張粉娟，董兵衛(wèi)，沈江立，張渭波，羅小紅

咸陽市中心醫(yī)院病理科1、肛腸外科2，陜西 咸陽 712000

結(jié)直腸癌是常見的消化道惡性腫瘤之一，受遺傳、飲食等因素影響較大。近幾年，隨著人民生活水平的提高及飲食結(jié)構(gòu)的改變，結(jié)直腸癌的發(fā)病率逐年增高[1]。目前，結(jié)直腸癌的治療仍以手術(shù)切除為首選，輔以放射治療、化療藥物治療及中醫(yī)藥治療等，雖然可在一定程度上延長患者生存期，但進(jìn)展期結(jié)直腸癌患者仍有發(fā)生遠(yuǎn)端侵襲轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)，是導(dǎo)致患者預(yù)后較差的主要原因[2-3]。因此，探尋有效的檢測(cè)指標(biāo)來監(jiān)控患者腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移情況對(duì)提高患者預(yù)后生存率至關(guān)重要。平滑肌22 alpha蛋白(SM22α)是鈣調(diào)蛋白家族的一種肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白，包含一個(gè)氨基末端CH結(jié)構(gòu)域和一個(gè)羧基末端鈣調(diào)蛋白樣重復(fù)基序，可以通過與肌動(dòng)蛋白微絲結(jié)構(gòu)結(jié)合，而影響細(xì)胞骨架的重塑[4]。相關(guān)研究表明，SM22α與細(xì)胞增殖、遷移、氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)等密切相關(guān)[5]，LIANG等[6]發(fā)現(xiàn)SM22α在結(jié)直腸癌患者中出現(xiàn)低表達(dá)，且低表達(dá)患者預(yù)后較高表達(dá)差。轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)是轉(zhuǎn)化生長因子β超家族的多肽成員，可以以自分泌或旁分泌的方式通過細(xì)胞表面的受體信號(hào)途徑調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、分化和凋亡[7]。相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，TGF-β1在大腸癌組織中高表達(dá)，提示其可能與大腸癌的發(fā)生、發(fā)展、浸潤和轉(zhuǎn)移過程密切相關(guān)[8]，但目前關(guān)于SM22α和TGF-β1在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)水平及其與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移等方面研究較少?；诖?，本研究檢測(cè)了結(jié)直腸癌組織中SM22α和TGF-β1的表達(dá)水平，并探討其與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析咸陽市中心醫(yī)院2018年4月至2019年5月期間收治的結(jié)直腸癌患者的臨床資料。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均符合結(jié)直腸癌診斷標(biāo)準(zhǔn)[9]；②均經(jīng)影像學(xué)和病理學(xué)檢查確診為良性或惡性腫瘤；③均經(jīng)手術(shù)治療，且術(shù)前均未接受放化療者；④臨床病例資料完整者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤患者；②伴有其他消化系統(tǒng)重大疾病者；③心、肝、腎功能不全者。依據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)共納入104例結(jié)直腸癌患者，其中男性65例，女性39例；年齡42～63歲，平均(52.51±5.35)歲；高分化29例，中分化35例，低分化40例；Dukes分期：A期/B期46例，C期/D期46例。臨床隨訪過程中，31例出現(xiàn)侵襲轉(zhuǎn)移情況。以同期于本院接受治療的87例良性結(jié)直腸腫瘤患者作為對(duì)照組，其中男性56例，女性31例；年齡44～67歲，平均(55.42±5.91)歲。兩組患者的年齡、性別等一般資料比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。本研究獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 檢測(cè)方法 于術(shù)后30 min內(nèi)采集所有患者標(biāo)本，應(yīng)用免疫組化S-P法檢測(cè)結(jié)直腸病變組織中SM22α和TGF-β1的表達(dá)。SM22α多克隆抗體購自美國AB-CAM公司，TGF-β1多克隆抗體購自上海雅吉生物科技有限公司，SM22α抗體濃度按照1∶150稀釋，TGF-β1抗體濃度按照1∶100稀釋。將組織切片置于pH 6.0的檸檬酸鹽緩沖溶液中微波修復(fù)，自然冷卻后用磷酸鹽緩沖液(PBS)浸泡5 min×3次。DAB(北京中杉公司)顯色，蘇木精復(fù)染。實(shí)驗(yàn)中均設(shè)陰性及陽性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) TGF-β1染色標(biāo)準(zhǔn)以細(xì)胞核中出現(xiàn)清晰棕色或棕褐色棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞，TGF-β1陽性細(xì)胞數(shù)大于10%為陽性表達(dá)；SM22α以細(xì)胞核中出現(xiàn)清晰棕色顆粒為陽性細(xì)胞，陽性細(xì)胞數(shù)大于10%為陽性表達(dá)[10-11]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。年齡等計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，行t檢驗(yàn)；性別、SM22α和TGF-β1陽性表達(dá)等計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)分析；采用受試者特征曲線(ROC)評(píng)估SM22α和TGF-β1表達(dá)對(duì)結(jié)直腸癌患者腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的評(píng)估效能。以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 研究組與對(duì)照組患者的SM22α和TGF-β1表達(dá)水平比較 研究組患者的SM22α陽性表達(dá)率明顯低于對(duì)照組，TGF-β1陽性表達(dá)率明顯高于對(duì)照組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表1。

表1 研究組與對(duì)照組患者的SM22α和TGF-β1表達(dá)水平比較[例(%)]

2.2 研究組不同Dukes分期患者的SM22α和TGF-β1表達(dá)水平比較 研究組A期/B期SM22α的陽性表達(dá)率明顯高于C期/D期，TGF-β1的陽性表達(dá)率明顯低于C期/D期，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表2。

表2 研究組不同Dukes分期患者的SM22α和TGF-β1表達(dá)水平比較[例(%)]

2.3 侵襲轉(zhuǎn)移組與非侵襲轉(zhuǎn)移組患者的SM22α和TGF-β1表達(dá)水平比較 侵襲轉(zhuǎn)移組的SM22α陽性表達(dá)率明顯低于非侵襲轉(zhuǎn)移組，TGF-β1陽性表達(dá)率明顯高于非侵襲轉(zhuǎn)移組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表3。

表3 侵襲轉(zhuǎn)移組與非侵襲轉(zhuǎn)移組患者的SM22α和TGF-β1表達(dá)水平比較[例(%)]

2.4 SM22α和TGF-β1與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的相關(guān)性 經(jīng)Spearman秩相關(guān)分析結(jié)果顯示，結(jié)直腸癌患者SM22α水平與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)(r=-0.471，P＜0.05)，TGF-β1水平與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)(r=0.543，P＜0.05)。

2.5 結(jié)直腸癌患者SM22α、TGF-β1單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)對(duì)腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的評(píng)估價(jià)值 ROC分析結(jié)果顯示，SM22α、TGF-β1單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)判斷腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的ROC曲線下面積分別為0.647、0.676、0.739，檢測(cè)靈敏度分別為68.2%、72.7%、84.1%，特異性分別為61.3%、62.5%、63.7%，見表4和圖1。

表4 SM22α、TGF-β1單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)對(duì)腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的評(píng)估價(jià)值

圖1 SM22α、TGF-β1以及聯(lián)合檢測(cè)對(duì)腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的ROC曲線圖

3 討論

目前，臨床對(duì)于結(jié)直腸癌的治療手段較為成熟，以手術(shù)切除為主，輔以放、化療等手段，在臨床取得一定治療效果。但近年來，我國結(jié)直腸癌死亡率仍在持續(xù)上漲。調(diào)查研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致預(yù)后不良的主要原因[12]，嚴(yán)重威脅著患者的生命健康。早在20世紀(jì)50年代，研究者們就指出腫瘤的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多環(huán)節(jié)、多步驟的復(fù)雜過程。因此，尋找與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的相關(guān)因子，實(shí)現(xiàn)對(duì)結(jié)直腸癌患者預(yù)后的早期監(jiān)測(cè)，對(duì)于延長患者生命周期具有重要的臨床指導(dǎo)意義。

SM22α是一種分子量為22 kDa的重要細(xì)胞骨架蛋白，又稱為轉(zhuǎn)凝蛋白，于1987年首次從雞胗中分離所得[13]。有研究表明，SM22α可與細(xì)胞骨架的肌動(dòng)蛋白相結(jié)合，參與血管平滑肌細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)重塑。故在正常血管壁的血管平滑肌細(xì)胞中呈現(xiàn)高表達(dá)，而當(dāng)血管內(nèi)皮受損時(shí)，SM22α表達(dá)水平會(huì)降低甚至消失[14]。腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的首要條件是血管新生，而SM22α在血管平滑肌細(xì)胞分化、收縮和血管新生內(nèi)膜形成過程中起著重要作用。相關(guān)研究表明，SM22α在某些腫瘤組織中表達(dá)下調(diào)，可能是導(dǎo)致腫瘤組織新生血管形成的重要原因，可為腫瘤的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移提供更多的途徑[15-16]。TGF-β1是一種多肽結(jié)構(gòu)的細(xì)胞因子，能夠參與細(xì)胞生長、分化、遷移過程，在多種腫瘤組織中呈現(xiàn)高表達(dá)[17-18]。徐榮偉等[19]研究表明，TGF-β1在大腸癌組織中高表達(dá)，這提示TGF-β1在大腸癌的發(fā)生、發(fā)展、浸潤和轉(zhuǎn)移過程中起著十分重要的作用。TGF-β1、SM22α均在血管新生中發(fā)揮著重要的作用，但迄今為止關(guān)于SM22α和TGF-β1在結(jié)直腸癌腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移等方面相關(guān)研究報(bào)道較少。本研究結(jié)果顯示，研究組患者SM22α陽性表達(dá)率明顯低于對(duì)照組，TGF-β1陽性表達(dá)率明顯高于對(duì)照組；隨Dukes分期的增加，SM22α陽性表達(dá)率降低，而TGF-β1陽性表達(dá)率升高。以上結(jié)果提示SM22α和TGF-β1可能在結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮著重要作用。本研究結(jié)果還顯示，侵襲轉(zhuǎn)移組SM22α陽性表達(dá)率低于非侵襲轉(zhuǎn)移組，而TGF-β1陽性表達(dá)率高于非侵襲轉(zhuǎn)移組，提示SM22α和TGF-β1可能與結(jié)直腸癌腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。進(jìn)一步相關(guān)性分析顯示，SM22α與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)，TGF-β1與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，說明隨著腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移，SM22α呈現(xiàn)低表達(dá)，TGF-β1呈現(xiàn)高表達(dá)。分析其原因，細(xì)胞內(nèi)外環(huán)境失衡和細(xì)胞功能紊亂是腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的重要環(huán)節(jié)，SM22α低表達(dá)可能影響細(xì)胞骨架動(dòng)力學(xué)和調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，從而導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)外環(huán)境失衡和細(xì)胞功能紊亂，所以在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移過程中，SM22α呈現(xiàn)出低表達(dá)。血管新生是腫瘤發(fā)展及轉(zhuǎn)移中不可缺少的過程，TGF-β1可能通過影響血管內(nèi)皮生長因子的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤血管新生，從而更有利于腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移。經(jīng)ROC分析顯示，SM22α、TGF-β1以及聯(lián)合檢測(cè)腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的ROC曲線下面積分別為0.663、0.690、0.731，檢測(cè)靈敏度分別為80.3%、78.6%、84.5%，特異性分別為60.8%、60.0%、61.8%，并且聯(lián)合檢測(cè)的ROC曲線下面積高于單項(xiàng)檢測(cè)，檢測(cè)靈敏度和特異性亦高于單項(xiàng)檢測(cè)，提示SM22α、TGF-β1檢測(cè)可用于評(píng)估結(jié)直腸癌患者腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移情況，且聯(lián)合檢測(cè)評(píng)估效果更佳。

綜上所述，SM22α、TGF-β1與結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展及腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，結(jié)直腸癌組織中SM22α的低表達(dá)及TGF-β1的高表達(dá)可預(yù)測(cè)腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移情況，且兩者聯(lián)合檢測(cè)預(yù)測(cè)效果更佳。但SM22α、TGF-β1在結(jié)直腸癌腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移過程中的具體作用機(jī)制尚不清楚，仍需要做大量更加深入的研究，以期為臨床提供更加精準(zhǔn)的診療依據(jù)，提高結(jié)直腸癌患者預(yù)后生存率。