黃茲寶，張 璐，董 琳，張小坡，韓麗芳，張彩云

（1.海南醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，海南 ?？?571199；2.海南醫(yī)學(xué)院藥物安全評價研究中心，海南 ?？?571199）

無根藤（Cassytha filiformisL）為樟科無根藤屬植物，又名無娘藤、無爺藤、羅網(wǎng)藤、無根草等［1］。無根藤主要分布于中國、非洲、澳大利亞等熱帶及亞熱帶地區(qū)，在我國主要分布于海南、廣西、臺灣、貴州、福建等地區(qū)。常見于山坡灌木叢或疏林中，寄生纏繞草本植物，借盤狀吸根攀附于寄主植物上［2］。無根藤為我國民間常用藥用植物，以全草入藥，其味甘、性涼，具有清熱止咳、涼血止血等功效。民間傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)常用于糖尿病、風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、腎炎水腫、尿路結(jié)石等多種疾?。?］?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，無根藤具有抗糖尿病、抗腫瘤、抗寄生蟲、抗病毒等多種藥理活性。在化學(xué)成分研究方面，無根藤主要含有生物堿、黃酮、揮發(fā)油等成分，其中阿樸菲類生物堿為其特征性成分。本文針對無根藤的化學(xué)成分和藥理活性的國內(nèi)外研究進(jìn)展進(jìn)行系統(tǒng)性綜述，以期為其深入開發(fā)利用提供參考依據(jù)。

1 化學(xué)成分

1.1 生物堿類

早在二十世紀(jì)中葉就有學(xué)者開始對無根藤的化學(xué)成分進(jìn)行研究并分離出生物堿類成分。無根藤經(jīng)過甲醇或乙醇提取，二氯甲烷或氯仿萃取得到萃取物，再經(jīng)過硅膠色譜、凝膠色譜、制備薄層色譜和高效液相色譜分離純化，然后用波譜分析方法學(xué)等進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定得到一系列生物堿類化合物，其中大多數(shù)為阿樸菲類生物堿。以下是國內(nèi)外學(xué)者從無根藤中分離得到的阿樸菲類生物堿化合物1～23及其化學(xué)結(jié)構(gòu)。見表1 和圖1。

表1 無根藤阿樸菲類生物堿化合物Tab 1 Aporphine alkaloids isolated from Cassytha filiformis L

圖1 無根藤阿樸菲類生物堿化合物1～23 化學(xué)結(jié)構(gòu)Fig 1 Chemical structure of aporphine alkaloids 1～23 from Cassytha filiformis L

除了阿樸菲類生物堿特征成分外，無根藤中還存在許多其他類型生物堿。1997 年Wu 等［4］對無根藤進(jìn)行甲醇提取、氯仿萃取，硅膠、薄層色譜分離純化等實驗得到3 個生物堿類化合物，經(jīng)波譜分析方法學(xué)鑒定結(jié)構(gòu)為化合物24（cassameridine）、25（cas?samedine）、26（lysicamine）。Montenegro 等［12］從 無根藤中分離得到生物堿類化合物27（thalicminine）。Chang 等［8］對無根藤甲醇提取、氯仿萃取得到萃取物，經(jīng)過硅膠、制備薄層色譜和高效液相色譜進(jìn)行分離純化，并經(jīng)波譜方法學(xué)結(jié)構(gòu)鑒定為28（fili?formine）、31（pronuciferine）。Tsai 等［11］對無根藤進(jìn)行一系列提取分離純化得到生物堿類化合物29（isofiliformine）、32（（-）-O-methylflavinantine）、33（（-）-salutaridine）。Rios 等［13］從無根藤中分離得到生物堿類化合物30（stepharine）?；衔铮?4～33）。見圖2。

圖2 無根藤生物堿類化合物化學(xué)結(jié)構(gòu)Fig 2 Chemical structures of alkaloids from Cassytha filiformis L

綜上，生物堿作為無根藤的主要化學(xué)成分，研究尚未充分，提取分離方法基本類似，但未見研究報道對無根藤中的生物堿提取工藝進(jìn)行優(yōu)化研究，以致獲得更高的收率。所以有必要對無根藤中生物堿類化合物進(jìn)行系統(tǒng)性分離鑒定研究。目前研究的無根藤大多是來自非洲國家地區(qū)，研究部位為無根藤全草，提取分離技術(shù)大多采用甲醇進(jìn)行提取，然后根據(jù)生物堿的理化性質(zhì)，采用酸提堿沉法獲得總生物堿，然后再通過一系列柱色譜對總生物堿進(jìn)行分離純化，應(yīng)用核磁共振等波譜學(xué)技術(shù)進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。而在中國海南、廣西、貴州等地也存在大量無根藤資源，它們也具有潛在的研究利用價值。

1.2 揮發(fā)油類成分

目前對無根藤中揮發(fā)油類成分的研究較少，根據(jù)揮發(fā)油類成分的理化性質(zhì)，大多采用水蒸氣蒸餾法進(jìn)行提取。Brophy 等［14］采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析技術(shù)對無根藤提取分離得到的成分進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，得到主要揮發(fā)油類成分為bicyclogermacrene（2%～26%）、spathulenol（27%～36%）和β-caryoph?yllene（5%～10%）。Ouattara 等［15］對科特迪瓦5 個地區(qū)的無根藤全草進(jìn)行揮發(fā)油提取分析，利用水蒸氣蒸餾法提取，氣相色譜-質(zhì)譜-色譜保留指數(shù)聯(lián)用和核磁共振碳譜（13CNMR）等分析技術(shù)進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定得到41 種化合物，其中主要以倍半萜及其衍生物為主。見表2。

表2 無根藤揮發(fā)油類化合物Tab 2 Essential oils isolated from Cassytha filiformis L

1.3 黃酮類

黃酮中有藥用價值的化合物很多，對于無根藤中黃酮類化合物的研究尚未充分，這類化合物也具有潛在的研究開發(fā)價值。Chang 等［8］對無根藤全草甲醇提取、氯仿萃取得到萃取物，通過一系列柱色譜分離純化得到黃酮類化合物，并經(jīng)波譜方法學(xué)結(jié)構(gòu) 鑒 定 為：O-methylflavinantive。Tsai 等［11］從 無 根藤中分離得到黃酮類化合物：isohamnetin、isohamne?tin-3-O-β-glucoside、isohamnetin-3-O-rutinoside、isoh?amnetin-3-O-robinobioside、quercetin-3-O-β-galacto?side、quercetin-3-O-rutinoside、quercetin-3-O-robinobi?oside、kaemperferol-3-O-robinobioside。

1.4 其他類

無根藤中研究得到其他成分包括木質(zhì)素類：（+）-diasyringaresinol、（+）-yangambin、（+）-syrin?garesinol；芳香族醛類：香草醛和異香草醛；衛(wèi)矛醇、甘油脂類、甾醇類［8，16，17］；氨基酸：共17 種氨基酸，主要為中性氨基酸，8 種為必需氨基酸［18］；酚類和皂苷類［19］。

2 藥理活性

無根藤在民間是一種常用中草藥，尤其在非洲地區(qū)，常用來抗寄生蟲、抗?jié)兗翱鼓[瘤［20］。在中國，民族藥及地方藥物志中記載其具有多種功效，如《黎族藥志》記載：“水煎服，外用適量，治泄瀉、痢疾等癥”［21］。無根藤的藥理活性研究主要是抗糖尿病、抗寄生蟲、抗菌、抗腫瘤、抗血小板聚集和抗血管收縮等方面。

2.1 抗糖尿病

糖尿病已成為嚴(yán)重危害人類健康和社會經(jīng)濟(jì)發(fā)展的重大衛(wèi)生問題［22，23］。天然產(chǎn)物逐漸成為研發(fā)新型藥物治療糖尿病的重要來源，特別是2015～2019 年間批準(zhǔn)的9 個抗糖尿病藥物均來源于天然產(chǎn)物［24］。并且在2020 年3 月，中國首個抗糖尿病原創(chuàng)天然藥物-桑枝總生物堿片獲得藥監(jiān)局批準(zhǔn)上市［25］，為治療糖尿病天然藥物研發(fā)提供借鑒。

在《福建藥物志》中記載：“治糖尿病，鮮無根藤30 g，赤小豆、山萆薢9 g。水煎服”［26］，這提示了無根藤具有抗糖尿病作用，但具體有效成分及作用機(jī)制尚未得到深入研究。陳樹思等［27］在研究分析潮汕地區(qū)防治糖尿病的植物資源中表明了無根藤具有抗糖尿病作用，但也未說明其作用成分及機(jī)理。Ezuruike 等［28］在研究非洲植物提取物抗糖尿病中對格列本脲轉(zhuǎn)運的調(diào)控作用中提示無根藤具有抗糖尿病作用，同樣未進(jìn)行深入研究其抗糖尿病機(jī)制。Ezeigbo 等［29］用無根藤的甲醇提取物對四氧嘧啶誘導(dǎo)的糖尿病小鼠進(jìn)行治療，實驗結(jié)果顯示小鼠血糖降低46.8%。氧化應(yīng)激是糖尿病及并發(fā)癥發(fā)生的主要誘因，所以針對其進(jìn)行抗氧化治療加以有效的行為干預(yù)可以降低糖尿病的發(fā)病率［30］。Mythili 等［31］用無根藤的甲醇提取物進(jìn)行了抗氧化活性測定和DPPH 自由基清除試驗。實驗表明無根藤提取物具有一定抗氧化活性，這與治療糖尿病有密切聯(lián)系。Yuliandra 等［32］的研究也表明了無根藤的乙醇提取物具有抗氧化性。

阿樸菲類生物堿成分具有抗糖尿病作用，如張小坡等［33］從潺槁木中發(fā)現(xiàn)具有自主知識產(chǎn)權(quán)的抗糖尿病成分：Litsine A，該成分屬于阿樸菲類生物堿成分［34］。在2017 年，劉欣等［35］通過系統(tǒng)性綜述天然阿樸菲類生物堿成分抗糖尿病作用，發(fā)現(xiàn)阿樸菲類生物堿成分可通過改善葡萄糖代謝、促進(jìn)胰島素分泌、調(diào)節(jié)小腸轉(zhuǎn)運體等發(fā)揮功效。目前研究表明無根藤中主要成分是阿樸菲類生物堿，所以無根藤具有潛在的抗糖尿病研究價值，其發(fā)揮抗糖尿病活性成分及作用機(jī)制尚未見系統(tǒng)的報道，這將成為未來關(guān)注的研究方向。

2.2 抗寄生蟲

無根藤煲水服用可以用來治療絲蟲病引起的乳糜尿［36］。Atawodi 等［37］經(jīng)過調(diào)查研究發(fā)現(xiàn)無根藤磨碎煮熟后用來喂食動物可以治療錐蟲病，但未進(jìn)一步進(jìn)行作用機(jī)制的研究。Hoet 等［7］對無根藤進(jìn)行甲醇提取得到粗提取物，然后通過體外培養(yǎng)方法對布氏錐蟲進(jìn)行抑制活性研究，結(jié)果顯示，IC50=2.2 μg/mL。并進(jìn)一步對提取物進(jìn)行分離鑒定得到生物堿類成分，測定了7 個生物堿對布氏錐蟲的抑制活性研究，其中得出無根藤堿、樟堿和荷包牡丹堿具有良好的在體外抗錐蟲活性。Quetin-Leclercq等［38］對無根藤進(jìn)行提取分離鑒定得到的3 種生物堿（actinodaphnine、cassythine、dicentrine）體外培養(yǎng)試驗，研究表明三者都具有抗錐蟲活性，IC50值分別為3.2、6.0、14.6 μg/mL。該研究結(jié)果也再次證實了Hoet 等［7］的結(jié)論。

2.3 抗菌作用

Oli 等［39］采用無根藤的甲醇粗提取物對金黃色葡萄球菌、沙門氏菌、志賀氏痢疾桿菌和大腸桿菌4種細(xì)菌進(jìn)行抑菌試驗，結(jié)果顯示無根藤提取液對4種供試菌株均表現(xiàn)出一定的抑菌活性，最低抑菌濃度分別為6.25、3.125、6.25 mg/mL 和6.25 mg/mL。Adonu 等［40］采用無根藤甲醇提取物對銅綠假單胞菌和大腸桿菌進(jìn)行體外抑菌試驗，研究表明無根藤提取液對兩種細(xì)菌有抑菌活性，最低抑菌濃度分別為（15.50 ± 3.00）mg/mL 和（18.50 ± 5.37）mg/mL。上述兩者均只是停留在對無根藤粗提物的抗菌作用研究，未進(jìn)一步探索活性成分及作用機(jī)制的研究。

2.4 抗腫瘤

Stevigny 等［6］研究從無根藤中提取分離得到的4 種生物堿（neolitsine、無根藤堿、荷包牡丹堿和樟堿）對幾種腫瘤細(xì)胞的體外抑制活性，結(jié)果顯示neolitsine 是對Hela 和3T3 細(xì)胞抑制活性最強的，IC50值分別為21.6 μg/mL 和21.4 μg/mL；無根藤堿和樟堿對小鼠紅白血病（Mel-5）和人早幼粒細(xì)胞白血?。℉L-60）細(xì)胞具有較強的抑制作用。Hoet 等［7］研究7 種無根藤生物堿（紫堇堿、樟堿、無根藤堿、荷包牡丹堿、海罌粟堿、異紫堇定堿和波爾定）對Hela細(xì)胞的體外抑制作用，研究表明海罌粟堿是對Hela細(xì)胞抑制活性最強的（IC50=8.2 μg/mL），利用光譜研究它們的作用機(jī)理，結(jié)果顯示7 種生物堿都能與DNA 有效結(jié)合，樟堿、無根藤堿和荷包牡丹堿具有干擾拓?fù)洚悩?gòu)酶催化活性作用。

上述研究均只是在體外，未見進(jìn)行體內(nèi)研究。程濤［41］通過臺盼藍(lán)染色法以及MTT 法研究無根藤生物堿對小鼠肝癌細(xì)胞（H22）的體外抑制作用；采用建立小鼠肝癌H22 腹水瘤模型和實體瘤模型檢測無根藤生物堿對小鼠肝癌H22 的體內(nèi)抑制作用。結(jié)果顯示無根藤生物堿對小鼠肝癌H22 細(xì)胞的生長在體外有顯著的抑制活性，其抑制作用具有劑量和時間依賴效應(yīng)；無根藤生物堿能一定程度上延長小鼠肝癌H22 腹水型小鼠的生命作用，也對小鼠肝癌H22 實體瘤有明顯的抑制活性。其研究均進(jìn)行體外體內(nèi)研究，具有深刻研究意義，由于抗腫瘤作用靶點眾多，未來可多途徑探索無根藤生物堿可能存在的作用機(jī)制。

2.5 抗血小板聚集

Wu 等［16］研究發(fā)現(xiàn)無根藤生物堿（樟堿、無根藤胺、N-甲基樟堿、原荷包牡丹堿、小唐松草堿和cathafiline）對兔子血小板聚集有顯著的抑制活性。結(jié)果顯示樟堿（100 μg/mL）對ADP（20 μg/mL）、膠原蛋白（10 μg/mL）、花生四烯酸（100 μg/mL）、血小板活化因子（3.6 μg/mL）誘導(dǎo)的血小板聚集具有完全抑制作用；在這些分離得到的化合物中樟堿是抗血小板聚集最強的；N-甲基樟堿對ADP、膠原蛋白、花生四烯酸3 種物質(zhì)誘導(dǎo)的血小板聚集有完全抑制作用；cathafiline 對花生四烯酸誘導(dǎo)的血小板聚集有完全抑制作用。Chang 等［8］采用了EDTA 處理的兔血液進(jìn)行抗血小板聚集試驗，同樣也證明這六種無根藤生物堿對ADP、花生四烯酸、膠原蛋白和血小板活化因子誘導(dǎo)的血小板聚集有顯著的抑制作用。

2.6 抗血管收縮

Tsai 等［11］通過血管張力試驗測試無根藤生物堿的血管松弛作用，結(jié)果表明cassythic acid、無根藤堿、neolitsine 和荷包牡丹堿具有顯著的血管松弛效果；1，1，2-methylenedioxy-3，10，11-trimethoxyapor?phine、O-甲基淡黃色巴亭堿和（-）-salutaridine 具有溫和的血管松弛作用。Wu 等［16］的研究發(fā)現(xiàn)從無根藤中分離得到的生物堿（樟堿、N-甲基樟堿）對高鉀（80 mg/mL）和去甲腎上腺素（3 μg/mL）誘導(dǎo)的血管收縮有強烈的抑制作用。Chang 等［9］的研究證明了無根藤中分離得到的生物堿（小唐松草堿）具有對高鉀和去甲腎上腺素引起的血管收縮有抑制作用。目前研究較多的是無根藤中生物堿抑制高鉀和去甲腎上腺素引起的血管收縮。

3 結(jié)語

無根藤主要化學(xué)成分是阿樸菲類生物堿，還有黃酮及揮發(fā)油等其他成分。但關(guān)于無根藤中的化合物分離還不夠充分，從無根藤中分離得到的部分化合物少見繼續(xù)深入活性研究和作用機(jī)制闡明。雖有部分文獻(xiàn)報道無根藤具有抗糖尿病、抗腫瘤、抗血小板聚集等方面的作用，但對它們的作用機(jī)制研究尚少，少有對無根藤提取物和化合物在體外細(xì)胞實驗、動物實驗及作用靶點方面的研究。因此，對于無根藤的提取物及化學(xué)成分的系統(tǒng)性研究仍待加強，值得應(yīng)用現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)探究它們的作用途徑和機(jī)制，為其以后的深入開發(fā)利用奠定基礎(chǔ)。尤其是圍繞無根藤生物堿類化合物進(jìn)行更全面、深入的研究，推動無根藤的藥物開發(fā)研究，且為無根藤開發(fā)現(xiàn)代新型藥物提供理論依據(jù)。