、500ng/mL組成的標(biāo)準(zhǔn)工作液，在上述液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜條件測(cè)定，得到色譜圖，以峰面積(Y)-絕對(duì)量(X)為坐標(biāo)做工作標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果表明甲胺磷、乙酰甲胺磷、甲拌磷、甲拌磷砜、甲拌磷亞砜、氧樂(lè)果和樂(lè)果的絕對(duì)量與峰面積在上述區(qū)間呈線性關(guān)系。甲胺磷的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y = 26 086x-103 341，其R值為0.999 8；乙酰甲胺磷的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y =15 532x+12 126，其R值為0.999 3；甲拌磷的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y = 6 662.6x-2 751.6，其R值為0.999 1；甲拌磷砜的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y = 2 591x-6 479.2，其R值為0.999 6；甲拌磷亞砜的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y = 31 250x+123 712，其R值為0.999 4；氧樂(lè)果的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y = 16 282x-86 428，其R值為0.998 8；樂(lè)果的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y = 29 047x-287 389，其R值為0.997 9；標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖1-1)、(圖1-2)、(圖1-3)、(圖1-4)、(圖1-5)、(圖1-6)、(圖1-7)。

圖1-1 甲胺磷標(biāo)準(zhǔn)溶液工作曲線圖

圖1-2 乙酰甲胺磷標(biāo)準(zhǔn)溶液工作曲線圖

圖1-3 甲拌磷標(biāo)準(zhǔn)溶液工作曲線圖

圖1-4 甲拌磷砜標(biāo)準(zhǔn)溶液工作曲線圖

圖1-5 甲拌磷亞砜標(biāo)準(zhǔn)溶液工作曲線圖

圖1-6 氧樂(lè)果標(biāo)準(zhǔn)溶液工作曲線圖

圖1-7 樂(lè)果標(biāo)準(zhǔn)溶液工作曲線圖

2.2 檢出限 甲胺磷、乙酰甲胺磷、甲拌磷、甲拌磷砜、甲拌磷亞砜、氧樂(lè)果和樂(lè)果均為1.0×10-10g

2.3 相對(duì)保留時(shí)間 甲胺磷1.81min；乙酰甲胺磷2.54min；甲拌磷6.84min；甲拌磷砜3.83min；甲拌磷亞砜5.82min；氧樂(lè)果2.95min；樂(lè)果4.58min。

2.4 方法定量限、添加回收率與精密度 定量限為0.005mg/kg，取空白食用菌樣品進(jìn)行甲胺磷、乙酰甲胺磷、甲拌磷、甲拌磷砜、甲拌磷亞砜、氧樂(lè)果和樂(lè)果添加回收率試驗(yàn)，添加濃度為0.005、0.1、0.5mg/kg 3個(gè)水平，各處理重復(fù)5次，甲胺磷在食用菌中的添加回收率為70.1%～95.4%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.0%～6.77%；乙酰甲胺磷在食用菌中的添加回收率為70.6%～94.5%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.70%～8.46%；甲拌磷在食用菌中的添加回收率為71.6%～102.4%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.53%～9.25%；甲拌磷砜在食用菌中的添加回收率為75.1%～103.4%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為6.12%～9.74%；甲拌磷亞砜在食用菌中的添加回收率為70.4%～94.6%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.38%～7.27%；氧樂(lè)果在食用菌中的添加回收率為73.5%～99.4%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.02%～7.90%；樂(lè)果在食用菌中的添加回收率為70.9%～97.4%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為5.21%～7.46%；結(jié)果(表3)。

表3

2.5 計(jì)算公式

式中：X： 試樣中農(nóng)藥殘留量，mg/kg；

C： 標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，mg/L；

A1： 試樣溶液的峰面積；

A： 標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰面積；

V： 試樣定容體積，mL；

m： 樣本質(zhì)量，g。

2.6 質(zhì)譜條件優(yōu)化 根據(jù)7種農(nóng)藥的化學(xué)性質(zhì)和分子量等在MRM模式下對(duì)電噴霧電壓、離子源溫度、鞘氣壓力、氮?dú)饬魉俚荣|(zhì)譜條件進(jìn)行優(yōu)化。得到特征子離子信息，選擇相對(duì)豐度較高的兩個(gè)子離子，對(duì)碰撞能量、電子管透鏡電壓進(jìn)行優(yōu)化。

2.7 液相色譜條件優(yōu)化 流動(dòng)相加入0.1%甲酸和中性的乙酸銨緩沖鹽，加入甲酸能提高離子化效率，當(dāng)乙酸銨濃度為5mmol/L，甲酸濃度為0.1%時(shí)幾種農(nóng)藥的的峰形和保留時(shí)間均較好，響應(yīng)也較高。且甲醇-水(0.1%甲酸+5mmol/L乙酸銨)配制簡(jiǎn)單、重現(xiàn)性好、對(duì)環(huán)境污染小，綜合考慮選擇甲醇-水(0.1%甲酸+5mmol/L乙酸銨)作為流動(dòng)相。

2.8 前處理?xiàng)l件優(yōu)化 選擇QuECHERS方法，前處理簡(jiǎn)單快速，大大的降低溶劑的使用，從而能有效的減少對(duì)環(huán)境的污染和檢測(cè)成本。

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)主要研究食用菌中5種農(nóng)藥殘留極其代謝物的液質(zhì)聯(lián)用檢測(cè)方法，通過(guò)優(yōu)化前處理、液相色譜條件、質(zhì)譜條件等關(guān)鍵因素，得到簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確且重現(xiàn)行優(yōu)的檢測(cè)方法，不僅能提高檢測(cè)效率，還能提高結(jié)果的準(zhǔn)確性。

4 實(shí)驗(yàn)譜圖

標(biāo)樣

食用菌添加

食用菌空白